Heymann肾炎致病原受体相关蛋白cDNA分子克隆及其mRNA在肾小球上皮细胞的表达

Ｈｅｙｍａｎｎ肾炎是一种用于人类膜性肾病的自身免疫病模型。ｇｐ３３０糖蛋白和４４ｋＤ受体相关蛋白（ＲＡＰ组成Ｈｅｙｍａｎｎ肾炎抗原复合物（ＨＮＡＣ），被证明是ＨＮ的主要致病原。本研究中，我们用ＲＴ－ＰＣＲ技术，克隆了ＲＡＰ基因，用Ｎｅｓｔｅｄ－ＰＣＲ技术克隆了ＲＡＰ羧基端１１８个氨基酸的基因，ＤＮＡ序列分析克隆基因与ＲＡＰ相同，原位杂交发现ＲＡＰｍＲＮＡ在肾小球上皮细胞表达。     

小鼠TIL,LAK细胞穿孔蛋白mRNA表达与其抗瘤作用的关系

用原位杂交法检测小鼠不同培养时期的ＴＩＬ和ＬＡＫ细胞中穿孔蛋白（ＰＦＰ）ｍＲＮＡ的表达，并用显微图象分析系统处理检测ＰＦＰＭＲＮＡ表达水平。结果表明：ＴＩＬ细胞的ＰＦＰＭＲＮＡ表达在第１４、２１天时达高峰，２８天时开始下降；而ＬＡＫ细胞则在第６７天时即达到较高水平，２１天时开始下降，但ＴＩＬ细胞的表达水平显著高于ＬＡＫ。将同时期的ＴＩＬ及ＴＡＫ细胞进行体内外抗瘤活性测定，发现两者的ＰＦＰｍＲＮＡ水     

脂质体干扰素对恶性肿瘤切除术后抑制肺转移的研究

恶性肿瘤术后发生远处器官转移是造成肿瘤治疗失败的主要原因。本实验用脂质体干扰素治疗已切除了恶性原发灶的Ｃ５７ＢＬ／６小鼠，结果用脂质体干扰素的治疗组其生存期较对照组有明显延长（Ｐ＜０．０１）；肺部转移灶比对照组显著减少（Ｐ＜０．０１）。提示脂质体作为一种理想的载体包裹干扰素后能通过激活巨噬细胞的途径，有效的防止恶性肿瘤术后肺转移延长生存期，这为临床应用抑制肿瘤转移探索了一条新途径。     

Heymann肾炎致病原受体相关蛋白羧基端多肽表达的研究

本研究中，用ＰＣＲ方法扩增了受体相关蛋白基因第６３３～９５７碱基ｃＤＮＡ片段。将编码成熟分子量为４４×１０３受体相关蛋白和羧基端１０８氨基酸多肽的ｃＤＮＡ克隆到表达载体ｐＧＥＸ－４Ｔ－１内，限制性图谱分析测定了插入子的方向并用ＤＮＡ序列分析加以证实。带有质粒ｐＧＥＸ－Ｒ９３（包含完全ＲＡＰｃＤＮＡ９５７碱基）的重组菌过度表达了分子量为６５×１０３融合蛋白，其含量占总蛋白的３９．４％。带有质粒ｐＧＥＸ－Ｒ３５（包含ＲＡＰｃＤＮＡ３２４碱基）表达了４０×１０３的融合蛋白，蛋白含量３２．２％。通过谷胱甘肽亲和层析柱，从细菌溶解物中纯化了融合蛋白，每升培养物能纯化到１０～２０ｍｇ的蛋白，Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ分析证明抗Ｒ９３和抗Ｒ３５两种抗血清特异性结合到大鼠肾皮质微绒毛提取物中的４０×１０３的带。间接免疫荧光显示抗Ｒ９３和抗Ｒ３５两种抗体标记肾近曲小管刷状缘抗原。文中对表达的受体相关蛋白的意义和其抗原性进行了讨论。     

Ⅰ型嗜肺军团菌杂交瘤细胞株的建立和鉴定

用Ⅰ型嗜肺军团菌(Ⅰ型LDB)颗粒生抗原免疫的BALB／C小鼠脾细胞与小鼠骨髓癌SP2／0细胞在PEG怍用下融合，经二次克隆化后建立了一株分泌抗Ⅰ型LDB单克隆抗体的细胞株(No．19 McAb)。经ELISA、间接血凝试验、双向琼脂扩散试验、结合力试验，染色体检查及SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳的检测，证实此杂交瘤所分泌的McAb属小鼠IgG类，对Ⅰ型LDB是特异的。No．19 McAb将有助于Ⅰ型LDB的检测及其亚型的分析与流行病学调查．     

Avidin—HRP制备及其实验因素的控制

本文报导将过碘酸法连接亲和素和辣根过氧化物酶用于ELISA技术,以增加标准ELISA的敏感性用于检测人IgG。亲和素与活化辣根过氧化物酶克分子比例与敏感性相关,1:1.5比例最为敏感。比较了化学修饰亲和素—辣根酶酸和亲和素—辣根酶两种连接物。前者用于BA—ELISA,敏感性限度高于标准ELISA 4倍,并且实验结果相当稳定;亲和素—辣根酶用于BA—ELISA,比普通ELISA敏感4—16倍,但是,由于存在强非特异性吸附和高变异系数,对于大多数用途的检测是不能接受的。其它可能改善BA—ELISA的实验因素作了讨论。     

Heymann肾炎自身单克隆抗体C_（3－6）制备和特征

为了进一步研究Ｈｅｙｍａｎｎ肾炎（ＨＮ）的病理损伤机制，发展有效的治疗手段。方法应用大鼠肾小管刷状缘抗原ＦＸＩＡ免疫近交系Ｌｅｗｉｓ大鼠，诱导了主动型ＨＮ模型。并用该ＨＮ大鼠的淋巴细胞与小鼠ＳＰ２／０骨髓瘤细胞融合，建立异种大鼠／小鼠之间的杂交瘤细胞株，产生了大鼠抗致病原Ｃ３－６自身单克隆抗体（ＭｃＡｂ）。结果ＳＤＳ－ＰＡＧＥ和Ｗｅｓｔｅｒｎ－Ｂｌｏｔ显示，ＭｃＡｂＣ３－６识别分子量为３３００００的刷状缘抗原。ＭｃＡｂＣ３－６诱导的被动型ＨＮ大鼠免疫组化和免疫电镜表明该ＭｃＡｂＣ３－６在体内识别肾小球基底膜上皮足突表面抗原，并与之结合形成免疫沉积，其识别的抗原分布与文献报导ｇｐ３３０抗原分布相似。结论证明ＭｃＡｂＣ３－６是针对致病原ｇｐ３３０的自身ＭｃＡｂ。     

Tamm-Horsfall糖蛋白单克隆抗体制备及其临床应用

用0.58mol/L NaCl沉淀提取Tamm-Horsfall糖蛋白(THP)制备了三株抗THP单克隆抗体(McAb)。免疫印迹技术(Immunoblotting Technigue,IBT)证明这些McAb特异性地和94kD THP抗原结合,ELISA抑制试验表明三株McAb识别THP抗原的不同位点。用McAb双夹心ELISA法测定尿THP的含量,表明尿THP含量与血尿素氮(BUN)、血肌酐(Scr)呈显著负相关(P<0.01),与内生肌酐清除率(Ccr)呈明显正相关(P<0.01),BUN、Scr、Ccr正常的各种肾病尿THP含量无明显异常(P<0.05)。测定尿THP含量可作为判断肾功能损害程度的良好指标。     

rIL－2激活的小鼠粘附性LAK细胞抗瘤活性和扩增的研究

小鼠脾脏淋巴细胞在体外ｒＩＬ－２培养下，可粘附到塑料板或玻璃瓶上，在除去非粘附性淋巴细胞后，粘附性ＬＡＫ细胞（Ａ－ＬＡＫ）在ｒＩＬ－２存在的条件下，４天内可迅速扩增３６倍，与ＬＡＫ细胞抗瘤活性相比，Ａ－ＬＡＫ细胞抗瘤活性明显增强，培养２０天后其抗瘤活性仍可达３３％，从形态学分析，Ａ－ＬＡＫ细胞主要由大颗粒淋巴细胞组成。