家兔喉淋巴管的微细分布

目的进一步明确家兔喉淋巴管的微细分布。方法采用5′-核苷酸酶-碱性磷酸酶双重染色法(5′-Nase-ALP),半薄切片光镜观察,超薄切片电镜观察。结果喉壁除韧带和软骨层外,其粘膜层、粘膜下层、肌层和外膜均可见毛细淋巴管和淋巴管,其分布的密度不同。喉各分区淋巴管分布具有显著差异,其中以会厌喉面分布密度最高,声襞淋巴管的分布密度最低。在喉的三个间隙即会厌前间隙、声门旁间隙和任克氏间隙中均存在淋巴管,但检出率较低。结论喉壁除韧带和软骨层外,其余各层均存在毛细淋巴管和淋巴管,喉各分区淋巴管分布密度不同。     

金属基质蛋白酶与动脉粥样硬化

动脉粥样硬化性心血管疾病被称为发达国家的头号杀手,近年来,随着我国人民生活水平逐步提高,该病在我国的发病率和死亡率也逐年上升.世界卫生组织预测,在世界范围内的传染性疾病病死率得到有效控制后,到2020年心血管疾病将成为全世界第一死因[1].     

普罗布考对糖基化终末产物引发心脏微血管内皮功能紊乱的作用

目的:观察普罗布考（probucol）对糖基化终末产物（AGEs）作用后的心脏微血管内皮细胞iNOS表达的影响。方法: 原代培养心脏微血管内皮细胞,AGEs（100 mg/L）体外模拟高糖环境,在probucol(5 μmol/L,10 μmol/L,20 μmol/L) 作用后,检测ROS、NO和iNOS变化情况。结果: 与AGEs组比较,probucol组中ROS蛋白表达降低,NO生成增加,而 iNOS蛋白表达降低,且显示有浓度依赖性。结论: probucol可能通过对抗氧化应激的途径,缓解AGEs引发的心脏微血管内皮功能障碍。     

糖基化终末产物对大鼠骨髓来源内皮祖细胞增殖、凋亡和管腔形成的影响

目的:观察糖基化终末产物(AGEs)对骨髓来源内皮祖细胞(EPCs)动员及生物功能的影响。方法:采用不同浓度牛血清白蛋白糖基化终末产物(BSA-AGEs)(50～200mg/L)分别作用EPCs(0～24h),检测EPCs的增殖、凋亡及管腔形成能力的变化。结果:随着AGEs浓度增加及作用时间的延长,EPCs的凋亡率升高,而增殖及管腔形成能力降低(P<0.05)。结论:AGEs对EPCs的存活和增殖具有损害作用,而且还对EPCs功能有破坏作用。     

大鼠脂肪源性干细胞诱导分化为成骨细胞的免疫原性改变

目的观察脂肪源性干细胞(adipose-derived stem cells,ADSC)体外成骨诱导后的免疫原性。方法体外原代培养ADSC,成骨诱导1、7、14、21 d后,采用流式细胞仪检测各组主要组织相容性复合体Ⅱ类(MHC-Ⅱ)的表达,单向混合淋巴细胞培养(mixed lymphocyte culture,MLC)测定刺激指数(stimulation index,SI)。结果 ADSC成骨诱导后1、7、14、21 d均未检测到MHC-Ⅱ表达;MLC未测到细胞明显增殖(1.15±0.12～1.16±0.18,P>0.05)。结论 ADSC体外成骨诱导后免疫原性低表达,适合作为异体移植细胞。     

姜黄素对淋巴管内皮细胞生成的影响

目的：探讨姜黄素对淋巴管内皮细胞（lymphatic endothelial cells,LECs）增殖和游走的影响。旨在筛选出安全、实用、有效的淋巴管生成抑制剂。方法：取健康猪的胸导管内皮细胞,进行 LECs 的原代培养并鉴定。采用 MTT 法观察姜黄素对 LECs 增殖的影响：采用 Hoechst 33258荧光染色法检测 LECs凋亡。结果：经鉴定,所培养的细胞为典型的 LECs。采用 MTT 法,当姜黄素的浓度≥5μg/mL 时,对LECs 的增殖具有抑制作用（P ＜0．05）;当姜黄素的浓度≥10μg/mL 时,对 LECs 的增殖具有明显的抑制作用（P ＜0．01）。 Hoechst 33258荧光染色检测证实,经姜黄素处理后 LECs,可观察到其核周围有凋亡小体。结论：姜黄素对 LECs 的增殖具有明显的抑制作用。     

VEGF在小剂量超短波促进种植骨髓间充质干细胞脱细胞支架修复大鼠坐骨神经损伤中的表达

目的 探讨血管内皮生长因子(VEGF)在小剂量超短波对种植骨髓间充质干细胞(BMSC)脱细胞支架修复大鼠坐骨神经损伤中的表达.方法 将培养至第3代的大鼠BMSC注入已制备的脱细胞支架内,然后置于培养箱内联合培养3 d,无茵条件下缝合到神经缺损处.实验鼠分为3组,即达尔伯克改良伊格尔培养基(DMEM)组、支架内注射BMSC组和注射BMSC后应用超短波(USW)治疗组;超短波治疗组在术后2 d用小剂量超短波对移植动物的神经缺损处治疗;移植后第2,4,8和12周检测再生的神经中VEGF、S-100蛋白表达.结果 各组VEGF在损伤后再生即有表达,并随时间延长呈上升趋势,在第4周达到顶峰,超短波治疗组表达高于其他组(P<0.05).结论 VEGF在超短波治疗早期的高水平表达可加速种植的BMSC分化或迁移的速度,并能促使再生神经周围的血供增加.     

KLF7对小鼠脱细胞异体神经支架移植后运动功能的影响

目的:探讨核转录因子KLF7对脱细胞异体神经支架(ANA)移植修复坐骨神经缺损后小鼠运动轴突再生和运动功能恢复的影响。方法:制作C57BL/6小鼠坐骨神经缺损模型,用ANA进行桥接修复,在ANA注射腺相关病毒2(AA2)或腺相关病毒2-KLF-7(AAV2-KLF7,2μl,1×10~(11)病毒颗粒)。于修复术后4周,Western Blot和免疫荧光染色检测ANA内KLF7蛋白表达,NF和S100免疫荧光染色检测ANA内轴突再生和髓鞘生成,神经示踪剂荧光金(FG)逆行标记检测运动轴突再生,坐骨神经运动功能指数(SFI)和电生理检测运动功能的恢复。结果:AAV2-KLF7注射ANA后4周,ANA内KLF7蛋白表达显著增高,NF和S100表达显著增加,FG阳性标记脊髓运动神经元的数量增加,坐骨神经功能指数增加,电生理动作电位波幅增大,潜伏期缩短(P0.05)。结论:KLF7促进小鼠脱细胞异体神经支架修复坐骨神经缺损后运动轴突再生和髓鞘形成,有助于运动功能恢复。     

木耳多糖影响家兔动脉粥样硬化斑块中基质金属蛋白酶-13表达的研究

目的观察木耳多糖对实验性家兔动脉粥样硬化斑块中基质金属蛋白酶-13(MMP-13)表达的影响,从而进一步探讨木耳多糖在动脉粥样硬化中的作用。方法将40只健康雄性新西兰白兔随机分为3组:空白对照组(正常组)8只,每天喂普通饲料;阳性对照组(模型组)16只,每天给普通饲料+1g胆固醇+15%猪油;实验组(预防组)16只,每天给普通饲料+1g胆固醇+1g木耳多糖+15%猪油。16周末所有实验用兔麻醉处死,各组行主动脉粥样硬化病理形态学观察,包括大体形态学观察、光镜观察。根据形态学特点分成稳定斑块和不稳定斑块。通过免疫组织化学、特殊染色及电镜对斑块内的病变进行定量分析。结果特殊染色(Masson特染)可见模型组的粥样硬化斑块中有大量胶原纤维增生,而预防组蓝染的胶原纤维数量较模型组少。S-P免疫组织化学可见模型组中MMP-13在粥样斑块中平滑肌细胞及泡沫细胞中的细胞核及细胞质中呈阳性表达,而正常血管壁表达阴性。预防组与模型组对照结果显示,MMP-13在预防组中的表达较模型组明显减少。结论木耳多糖降低斑块中MMP-13的表达,进一步说明其消退斑块的作用;木耳多糖能够降低胶原纤维的生成,说明其不仅可以降低血脂,还可能抑制胶原纤维的产生从而抑制AS的发生发展。     

黄芪皂甙Ⅳ联合ADSC对坐骨神经缺损后大鼠运动功能的修复作用

目的 探讨黄芪皂甙Ⅳ联合脂肪源性干细胞（ADSC）对大鼠坐骨神经缺损后运动功能恢复的影响.方法 将40只清洁级雄性SD大鼠随机分为4组各10只,4组均采用化学萃取脱细胞方法制备大鼠缺损脱细胞神经支架（ARSN）.ARSN组注入等剂量DMEM于ARSN;黄芪皂甙Ⅳ组注入等剂量DMEM于ARSN,并于术前5 min及术后12、24 h腹腔注射黄芪皂甙Ⅳ（20 mg/kg）;ADSC组注入等剂量ADSC（1×10^6/mL）于ARSN;黄芪皂甙Ⅳ＋ADSC组同时采用黄芪皂甙Ⅳ组、ADSC组的方法.用各组的神经移植体桥接长1 cm坐骨神经两断端间的缺损造模,术后8周取材.检测各组坐骨神经功能指数（SFI）、神经电生理参数（神经传导速度、潜伏期、波幅）及胫前肌湿重比率.结果 与ARSN组比较,黄芪皂甙Ⅳ组、ADSC组和黄芪皂甙Ⅳ＋ADSC组术后各时点SFI增高,神经传导速度增快,潜伏期缩短,波幅增大,胫前肌湿重比率增高（P均＜0.05）;与黄芪皂甙Ⅳ组比较,黄芪皂甙Ⅳ＋ADSC组术后56 d SFI增高,神经传导速度增快,潜伏期缩短,波幅增大,胫前肌湿重比率增高（P均＜0.05）.结论 黄芪皂甙Ⅳ联合ADSC移植能促进大鼠神经再生和运动功能恢复,其作用优于单独应用黄芪皂甙Ⅳ或ADSC.