构建玻片蛋白质芯片的实验研究

目的:探讨玻片蛋白质芯片的构建方法及其中间操作条件的选择与优化。方法:利用生物芯片点样仪将超微量蛋白质点到经特殊处理的玻璃片表面,然后选用不同的化学试剂对玻片背景进行封闭;再用荧光素标记的蛋白质与点样蛋白杂交;最后用生物芯片分析仪扫描成像并进行分析,比较不同条件下芯片的显示效果。结果:蛋白质样品与片基稳定结合,并保持原活性状态;封闭试剂选用酪蛋白或明胶效果较佳;点样探针与其特异蛋白质抗体可稳定结合,结合效果与点样蛋白浓度在一定范围内呈正相关;在1.6 cm×1.6 cm的玻璃片面积上,构建了36×36=1269点的蛋白质芯片。结论:本实验条件下,蛋白质抗原或抗体可以稳定地固定于经过处理的玻璃片表面.制成免疫型蛋白芯片,并可通过随后的抗原抗体反应与荧光素标记的相应抗体或抗原结合,用生物芯片分析仪可对其荧光信号进行检测分析。     

aFGF和Genistein对AGZY—83A细胞内PKC活性及[Ca^2＋]i的影响

目的：探讨ａＦＧＦ及ＴＰＫ抑制剂Ｇｅｎｉｓｔｅｉｎ对ＡＧＺＹ－８３Ａ细胞内ＰＫＣ活性游离Ｃａ＾２＋浓度的影响。方法：用不同浓度的ａＦＧＦ和Ｇｅｎｉｓｔｅｉｎ诱导ＡＧＺＹ－８３Ａ细胞,（γ－Ｐ＾３２）－ＡＴＰ标记的Ｈｉｓｔｏｎｅ Ⅰ为底物,液体闪烁测定ＰＫＣ活性;Ｆｕｒａ－２／ＡＭ负载荧光光度法测定细胞内游离Ｃａ＾２＋浓度。结果：ａＦＧＦ诱导后,细胞内ＰＫＣ活性及Ｃａ＾２＋浓度升高,且与ａＦＧＦ呈剂     

碱性成纤维细胞生长因子对卵巢癌的影响

目的观察Ras-Raf-ERK 1/2途径介导的碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)对卵巢癌细胞系CAOV3细胞增殖和凋亡影响,探讨bFGF及其信号转导途径与卵巢癌发生发展关系。方法以bFGF和促细胞分裂剂激活性蛋白激酶1(MEK1)抑制剂PD98059处理CAOV3细胞,用四甲基偶氮噻唑蓝(MTT)法检测细胞增殖情况,流式细胞术检测细胞凋亡情况,蛋白印迹(Western blot)检测细胞外信号调节蛋白激酶1/2(ERK1/2)的活性。结果bFGF处理后细胞增殖比明显增加,且与bFGF水平呈剂量依赖关系,bFGF浓度为75 ng/ml时细胞增殖比最高为140%;bFGF使无血清诱导的凋亡细胞比例下降[(33.20±5.32)%~(2.38±3.36)%];bFGF诱导ERK1/2活性增高。PD98059可抑制bFGF的这些作用。结论bFGF通过Ras-Raf-ERK 1/2途径介导,促进卵巢癌CAOV3细胞增殖,抵抗无血清诱导凋亡。在卵巢癌发生发展过程中,bFGF信号传递发挥了重要作用。     

XAV939抑制人神经母细胞瘤细胞的增殖

目的探讨小分子抑制剂XAV939对人神经母细胞瘤(NB)细胞系SH-SY5Y细胞的抗增殖和诱导凋亡的作用,及其可能机制。方法采用MTT法检测XAV939对SH-SY5Y细胞活力的抑制作用,并确定最佳作用浓度。然后采用Annexin V-FITC法检测XAV939处理后早期凋亡细胞百分比,Hoechst33342染色法观察凋亡细胞核形态,克隆形成实验检测细胞体外增殖能力的变化。Western blotting检测Wnt/β-连环蛋白(β-catenin信号通路的关键蛋白和抗凋亡蛋白Bcl-2的变化。结果 MTT结果显示,1μmol/L XAV939作用24h后,SH-SY5Y细胞增殖的抑制率有明显上升。XAV939处理后48h及72h,凋亡细胞百分比显著高于对照组,且细胞呈现出不同程度的凋亡形态。此外,XAV939可显著降低SH-SY5Y细胞的体外克隆形成率,降低Wnt/β-catenin信号通路关键蛋白β-catenin,Cyclin D1和c-Myc及抗凋亡蛋白Bcl-2的表达。结论 XAV939可能部分通过抑制Wnt/β-catenin信号通路而抑制SH-SY5Y细胞的增殖。     

肺癌与良性胸腔积液蛋白质双向电泳图谱差异分析

目的:建立肺癌与肺良性胸腔积液的双向电泳图谱,分析二者表达蛋白质的差异及特点。方法:利用固相pH梯度双向聚丙烯酰胺凝胶电泳法分离肺癌和肺良性胸腔积液中的总蛋白质。凝胶经银染色后用PDQUEST6.2.1电泳分析软件对胸水中的蛋白质谱进行分析,识别差异表达的蛋白质。结果:肺癌与肺良性胸腔积液的蛋白质组分布的基本框架很相似,并可发现二者之间有差异蛋白点;两种胸腔积液电泳图谱平均蛋白质点数分别为326±16和343±12,平均匹配点数为286±14和298±21,匹配率87.7%,86.9%.差异蛋白点82个,其中37个在肺癌胸腔积液中高表达,24个在肺癌胸腔积液中低表达。有17个点仅在良性胸腔积液表达,4个点仅在肺癌胸腔积液表达。结论:用双向电泳法得到了分辨率较高且重复率较好的肺癌与肺良性胸腔积液蛋白质组图谱,二者存在一些表达差异蛋白质。     

双向凝胶电泳分析诊断肺癌性胸腔积液的临床意义

肺腺癌是引起胸腔积液最常见的上皮性恶性肿瘤[1],肿瘤的发生往往是多因素影响的,必然涉及到多个蛋白质.经胸腔积液内肿瘤标志物的蛋白定量检测来筛查肺癌国内外已有报道[2,3],与之相比,双向凝胶电泳在寻找未知蛋白质、蛋白质组的全景分析和表达特性分析等方面有独特的功效.我们采用蛋白质组分析技术筛查肺癌患者胸腔积液,以弥补单纯细胞学检测的局限性,旨在寻找一种敏感、准确、快捷、方便和无创伤的检测方法.     

铅对大鼠C6细胞GRP78表达的影响

目的观察不用时间点暴露于不同剂量醋酸铅后大鼠神经胶质瘤C6细胞葡萄糖调节蛋白78(glucoseregulated protein 78,GRP78)表达量的影响,探讨不同时间不同剂量铅暴露对内质网应激反应的影响。方法Wistar大鼠神经胶质瘤C6细胞培养于含醋酸铅的培养液中,分别于不同时间终止染铅,用Western印迹法检测内质网GRP78表达量。结果(1)0.2μmol/L染铅组:7和30 d GRP78蛋白表达显著增高,其余各个时间点均无显著性变化;(2)1.0μmol/L染铅组:1 d后GRP78蛋白表达量开始显著增高,染铅30 d时已达到染铅前的6.3倍;(3)2.0μmol/L染铅组:0.5 h起GRP78表达量即显著增高,染铅7 d时达到高峰,是染铅前的4.3倍,到30 d时表达量又下降为染铅前的2.6倍。结论铅可以使Wistar大鼠神经胶质瘤细胞内质网上的GRP78蛋白应激性表达增加,内质网上的GRP78是铅的重要蓄积库。     

醋酸锌对谷氨酸诱导的小鼠脑片即早基因过度表达的抑制作用

目的：探讨谷氨酸对脑组织即早基因表达的影响以及醋酸锌对谷氨酸诱导c-fos和c-jun过度表达的拮抗作用。方法：体外小鼠海马脑片培养；在培养基中加入200μmol/L的谷氨酸（或同时加入谷氨酸和醋酸锌），作用0.5,1,2,3h，然后进行RT-PCR实验，检测c-fos和c-jun的表达变化。结果：200μmol/L谷氨酸处理的脑片中，1-2h期间c-fos的表达升高，当谷氨酸与100μmol/L醋酸锌共同处理脑片时，1-3h期间c-fos表达基本恢复正常；200μmol/L谷氨酸作用下，脑片c-jun表达水平从0.5h起即明显升高，谷氨酸与醋酸锌共同作用时，可见c-jun基因在各检测时段表达基本接近正常。结论：谷氨酸可引起c-fos及c-jun的过度表达，锌离子可拮抗谷氨酸诱导的c-fos和c-jun过度表达作用，使二基因表达恢复正常。     

铅对大鼠海马神经元胞质PKC活性的影响

目的 :观察不同低浓度醋酸铅不同染铅时间对大鼠海马神经元原代培养细胞胞质蛋白激酶C(PKC)活性及神经元细胞生长的影响。方法 :出生 4～ 8dWistar大鼠海马神经元原代细胞培养 ,显微照相 ,并不同时间不同浓度染铅 ,应用改良的Takai法测定PKC活性的变化。结果 :0 .1～ 1.0 μmol/L染铅 ,PKC活性依浓度依赖方式被激活 ,染铅浓度 >1.0 μmol/L ,PKC活性下降 ;染铅 15min后PKC活性升高并保持。低浓度醋酸铅并可抑制原代神经元细胞生长 ,呈浓度依赖方式。结论 :低浓度醋酸铅可持续激活大鼠海马神经元原代培养细胞胞质PKC ,抑制原代神经元细胞生长。     

人脂肪源性干细胞的分离及生物学性状的鉴定

目的 建立从人脂肪抽吸物中分离培养脂肪来源干细胞(ASCs)的方法,并从形态学、生长动力学、表面标记物和分化能力等方面进行鉴定.方法从4例行腹部脂肪抽吸术的健康成年女性患者获得脂肪组织,通过酶消化法分离和培养脂肪干细胞,并传代培养至20代,观察细胞形态;四甲基偶氮唑盐(MTT)法测定和比较第3、9、15和20代细胞生长...