氯化铝对大鼠皮层神经元凋亡及bc1-2、bax基因表达的影响

目的　探讨氯化铝 (AlCl3)对大鼠皮层神经元凋亡的诱导作用及对bc1 2、bax基因表达的影响。方法　体外原代无血清培养至第 7天的大鼠皮层神经元 ,实验组的培养液中加入AlCl3(终浓度分别为 10、10 0、10 0 0 μmol L) ,对照组的培养液中加入等体积分数为 0 9%的生理盐水 ,培养 48h后 ,用原位末端标记法 (TUNEL)测定其细胞凋亡率 ;培养 2 4h后 ,用RT PCR法检测bc1 2、bax基因的表达。结果　各染铝组大鼠皮层神经元凋亡率明显升高 ,与对照组相比 ,差异有显著性 (P <0 0 5 ) ,并具有明显的剂量 反应关系 ;bc1 2基因表达明显下降 ,bax基因表达明显升高 ,bc1 2 bax逐渐下降 ,与对照组相比 ,差异有显著性 ,也具有明显的剂量 反应关系。相关分析表明 ,大鼠皮层神经元凋亡率与bc1 2基因表达呈负相关 ,与bax基因表达呈正相关 ,而与bc1 2 bax呈负相关 (P <0 0 1)。结论　铝可以诱导大鼠皮层神经元凋亡 ,其机制可能与bc1 2基因表达下调 ,bax基因表达上调以及bc1 2 bax下降有关。     

P4501A1基因Thr~(461)→Asn~(461)及Ile~(462)→Val~(462)突变载体的构建

目的构建P4501A1基因cDNAThr461→Asn461及Ile462→Val462突变载体,为进一步研究CYP1A1的功能和致癌机制奠定基础。方法根据人CYP1A1基因(GeneBankNM-000499)cDNA序列设计通用引物Pm3/Pm4和突变引物Pt15/Pt16;Pt17/Pt18,内含酶切位点和突变位点,先用Pm3/Pt16,Pm3/Pt18组成两对引物,以pGEM-T-CYP1A1质粒为模板进行第一轮扩增,获得上游1397bp片断,再用Pt15/Pm4,Pt17/Pm4组成两对引物以10ngpGEM-T-CYP1A1质粒为模板进行第二轮扩增,得到下游177bp片断。然后用Pm3/Pm4做引物以第一、第二轮扩增产物为模板进行第三轮扩增,获得的1·5kb扩增产物用1%琼脂糖凝胶分离并回收纯化,将纯化的PCR产物与pMD-T载体连接后转化大肠埃希菌DHα5感受态细胞,挑单克隆扩增、质粒抽提后进行酶切和测序鉴定。结果三轮PCR扩增得到的1·5kb片断,经内切酶BamHI和SalI消化和T7p和SP6通用引物进行双向测序,证实克隆的目的片段与GeneBank中人CYP1A1基因cDNA的序列同源性为99·9%,且包含两个设计的突变位点Asn461、Val462。结论本实验成功地构建了含突变位点Asn461、Val462的CYP1A1基因cDNA的片断。     

细胞色素P4501A1-Wt和Asn~(461)、Val~(462)真核表达载体的构建及人胚肺成纤维细胞转染

目的构建能够高效表达细胞色素P4501A1(CYP1A1)蛋白的细胞株,分析不同基因型蛋白表达的差异。方法首先将已经建立的T载体中CYP1A1-Wt和Asn461、Val462的CYP1A1片断重组至pBABE-neo载体上,转染入人胚肺成纤维细胞(HLF),G418筛选获得阳性细胞,Western-Blot检测CYP1A1蛋白的表达,观察细胞形态,生长曲线,恶变性等生物学特性的改变。结果CYP1A1野生型、变异型转染的HLF细胞均能高效表达CYP1A1蛋白,其生物学特性与正常细胞无显著差异,也不属于恶性细胞。结论通过细胞转染和筛选获得了表达CYP1A1蛋白的细胞株。     

广州市PM2.5的污染状况及其有机提取物对BEAS-2B细胞IL-8、IL-1β表达的影响

目的调查广州市交通干道附近PM2.5的污染状况,并探讨PM2.5有机提取物对BEAS-2B细胞的炎性损伤效应。方法使用PM2.5采样器采集广州市交通干道附近的PM2.5,分析天平称重计算日平均浓度;索氏提取器提取PM2.5吸附的有机物作用于BEAS-2B细胞,ELISA检测IL-8、IL-1β的表达水平。结果广州市PM2.5日平均浓度为0.057～0.194mg/m3,其超标倍数为0.88～2.98;BEAS-2B细胞受到PM2.5有机提取物作用后,随着PM2.5有机提取物染毒剂量的增加,IL-8、IL-1β的分泌也明显增加;且随着各剂量作用时间的延长,IL-8、IL-1β的表达也增高。结论广州市交通干道旁PM2.5污染相当严重;PM2.5有机提取物能够刺激BEAS-2B细胞释放IL-8、IL-1β等炎性因子,吸引大量的炎性细胞释放炎性介质,从而形成气道的炎症损伤。     

被动吸烟对儿童免疫功能的影响

目的研究被动吸烟对儿童免疫功能的影响.方法于2002-2004年对广州市某小学135名10～11岁儿童的家庭成员吸烟情况及儿童因病缺勤状况进行问卷调查,并对其中50名儿童进行血清IgE和IL-8浓度的检测.结果被动吸烟(n=30)儿童的血清IgE浓度高于非被动吸烟组(n=20),而其IL-8浓度低于非被动吸烟组(P均＜0.05).被动吸烟儿童(n=67)因病缺勤率高于非被动吸烟儿童(n=68),差异有统计学意义(P＜0.05),且多为呼吸系统炎症.结论被动吸烟对儿童的先天性和获得性免疫功能均有不良的影响,应采取有效措施减少儿童被动吸烟的暴露.     

宫内铅暴露对大鼠神经行为发育的影响

目的研究低水平宫内铅暴露对Wistar大鼠早期行为及学习记忆等神经行为发育的影响。方法雌性大鼠分别经0．5，1．0和2．0mmol／LPbCl2暴露后，观察其F1代仔鼠断崖回避、平面翻正、前肢悬挂、空中翻正、听觉惊愕和视觉定位等早期行为发育以及应用水迷宫、Y迷宫检测仔鼠学习记忆能力。结果孕鼠经2．0mmol／LPbCl2染毒后，其仔鼠听觉惊愕和视觉定位等行为指标的发育出现了延迟；而1．0和2．0mmol／LPbCl2染毒后的孕鼠，导致其仔鼠的空中翻正发育延迟，仔鼠的空间方位辨别学习能力和运动学习能力、短时记忆和长时记忆能力的损害。结论宫内低水平铅暴露具有较强的行为发育毒性。     

低剂量铅对原代培养的海马神经元的影响

目的 研究低剂量铅对原代培养的海马神经元生长及存活的影响。方法 建立新生大鼠海马神经元原代无血清培养技术，通过不同浓度PbCl2染毒后，于不同时间点观察神经细胞的生长和存活情况。结果 极低浓度的铅(10^-7mol／L)即可引起神经元出芽延迟，突起长度缩短，细胞存活率下降，随剂量增加和时间延长，毒效应越严重。结论 低剂量铅具有抑制神经元生长和存活的毒性。     

细胞色素P450 1A1-Wt和Asn461、Vla462真核表达载体的构建及人胚肺成纤维细胞转染

目的构建能够高效表达细胞色素P450 1A1（CYP 1A1）蛋白的细胞株，分析不同基因型蛋白表达的差异。方法首先将已经建立的T载体中CYP1A1-Wt和Asn^461、Val^462的CYP1A1片断重组至pBABE-neo载体上，转染入人胚肺成纤维细胞（HLF），G418筛选获得阳性细胞，Western-Blot检测CYP1A1蛋白的表达，观察细胞形态，生长曲线，恶变性等生物学特性的改变。结果CYP1A1野生型、变异型转染的HLF细胞均能高效表达CYP1A1蛋白，其生物学特性与正常细胞无显著差异，也不属于恶性细胞。结论通过细胞转染和筛选获得了表达CYP1A1蛋白的细胞株。     

抗登革病毒Ⅰ～Ⅳ型特异性单克隆抗体的研制

用登革病毒免疫Ｂａｌｂ／ｃ小鼠的脾细胞与小鼠骨髓瘤细胞，经ＰＥＧ融合处理，共获得９０株分泌登革病毒单克隆抗体的杂交瘤细胞株。按照单抗质量标准，对杂交瘤细胞进行了严格的鉴定，筛选出１９株具有型特异的细胞株，再从中选出４个血清型的型特异的单抗组成诊断盒，可用于登革病毒的准确的鉴定和分型。     

广州市垃圾压缩站微生物污染状况研究

本项研究对不同选址、不同规模及不同防护设施的垃圾压缩站的空气微生物包括细菌总数、致病菌（金黄色葡萄球菌、肺炎双球菌）及条件致病菌（大肠杆菌、溶血性链球菌）污染状况进行了调查，并与传统的垃圾桶收集及清洁对照区作了比较和分析。结果发现所监测的垃圾压缩站内及周围没有检测到致病菌和条件致病菌，个别检测样本中检测出非溶血性链球菌的溶血性细菌；细菌总数和大肠杆菌显著高于对照，在水平稀释和垂直扩散效果上，垃圾压缩站低于传统垃圾吊装点；因素分析微生物污染状况与垃圾压缩站的规模有关，此外与垃圾压缩站周围的自然通风状况存在密切的相关关系；提示在今后垃圾压缩站建设选址时着重注意周围的自然通风状况是非常必要的。同时也揭示了现行压缩站内的消毒措施的效果并没有达到预期。