烟曲霉Aspergillus Fumigatus 3-甾酮-Δ~1-脱氢酶基因的克隆、异源表达和活性鉴定

微生物转化在甾体药物合成中起着不可替代的作用,其中C1,2位脱氢是最为重要的反应类型。以烟曲霉（A.fumigatus）为出发菌株,运用同源序列比对从烟曲霉酸基因簇中钓取出kstDF序列。该基因与玫瑰色热微菌（Ther-momicrobium roseum）DSM 5159的kstD一致性为51%。构建pET28a（＋）-kstDF表达载体,转化大肠杆菌（Escherichiacoli）BL21（λDE3）,获得高表达重组子菌株。经IPTG诱导、SDS-PAGE电泳分析,发现高温（37℃）有利于KstDF蛋白表达,低温（20℃）有利于酶活的保持。该重组菌显示出良好的甾体转化能力,在12 h内完全转化13.3 mg.L-1雄甾-4-烯-3,17-二酮,为构建高效转化3-酮基-4-烯类固醇的基因工程菌奠定了基础。     

烟曲霉Aspergillus Fumigatus3-甾酮-Δ1-脱氢酶基因的克隆、异源表达和活性鉴定

微生物转化在甾体药物合成中起着不可替代的作用,其中C1,2位脱氢是最为重要的反应类型.以烟曲霉(A.fumigatus)为出发菌株,运用同源序列比对从烟曲霉酸基因簇中钓取出kstDF序列.该基因与玫瑰色热微菌(Thermomicrobium roseum)DSM5159的kstD一致性为51%.构建pET28a(+)-...     

分枝杆菌转化甾醇产9α-羟基雄甾烯酮促进剂的筛选

以甾醇为原料、利用分枝杆菌等微生物转化生产甾体医药中间体9α-羟基雄甾烯酮,是当下甾体医药工业体系的一条重要工艺路线.甾醇作为一种非极性化合物,在水中的溶解度极低,传质效率低,其生物可利用度不高,这严重制约了分枝杆菌对甾醇底物的摄取利用效率.就PEG200、PPG2000和多种硅油对分枝杆菌转化甾醇产9α-羟基雄甾烯酮的促进效果进行了比较分析.结果表明：PEG200、PPG2000和聚醚改性硅油的添加均能有效改善菌体的甾醇转化能力,产物的积累量大幅提高,升幅分别约为50％、85％和300％.随后,重点考察了多种硅油对甾醇转化的影响,从中筛选出效果最好的甾醇转化促进剂并就添加量和添加方式进行了优化,结果显示,最佳甾醇转化促进剂是聚醚改性硅油,其最佳添加方式是在发酵起始时与甾醇同时添加、10 g·L-1甾醇投料量下的最佳添加量为15％.