人肌红蛋白基因的克隆、表达及其抗体制备

目的克隆、表达人肌红蛋白基因,并制备人肌红蛋白多克隆抗体。方法应用RT-PCR方法从人骨骼肌总RNA中扩增肌红蛋白基因(hMb)编码序列,克隆入原核表达载体pRSETc中,并在大肠杆菌E.coliBL21(DE3)中诱导表达。表达产物经亲和层析和凝胶层析纯化。纯化蛋白免疫小鼠,制备多克隆抗体,并用Westernblot检测其特异性。结果测序表明RT-PCR所得的肌红蛋白基因hMb序列与GenBank(NM203377)中报道的序列一致。该基因在大肠杆菌E.coliBL21(DE3)中获得高效可溶性表达,表达产物经纯化,获得电泳纯的蛋白。重组人肌红蛋白的表达水平达12.8%。每升发酵液中可获得纯化的目的蛋白6.438mg。Western blot分析表明该蛋白为融合有6个His的hMb蛋白。ELISA法测得抗体效价为1∶12800,Western blot证实其具有较好的特异性。结论已成功克隆人肌红蛋白基因,在大肠杆菌中获得了可溶性表达,并制备了抗人肌红蛋白的多克隆抗体。     

BEP2D细胞受照前后蛋白质组学研究

本研究利用蛋白质组学技术对受1.5Gy、3Gy γ射线照射的人支气管上皮(BEP2D)细胞和未经照射的人支气管上皮细胞蛋白差异表达谱进行了分析与鉴定。研究结果表明:2-D电泳后在分子量14.4～94kD,等电点3～10范围内分离出约1000多个不同蛋白质斑点。凝胶图象显示1.5Gy的γ射线照射后与对照组相比有15个蛋白点上调,104个下调;3Gy的γ射线照射后有26个蛋白点上调,144个下调;二个不同照射剂量共同表达的差异蛋白点有18个,其中上调的有3个,下调的有15个。通过对选取的10个蛋白点进行质谱分析,有2个蛋白点(样品D和样品660)经检索鉴定为肌球蛋白轻链(MLC)。这些蛋白表达量的改变可能与辐射诱发肺部肿瘤的发生有关,为进一步研究肺癌的发病机理提供了一定的基础。     

江西一号铀矿职工死因和氡危害的调查与分析

对江西一号铀矿1970年12月在册的全体职工进行了全死因调查分析,重点观察井下氡及氡子体与矿工肺癌的关系。观察期为15年(1971—1985年),观察人数4496名,累积66172人年。观察期内死亡220人,全死因标化死亡率分别为286.03×10~(-5)(放射组)和393.87×10~(-5)(对照组),差异不显著。井下工伤死亡率为56.03×10~(-5)未发现纯本矿矽肺死亡。恶性肿瘤标化死亡率分别为138.84×10~(-5)(放射组)和119.81×10~(-5)(对照组),差异不显著。肝癌是第一位癌死因,但与全国男性(1973—1975年)肝癌死亡率比较差异不显著。两组肺癌标化死亡率分别为49.49×10~(-5)(放射组)和9.78×10~(-5)(对照组),差异显著;SMR分别为1.827(放射组)和1.130(对照组)。1980年前,该矿井下氡子体年平均α潜能浓度超过国家标准(6.4×10~(-6)Jm~(-3))1—10倍,工人的氡子体α潜能累积暴露量低于100WLM的占44.34％,没有高于500WLM的。平均剂量为132.99WLM。放射组肺癌死亡平均年龄比对照组低12岁,平均坑龄为13.4年,平均剂量为164.25WLM。肺癌特异死亡率为7.045×10~(-5),绝对危险系数为0.53×10~(-6)人年WLM~(-1),相对危险系数为0.62×10~(-2)WLM~(-1)。     

对桥梁工程施工中现浇箱梁施工技术的相关探讨

随着我国经济的快速发展,桥梁工程建设日益增多,在桥梁施工技术当中,现浇箱梁由于整体性好、结构刚性强、外形美观等优点而得到广泛的应用。但是,现浇箱梁施工技术包含的技术要点较多,其箱梁支架、现浇梁的设计、施工程序繁多,因此在施工过程之中,如果施工过程控制不当,就会导致现浇箱梁的质量不合格,影响桥梁工程的整体质量。本文主要阐述了现浇箱梁支架安装施工技术以及现浇箱梁施工工艺,最后分析了施工工程中需要控制的要点。     

1958～1997年湖南A铀矿矿工死亡原因的流行病学调查

为了对我国铀矿工死亡原因进行综合分析 ,特别是对肺癌死亡的剂量 -效应关系进行深入的探讨 ,采用历史前瞻性方法 ,对湖南 A铀矿矿工进行了辐射流行病学调查。结果显示 ,肺癌的标准化死亡比 (SMR )显著升高 ,其与氡子体累积暴露量之间的趋势检验具有统计学显著性 ,说明该矿矿工肺癌的超额死亡与氡子体累积暴露量有关 ,这一结论与世界其它国家的同类研究的结果是一致的。该矿矿工肺癌的超额相对危险 (ERR )系数为 2 .0 8% / WLM,其在 BEIR 报告 (1.5± 1.2 ) % / WL M的范围内。本调查截至 1997年底 ,存活者的平均年龄只有 5 1岁 ,为了进一步观察辐射致癌危险随时间的变化 ,今后还需对该人群继续进行随访和研究     

抗-ProGRP单克隆抗体的筛选及其在小细胞肺癌鉴别诊断中的意义

目的 筛选与小细胞肺癌（SCLC）组织胃泌素释放肽前体（ProGRP）抗原具有高亲和力的抗．ProGRP单克隆抗体,探讨抗．ProGRP单克隆抗体在小细胞肺癌临床鉴别诊断中的意义。方法运用免疫组织化学方法筛选高亲和力抗．ProGRP单克隆抗体;利用筛选出的高亲和力抗体分别与SCLC、NscLc、肺良性肿瘤组织切片进行抗原抗体反应,检测ProGRP抗原的阳性表达率。结果抗-ProGRP单克隆抗体V-B3与SCLc组织ProGRP抗原的亲和力最高。21例SCLC组织,阳性表达率为90．5％;28例NSCLC组织,阳性表达率为28．6％;23例肺良性疾病组织,阳性表达率为8．7％。结论应用免疫组织化学方法检测SCAC组织中ProGRP抗原的表达,可以对SCLC进行临床鉴别诊断。