重组铜绿假单胞菌外毒素A工程菌发酵及表达产物的纯化

目的建立稳定、高效表达重组铜绿假单胞菌外毒素A(rEPA)的工程菌发酵及表达产物纯化工艺。方法规模化发酵表达rEPA的重组大肠杆菌rPE553D,离心收集菌体,渗透压调解使菌体周质间隙蛋白释放后,高速离心收集蛋白溶液。经DEAESepharoseFF、PhenylSepharose6FF疏水层析和SOURCE30Q强离子交换层析,超滤浓缩纯化rEPA。用HPLC、SDS-PAGE和Westernblot等方法检定生化和免疫学特性,并用小鼠和Vero细胞检定毒性。结果每55L培养基中rEPA产量超过4g,纯度在95%以上,细胞毒性降低了至少32000倍。其余各项指标均符合《中国生物制品规程》要求。结论已建立了收率高、纯度好、稳定、适合规模化生产rEPA的工艺。     

血清抗b型流感嗜血杆菌磷酸多聚核糖基核糖醇抗体杀菌活性体外检测方法的建立

目的 建立免疫血清中抗b型流感嗜血杆菌(Haemophilus influenzae type b,Hib)磷酸多聚核糖基核糖醇(Polyri-bosylribitol phosphate,PRP)抗体体外血清杀菌试验(Serum bacterialcid assay,SBA)方法。方法通过对补体和指示菌株的筛选,建立体外测定血清中抗Hib-PRP抗体杀菌试验方法,并对实验体系的耐变性、特异性及精密性进行验证。结果指示菌Hib-EAGAN株与Hib阳性血清显示出良好的杀菌特异性,其平均非特异性杀菌率为0;Pel-Freez公司提供的4批补体中,批号为17830的补体具有良好的杀菌稳定性和特异性;经验证,建立的Hib-SBA体系具有良好的耐变性和特异性,其精密性CV值在16%～28%之间。结论成功建立了血清抗Hib-PRP抗体杀菌活性体外检测方法,该方法具有检测样本量大、省时、易标准化等优点。     

白盆珠电站推力轴承磨损处理

白盆珠电站位于广东省惠东县境内西支江上游。装机容量2×12000kW。设计水头37.6m,设计流量38.4m~3/s,采用杭州发电设备厂的HL240—LJ—225型水轮机及SF—K1.2—32/5500悬吊式发电机。电站在试运行期间两台机组均发生推力轴承磨损事故。现把处理方法作一介绍。     

b型流感嗜血杆菌结合疫苗的制备及免疫学特性

目的制备ｂ型流感嗜血杆菌结合疫苗,观察免疫学特性。方法通过已二酸二肼（ＡＤＨ）,将纯 化的荚膜多糖抗原与破伤风类毒素（ＴＴ）蛋白共价结合,制备ｂ型流感嗜血杆菌结合物。以２．５μｇ多糖或含２．５μｇ 多糖结合物经皮下免疫ＮＩＨ雌性小鼠,用ＥＬＩＳＡ法检测小鼠血清ＰＲＰ抗体及Ｔ抗体水平。结果用本实验方法提 取的多糖、合成的多糖衍生物、多糖－蛋白结合物都具有ｂ型流感嗜血杆菌的抗原特异性,其化学组成及结构特性 与国外文献报道结果基本一致。单独用多糖免疫小鼠未能诱导高水平的血清ＰＲＰ抗体,而用结合物免疫小鼠却诱 导出高水平的血清ＰＲＰ抗体及ＴＴ抗体,并存在免疫记忆性。结论本实验为进一步临床评价结合物的体内保护 性效果提供了实验基础。     

老年人接种23价肺炎球菌多糖疫苗后特异性功能性抗体水平的监测

目的监测老年人接种23价肺炎球菌多糖疫苗(pneumococcal capsular polysaccharide vaccine-23,PPV-23)后特异性功能性抗体的水平。方法选择沪籍60岁以上健康及结核病痊愈老年人接种PPV-23疫苗,采用肺炎链球菌荚膜多糖多型调理吞噬杀菌试验(multi-specificity opsonophagocyitosis killing assay,MOPA)分别对接种前、接种后1个月、6个月的13种血清型(1、3、4、5、6A、6B、7F、9V、14、18C、19A、19F、23F)肺炎球菌的抗体水平进行检测,并对两组人群接种后1个月、6个月的13种血清型OPA抗体水平(GMT)及抗体增长率进行统计学分析。结果大部分老年人接种PPV-23后1个月、6个月13种血清型的OPA抗体GMT均显著高于接种前(P<0.05),接种后6个月结核病痊愈者的1、3型与接种前差异无统计学意义(P>0.05),且接种后1个月与6个月的6A、6B、7F、18C、19F、23F型抗体差异无统计学意义(P>0.05)。接种后1个月13种血清型OPA抗体水平≥2倍增长率均≥60%(除结核病痊愈者1型为37.5%外),且两组人群差异无统计学意义(P>0.05);除结核病痊愈者1、3型外,两组人群各型别OPA抗体水平≥4倍增长率差异无统计学意义(P>0.05)。接种后6个月13种血清型OPA抗体水平≥2倍增长率在45%以上,且除1型外,两组人群间差异无统计学意义(P>0.05);除1型、18C型外,两组人群OPA抗体水平≥4倍增长率差异无统计学意义(P>0.05)。结论健康和结核病痊愈老年人接种PPV-23后可产生针对13种血清型的特异性功能性抗体,且可维持6个月,但结核病痊愈者接种PPV-23后1、3型的OPA抗体水平和持久性明显低于健康老年人。     

b型流感嗜血杆菌结合物纯化过程不同部分的生化及免疫学特性

目的分析Hib结合物纯化过程不同部分的生化及免疫学特性。方法制备的Hib结合物经SepharoseCL4B层析柱纯化,从中选5个不同位点取样,检测其生化特性及免疫原性。结果1、2和3部分多糖蛋白质比例在0.4左右,高分子结合物含量均在80%以上,经高压液相分析,这3部分的相对分子质量均在1400000以上,免疫小鼠后均能产生较好的免疫应答。第4部分高分子结合物含量在70%左右,相对分子质量约在670000,免疫小鼠后也能产生较好的免疫应答。第5部分高分子结合物含量为23.7%,相对分子质量在50000左右,基本是以游离状态存在的多糖和载体蛋白,免疫小鼠后仅能产生很低的免疫应答。结论1、2和3部分是Hib结合物纯化中需收集的部分,第4部分虽也以结合状态存在,但相对分子质量相对较低,第5部分主要是游离的多糖和蛋白质。     

Y群脑膜炎球菌结合物制备过程中荚膜多糖水解条件的优化

目的对Y群脑膜炎球菌结合物制备过程中荚膜多糖水解条件进行优化,确定水解反应参数,以适用于后续结合物制备。方法分别使用双氧水(H2O2)和冰醋酸2种水解反应试剂,在不同浓度(H2O2分别至终浓度1%和2%,冰醋酸分别至终浓度0. 05和0. 1 mol/L)、不同温度(37和50℃)下反应不同时间,比较水解物的分子大小;采用确定的工艺参数连续制备3批多糖水解物,检测分子大小、O-乙酰基含量,并进行结构确认和抗原性分析。结果确定了Y群脑膜炎球菌多糖水解反应参数为:水解试剂冰醋酸,水解反应温度37℃,冰醋酸终浓度0. 05 mol/L,反应时间3 h。采用以上反应参数制备的3批多糖水解物在结构、特异基团及抗原性等方面完好地保留了多糖的特性,且分子大小适宜、批件一致性良好。结论优化的Y群脑膜炎球菌荚膜多糖水解反应参数可应用于多糖水解物制备,为后续稳定制备合格结合物提供了保障。