用2-甲基吲哚作偶合剂测定克仑特罗片

试验了用2-甲基吲哚测定克仑特罗片的新方法。克仑特罗在酸性溶液中被亚硝酸钠重氮化后,能与2-甲基吲哚偶合成黄色化合物,该化合物的最大吸收波长λmax389nm,摩尔吸光系数ε为2.36×104L.mol-1.cm-1,该法线性范围0~24mg/L,最低检测限为0.14mg/L,有色化合物至少稳定2h,此法适用于药品生产中的质量监控。     

营养因子对大肠杆菌发酵产转氨酶的影响

运用“单一组分缺失法”研究了18种氨基酸,11种维生素,8种微量元素,4种嘌呤与嘧啶对大肠杆菌A5发酵产转氨酶的影响。结果表明,L-甲硫氨酸是菌体生长与产酶所必需的物质,L-缬氨酸、L-异亮氨酸和L-谷氨酸分别对菌体生长和酶转化得率的提高有显著的促进作用。在此基础上构建了一个改良的合成培养基,其组成为(g/L):葡萄糖20,(NH4)2SO45,MgSO40.5,NaCl0.5,K2HPO40.5,KH2PO40.5,氨基酸混合液(包括L-Met、L-Val、L-Ile、L-Glu)0.6,pH7.2,所产转氨酶的转化得率达到72.4%。     

Flavourzyme蛋白酶酶解绿豆分离蛋白制备低聚肽的工艺研究

本文选用Flavourzyme蛋白酶对绿豆分离蛋白进行酶法水解以制备低聚肽。在单因素考察的基础上,采用四因素、三水平的正交试验设计优化酶解条件。得到最适的工艺条件为:温度60℃、pH7.0、底物浓度9%、酶浓度6000U/g,水解时间180min。在此条件下,绿豆分离蛋白水解度的平均值可达22.77%。     

基于5种生物碱定量分析的马钱子总碱提取工艺优化

首先以乙腈-水为流动相,梯度洗脱,体积流量1 mL/min,柱温35℃,检测波长260 nm,建立同时测定5种马钱子生物碱(士的宁、马钱子碱、士的宁氮氧化物、马钱子碱氮氧化物与番木鳖次碱)含量的反相HPLC法;然后以上述5种生物碱的总量为指标,采用L9(33)正交实验法,对马钱子总碱的回流提取工艺条件(溶剂用量、质量浓度和提取次数)进行优化。结果表明,上述5种马钱子生物碱质量浓度线性范围依次为14.64~468.48、11.625~372.0、0.555~17.76、0.891~28.512μg/mL与2.5~80.0μg/mL,回收率分别为100.3%、101.7%、97.7%、98.8%与99.6%。优化后马钱子总碱的回流提取工艺条件为:加入20倍量体积分数70%的酸性乙醇,回流提取4次,每次1 h。在此提取条件下,马钱子提取物中5种生物碱总质量分数达3.633%。反相HPLC法同时测定5种马钱子生物碱含量的方法简便、准确;以此作为马钱子总碱提取工艺优化的指标更为全面、可靠。     

补料分批培养提高转氨酶发酵产酶密度的研究

转氨酶是苯丙酮酸酶法制备L-苯丙氨酸的关键酶源,为提高转氨酶的发酵产酶密度,文章采用补料分批培养方式对大肠杆菌A5发酵产酶进行了研究。优化的补料培养工艺为:初始葡萄糖质量浓度5 g/L,初始氮源体积分数为玉米浆5 mL/L、蛋白胨质量浓度1.5 g/L,控制发酵过程pH值7.5,当葡萄糖质量浓度下降为2 g/L,开始每隔2 h补加质量浓度为120 g/L的葡萄糖溶液,从8 h起每隔2 h补加20 mL/L玉米浆+6 g/L蛋白胨及0.6 g/L的4种氨基酸溶液(L-甲硫氨酸、L-缬氨酸、L-异亮氨酸和L-谷氨酸)。在此条件下发酵培养24 h,菌体干质量浓度达10.5 g/L,比优化前产酶量提高了126%。     

谷氨酸脱氢酶发酵工艺的正交试验设计

谷氨酸脱氢酶是谷氨酸生物合成途径中的关键酶。为提高谷氨酸棒杆菌S0615发酵产谷氨酸脱氢酶的酶活,运用正交试验设计对其发酵培养基与培养条件进行了优化研究。结果表明,优化的培养基组成为:尿素0.8%,葡萄糖5%,玉米浆0.8%;优化的培养条件为pH值7.2,温度35℃,搅拌转速350 r/min,通气量1.5 L/min,采用恒定pH值控制尿素流加。在此发酵工艺条件下,谷氨酸脱氢酶的酶活可达到35.87 U/g。