miRNA在几种动物应激中的研究进展

miRNA是一类内源性18～22个核苷酸的非编码小RNA分子,通过与靶mRNA的3′非翻译区(3′untran-slated region,UTR)结合来调节基因的表达。在动物的多种生理进程和疾病的发生发展中,miRNA均发挥着重要作用。应激是机体对外界环境变化而产生的一系列非特异性的应答反应,不同应激源的刺激会导致miRNA的表达发生改变。因此,探究miRNA在动物应激中的研究进展对畜牧业的发展具有重要意义。本文综述了应激相关miRNA的研究进展,以期从分子水平寻找预防和诊断动物应激的方案。     

冷应激大鼠体内miR-383-5p表达的变化及其功能的预测分析

目的探讨冷应激大鼠体内miR-383-5p表达的变化,并对其功能进行预测分析。方法将大鼠置(4±0. 05)℃冷暴露12 h,同时设对照组(24℃常温饲养),qRT-PCR法检测miR-383-5p在血清和肝脏中的表达水平。应用miRanda、TargetScan和miRDB 3种软件同时对miR-383-5p进行靶基因预测,并通过DAVID 6. 8软件对miR-383-5p肝脏靶基因进行GO和KEGG分析。qRT-PCR和Western blot法检测下调BRL-3A细胞中miR-383-5p表达对部分代谢相关靶基因mRNA转录及蛋白表达的影响。结果冷应激后小鼠血清及肝脏中的miR-383-5p相对表达量均显著下降(P 0. 05)。生物信息学方法预测出733个在大鼠肝脏表达的靶基因,GO富集分析结果显示这些靶基因主要与细胞氧化还原过程、增殖和凋亡相关,KEGG分析结果显示富集靶基因最多的信号通路是代谢通路。下调miR-383-5p表达使BRL-3A细胞中Mtor、Pfkfb1和Apbb3基因的mRNA的转录水平显著升高(P 0. 05),Pfkfb1蛋白的表达量显著升高(P 0. 05)。结论冷应激可降低大鼠肝脏中miR-383-5p的表达量,进而通过调节Pfkfb1等靶基因的表达参与细胞的代谢、增殖和凋亡。     

急性期蛋白作为动物应激诊断标志物的研究进展

机体受到外界各种应激原刺激时,会诱发机体非特异性防御反应,并引发急性期反应。急性期蛋白(acute phase protine,APP)是主要由肝细胞合成的蛋白,可以改变对组织损伤、感染、应激引起的炎症反应的表达。急性期蛋白在动物体发生应激反应时内环境稳态变化与抗应激能力息息相关,因此研究急性期蛋白在畜禽应激相关疾病中变化成为必要。本文针对几种主要急性期蛋白的分类及其在动物体应激状态下表达量的变化与检测作一综述。     

α-烯醇化酶在籽鹅不同级别卵泡壁的定位及定量

目的对籽鹅不同级别卵泡壁中的α-烯醇化酶(α-enolase)进行定位及定量检测。方法分离产蛋期籽鹅等级卵泡(F1、F2、F3、F4、F5)、小黄卵泡(small yellow follicle,SYF)、大白卵泡(large white follicle,LWF)的卵泡壁;应用免疫组化方法检测不同级别卵泡壁的α-烯醇化酶的定位,采用Western blot及实时荧光定量PCR双标准曲线法检测α-烯醇化酶蛋白表达量及mRNA转录水平。结果不同级别卵泡壁均存在α-烯醇化酶表达,颗粒细胞层表达量总体高于膜层,SYF颗粒细胞层α-烯醇化酶表达量较高;F2级卵泡壁α-烯醇化酶mRNA转录水平显著高于LWF、F3及F4级别卵泡,差异有统计学意义(P 0. 01),F1、F5及SYF级卵泡壁α-烯醇化酶m RNA转录水平显著高于其他级别卵泡壁,差异有统计学意义(P 0. 01);SYF级卵泡壁α-烯醇化酶蛋白表达量显著高于其他级别卵泡,差异有统计学意义(P 0. 01)。结论α-烯醇化酶及糖酵解途径可能在卵泡发育中发挥重要功能,为α-烯醇化酶在禽类卵泡选择及生长发育中的功能研究奠定了基础。     

加快和重视抗寒功能性食品的研究与开发

本文论述抗寒功能食品的重要性和开发的前景,如何加速机体对寒冷环境的适应能力,同时提出适应的评价指标和提高抗寒能力的物质。     

代谢组学在动物应激研究中的应用

代谢组学是生物机体在病理生理、遗传、环境或行为的不同刺激下,对机体所产生代谢产物变化的研究,是生物领域研究中一种重要的研究手段,已在植物学、营养学、中药学、微生物学、临床疾病诊断等研究领域得到广泛应用。动物应激一直是畜牧行业关注的热点,许多因素可导致动物应激,常见的应激类型有冷应激、热应激、氧化应激、束缚应激、噪音应激、运输应激,还有不可预知的慢性应激等,这些应激均可对动物机体产生一定危害。目前,代谢组学也已应用于动物应激领域的研究,本文对代谢组学在动物的冷应激、热应激、氧化应激及束缚应激研究中的应用作一综述。     

奶牛miR-124a靶基因预测及生物信息学分析

目的预测奶牛miR-124a(bta-miR-124a)的靶基因,并对其生物学功能、调控机制以及参与的信号转导通路进行富集分析,为bta-miR-124a调控乳品质代谢的功能验证研究提供理论依据。方法利用miRBase、miRWalk和Targetscan等在线数据分析系统,获得bta-miR-124a的前体及成熟区序列,同时预测其候选靶基因并取交集,进而对筛选获得的候选靶基因进行GO功能注释及信号通路富集分析。结果 bta-miR-124a序列在各物种间高度保守,其候选靶基因主要富集在生物调控、细胞生长、代谢等生物学过程中。KEGG信号通路显示,在癌症、丝裂原活化蛋白激酶(mitogen-activated protein kinase,MAPK)、单磷酸腺苷活化蛋白激酶(AMP-activated protein,AMPK)、环磷酸腺苷(cyclic adenosine monophosphate,c AMP)信号转导、脂肪酸降解、脂肪酸生物合成等信号通路中,候选靶基因均被富集。结论 bta-miR-124a的候选靶基因在癌症发生、AMPK信号转导、脂肪酸代谢中发挥重要作用。其中,脂肪酸代谢是bta-miR-124a可能参与的主要代谢调控通路。为后期bta-miR-124a在奶牛乳腺组织中调控乳脂代谢的功能机制的研究提供参考。     

密码子优化的人成纤维细胞生长因子-21在毕赤酵母中的表达

目的在毕赤酵母中表达密码子优化的人成纤维细胞生长因子-21(hFGF-21),为探讨hFGF-21在糖尿病治疗方面的作用奠定基础。方法经密码子优化合成hFGF-21基因,构建表达载体pPICZαA-hFGF-21,电转化毕赤酵母GS115,斑点免疫印迹法筛选工程菌株,甲醇诱导表达,SDS-PAGE和Western blot分析表达产物,并对诱导条件进行优化。结果重组表达质粒经PCR、双酶切及测序鉴定,证明构建正确。筛选出5株阳性菌株,诱导上清经SDS-PAGE分析,可见相对分子质量约为25000的目的蛋白条带,目的蛋白的表达量约为6μg/L。Westernblot显示该蛋白具有良好的反应原性。诱导96h和培养液pH值为4.0时,目的蛋白的表达量最高,甲醇浓度对表达量无影响。结论已成功构建了密码子优化的hFGF-21真核表达载体,并在毕赤酵母GS115中分泌表达了hFGF-21。     

体内药物分析方法的研究进展

对近年来体内药物分析方法中的新技术及其原理,包括固相提取、柱切换技术、手性固定相法、手性流动相法、高效毛细管电泳法、液相色谱-质谱联用技术、液相色谱-核磁共振联用技术、毛细管电泳免疫分析的研究进展及其应用作-综述。     

线粒体能量代谢相关miRNA的研究进展

线粒体为真核细胞的能量工厂,其能量代谢与细胞凋亡、自噬和衰老等过程密切相关,在疾病的发生发展以及后续治疗中也发挥着重要作用。microRNAs(miRNAs)为一类广泛存在于真核生物中的单链RNA,可通过降解靶基因或抑制靶基因的翻译来调节蛋白表达。近年来多项研究表明,miRNA还可通过调节线粒体相关基因的表达,调控线粒体的结构及功能,影响线粒体的能量代谢。本文就miRNA的作用机制及其与线粒体能量代谢关系的研究进展作一综述。