A群链球菌四价重组蛋白的表达、纯化及其免疫原性

目的原核表达并纯化A群链球菌M1、3、6、18型四价重组蛋白,并检测其免疫原性。方法以克隆质粒pUC18-Strep4为模板,PCR法扩增四价重组蛋白基因,克隆至表达载体pQE30中,构建重组表达质粒,转化E.coilM15,筛选阳性克隆,IPTG诱导表达。采用Ni2+-NTA凝胶亲和层析纯化重组蛋白。以该蛋白免疫家兔,ELISA法检测血清抗体滴度;间接免疫荧光法(IFA)检测A群链球菌型特异性抗体;体外杀菌试验检测杀菌抗体活性。结果四价重组蛋白表达质粒pQE30-Strep4经双酶切和测序,证明构建正确。重组蛋白相对分子质量与预期相符,表达量约占菌体总蛋白的30%,为可溶性表达。纯化后蛋白纯度可达90%以上,并可诱导家兔产生高滴度的M1、3、6型特异性杀菌抗体。结论已成功表达了A群链球菌四价重组蛋白,纯化后的蛋白可诱导家兔产生针对A群链球菌M1、3、6三个血清型菌株的特异性杀菌抗体。     

经济技术开发区再生水用水量特点研究

以北京某国家级开发区为重点研究对象,对我国经济技术开发区再生水用水量特点进行归纳总结,研究结果表明,目前我国各经济技术开发区的用水量需求普遍较大,与水资源短缺的矛盾日益凸显;以经济技术开发区内排放污水为水源生产的高品质再生水,可满足开发区内绝大多数工业企业工艺生产用水水量的需求,节水的同时,实现了企业良好的经济效益.经济技术开发区中的工业企业再生水用水量要求较大,特别是电子工业类企业,绝大部分以工艺水为主,这部分再生水对水质要求更高.如果工艺水能利用再生水,再生水的利用率将有显著提高.     

四价重组A群链球菌多肽疫苗基因序列的合成及克隆

目的设计针对可引起风湿热的A群链球菌M1、3、6、18四个血清型的重组多肽疫苗,合成并克隆该重组多肽疫苗的核苷酸序列。方法从美国疾病预防和控制中心(CDC)数据库获得A群链球菌1、3、6、18四个血清型M蛋白型特异性序列,根据文献报道并结合生物信息学的方法,筛选每一个血清型的特异性序列中与人体组织蛋白无同源性的区段,将其按1-3-6-18型的顺序串连,在串联序列的C-端加上一个四个血清型所共有的与人体组织蛋白无交叉表位、且具有一定免疫原性的保守序列J14。对设计的多肽疫苗的氨基酸序列进行与人体组织蛋白的BlastP比对、亲水性分析、二级结构分析、空间结构分析以及B细胞表位预测。采用DNAWORK2.0在线软件设计一组寡核苷酸引物,OverlapPCR方法合成该多肽疫苗的核苷酸序列,并在5′端和3′端分别引入BamHⅠ和HindⅢ的酶切位点,将该序列双酶切后克隆至pUC18载体上,并测序。结果软件分析显示,设计的多肽疫苗与人体组织蛋白无同源性,有较好的亲水性,二级结构与空间结构均与天然M蛋白相似,在每一个血清型的区段都可能存在B细胞表位。成功扩增出了该多肽疫苗的DNA序列,并获得了一个与设计序列完全一致的重组克隆载体。结论已成功设计了一种四价重组A群链球菌多肽疫苗,为其重组表达和免疫原性的研究奠定了基础。     

综合管廊内给水架空钢管支吊架布置设计

随着综合管廊建设的快速发展,廊内给水管道的建设规模越来越大,但廊内给水管道的设计规范体系相对薄弱,设计人员缺少完善的规范体系作为技术指导。从廊内给水架空钢管管道的特点出发,参考室外给水排水行业及石油化工行业的相关设计规范与技术资料,总结出一套适用于综合管廊内给水架空钢管支吊架布置的设计方法,并从平面设计、竖向设计及特殊节点设计三个方面分别举例阐述了支吊架布置的设计要点,为管道系统的安全运行创造条件。     

用表面渗透法检测高温工程陶瓷的热震性能

本文介绍依据热弹性理论,利用表面渗透法测量高温工程陶瓷材料的热震性能。对几种有代表性的高温工程陶瓷材料进行测试,并将结果与热震后测弯曲强度、依据热弹性理论计算的R、R′进行对比。本方法有简易、可靠、热震裂纹及分布可直接观察等特点。     

细菌内同源重组构建人p21~(WAF1)基因重组腺病毒

目的构建人p21WAF1基因重组腺病毒载体,并在293细胞中包装制备重组腺病毒。方法将人p21WAF1基因亚克隆连接到腺病毒转移质粒pshuttle-cmv,得到阳性重组转移质粒psh-p21。先将腺病毒骨架质粒pAdEasy-1转化BJ5183菌,筛选得到AdBJ5183菌,再将PmeⅠ线性化的psh-p21转化AdBJ5183菌,经细菌内同源重组法构建重组腺病毒质粒pAdp21。经PacⅠ和BstXⅠ酶切及PCR鉴定,将正确的重组腺病毒质粒pAdp21转染293细胞包装病毒,用RT-PCR和PCR鉴定重组腺病毒及其稳定性。结果所构建的重组腺病毒质粒pAdp21,经PCR鉴定,可扩增出约500bp的片段,与预期大小相符。转染293细胞可包装成p21WAF1基因重组腺病毒,经电镜观察,具有典型的腺病毒特征。结论已成功地构建了重组腺病毒质粒pAdp21,并制备出重组腺病毒rAdp21。     

微滤-反渗透工艺在高品质再生水回用工程中的应用

北京经济技术开发区再生水工程一期规模为2万m3/d,采用微滤-反渗透双膜法工艺。介绍了工程的设计运行情况,包括前期的需水量与水质要求调查、再生水生产工艺的比选与确定、工程设计参数以及工艺的技术经济分析。分析结果表明,开发区再生水回用重点应考虑工业企业生产用水,双膜法工艺应用于高品质再生水的回用工程,技术可靠,经济可行。