含人巨细胞病毒糖蛋白B中AD2位点Ⅰ的鞭毛融合蛋白在小鼠中的免疫应答

目的探讨人巨细胞病毒(human cytomegalovirus,HCMV)糖蛋白B(glycoprotein B,g B)中AD2位点Ⅰ(AD-2S1)在小鼠中的免疫效果。方法将AD-2和4×AD-2S1核酸序列分别克隆至含有鞭毛蛋白的质粒p ET42b-Flj B中,构建表达载体p ET/Flj B-AD-2和p ET/Flj B-4×AD-2S1,转化大肠埃希菌Rosetta 2(DE3),IPTG诱导表达,收集Flj B-AD-2的菌体裂解液上清及Flj B-4×AD-2S1的菌体裂解液沉淀,经Superdex-200凝胶过滤层析纯化,根据蛋白含量及纯度配制无佐剂抗原(Flj B-AD-2和Flj B-4×AD-2S1)及含Al(OH)3佐剂抗原[Flj B-AD-2+Al(OH)3和Flj B-4×AD-2S1+Al(OH)3]。用制备的抗原于第0和21 d皮下免疫BALB/c小鼠,设PBS对照组,于2次免疫后1周,眼窝后穿刺采血,分离血清,ELISA法检测AD-2S1特异性Ig G及Ig G1和Ig G2a水平,中和试验检测HCMV中和抗体水平。结果纯化的Flj B-AD-2抗原相对分子质量约54 000,纯度为88.2%,蛋白含量为0.91 mg/ml;纯化的Flj B-4×AD-2S1抗原相对分子质量约50 000,纯度为96.8%,蛋白含量为0.45 mg/ml。与对照组相比,免疫组小鼠均产生不同水平的抗AD-2S1特异性Ig G抗体,Flj B-AD-2和Flj B-AD-2+Al(OH)3免疫组小鼠Ig G水平较低,Flj B-4×AD-2S1和Flj B-4×AD-2S1+Al(OH)3免疫组小鼠Ig G水平较高,其中Flj B-4×AD-2S1与Flj B-AD-2免疫组相比,差异有统计学意义(P0.05);Flj B-4×AD-2S1可诱导小鼠产生Ig G1和Ig G2a两种抗体,但Ig G2a水平较高,差异有统计学意义(P0.05),而Flj B-4×AD-2S1+Al(OH)3诱导小鼠产生的Ig G1和Ig G2a水平差异无统计学意义(P0.05);各免疫组小鼠血清中和抗体水平均不高于1∶4。结论 Flj B-4×AD-2S1和Flj B-AD-2均能诱导产生AD-2S1特异性Ig G,却不能诱导小鼠产生补体非依赖性中和抗体。     

四川地区供浆员中肠道病毒71型中和抗体效价的分布

目的通过检测EV71中和抗体效价(EV71-NT),对四川地区供浆员中EV71-NT的分布进行分析。方法应用基于细胞病变抑制的EV71-NT检测方法,检测四川地区349份健康人血浆的EV71-NT,同时用肠道病毒(EV)71型抗体诊断试剂盒(酶联免疫法)检测其EV71抗体,并分析二者的相关性;检测四川地区21 817份健康人血浆中EV71-NT的分布。结果该EV71-NT检测方法具有较好的重复性,测定高效价和低效价EV71中和抗体标准品的变异系数分别为30.9%和33.6%;该方法与ELISA法的相关性较差(r=0.024);四川地区21 817份健康人血浆中含高效价EV71中和抗体的比例在7.1%～18.4%之间,EV71高效价血浆占10.3%。结论在四川地区供浆员血浆中含有一定比例的高效价EV71中和抗体,可以直接从自然感染人群中筛选EV71抗体血浆进行EV71特异性免疫球蛋白的研制。     

静注肠道病毒71型人免疫球蛋白(pH 4)的研制

目的研制静注肠道病毒71型人免疫球蛋白(pH 4)[Enterovirus 71 human immunoglobulin(pH 4)forintravenous injection,EV71-IVIG],用于治疗重症手足口病。方法采用细胞病变抑制法检测原料血浆的抗EV71中和抗体效价(EV71 neutralizing antibody titer,EV71-NT),确定EV71抗体血浆的筛选标准;从健康人血浆中筛选中和效价较高的EV71血浆,按《中国药典》三部(2010版)的生产工艺连续制备3批EV71-IVIG;以乳鼠模型评价EV71-IVIG的治疗效果,并以细胞病变抑制法检测EV71-IVIG对EV71临床分离株及CA16病毒的中和活性。结果从90批原料血浆中筛选出约3.8吨EV71抗体血浆,制备的3批EV71-IVIG符合《中国药典》三部(2010版)"静注人免疫球蛋白(pH 4)"的质量标准,EV71-NT为国内普通IVIG的4～5倍。0.5 mg EV71-IVIG即可充分保护经10 LD50EV71攻击的乳鼠,存活率达100%。EV71-IVIG对最近几年流行的EV71临床分离株有较高的中和活性。结论已成功研制EV71-IVIG,为重症手足口病患者的治疗提供了新的用药选择。     

一元线性回归在起重机吊钩摆幅测量中的应用

吊钩摆幅是评估起重机稳钩效果的重要指标,针对其测量成本较高、易受天气影响的问题,提出经济实用的石膏粉网格点测量方法,以此获取起重机吊钩摆幅数据。由于人眼测量主观因素较多、误差较大,故对吊钩摆幅数据建立一元线性回归模型,分析该模型的相关系数以及由此得到的摆幅变化趋势,得出仅靠起重机自身的机械摩擦阻尼使吊钩稳定是极其漫长的,稳钩策略势在必行。数据分析结果表明,一元线性回归分析方法能够应用于起重机吊钩摆幅测量数据的拟合分析,这对于起重机稳钩控制策略效果的检验具有重要的参考价值。