乙型流感病毒疫苗株全基因组序列测定及其在疫苗质量控制中的应用

目的建立乙型流感疫苗生产用毒株全基因组序列测定方法,将其应用于2013~2017年流感季节乙型流感疫苗生产用毒株的质量控制,为全面监测流感疫苗质量提供依据。方法利用通用引物对不同企业的乙型流感疫苗工作种子批进行一步法RT-PCR,以获得乙型流感病毒全基因组,DNA序列测定后,采用Clustal软件进行比对,在GISAID数据库中进行同源序列分析。结果不同企业间的Yamagata谱系工作种子批毒株序列一致,其中HA和NA基因均来源于B/Massachusetts/02/2012,PB2等其他内部基因来源不同;Victoria谱系工作种子批毒株的HA和NA基因与B/Brisbane/60/2008一致,但PB2等基因不同企业间存在差异。结论建立的一步法RT-PCR可用于乙型流感疫苗生产用毒株全基因组序列分析,可从源头保证流感疫苗的安全性、有效性以及疫苗质量的一致性。     

原型株及变异株SARS-CoV-2灭活疫苗在大鼠体内的免疫原性评价

目的 评价原型株、Beta株、Gamma株和Delta株SARS-CoV-2灭活疫苗在大鼠体内的免疫原性。方法 分别将原型株、Beta株、Gamma株和Delta株SARS-CoV-2灭活疫苗经大腿肌内免疫5只雌性Wistar大鼠2次,间隔14 d,免疫剂量均为3μg病毒蛋白/（0.5 mL·只）,初次免疫后14、28和42 d,经静脉采集血,分离血清。间接ELISA法检测血清IgG抗体水平;微量中和试验检测血清中和抗体效价;计算血清中和抗体效价的抗原比,以评价2株病毒间的抗原性差异。结果 初次免疫后14 d,全部免疫血清中均可检测到针对4株病毒的IgG抗体,28 d的IgG抗体水平较14 d提高10倍以上,42 d时效价略有下降。首次免疫后14 d,免疫原型株或Delta株疫苗的大鼠血清中,针对4株病毒的中和抗体全部阳转;免疫Beta株和Gamma株疫苗的大鼠血清中,针对Beta株和Gamma株病毒的中和抗体全部阳转,针对原型株或Delta株病毒的中和抗体部分阳转。初次免疫后28 d,4种病毒免疫血清中和抗体均阳转,中和抗体效价较14 d大幅升高;初次免疫42 d时中和抗体效价较28...     

sIPV疫苗D抗原含量双抗体夹心ELISA检测方法的建立及验证

目的 建立牛多抗对兔多抗夹心ELISA方法 检测Sabin株脊灰病毒灭活疫苗(Sabin strain inactivated poliovirus Vaccine,sIPV)D抗原含量,并对建立的方法 进行验证。方法 分别采用Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ型sIPV疫苗原液作为抗原制备兔多抗,并通过间接ELISA法检测其效价及特异性。以牛多抗为包被抗体、兔多抗为显示抗体建立检测D抗原含量的双抗体夹心ELISA方法 ,并对方法 的准确度、精密度及D抗原专属性进行验证。用建立的方法 检测国内5家企业sIPV疫苗样品。结果 制备获得型别特异性好、效价高的Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ型兔多抗,并成功建立了双抗体夹心ELISA方法 。采用四参数拟合,3型别标准曲线均具有良好的线性关系,R²均>0.99。Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ型各试验加标回收率均为80%～120%,各浓度平均回收率分别为98.11%、97.41%、98.66%;重复性与中间精密度CV均<10%;能够对D/C抗原进行区分。建立的方法 对5家企业生产的sIPV疫苗均能够进行D抗原定量检测。结论 成功建立了检测sIPV疫苗D抗原含量的双抗体夹心ELI...