应用生物反应器大规模培养杂交瘤细胞生产体内治疗用WuT3单克隆抗体

用3．5L和14L生物反应器培养WUT3杂交瘤细胞,结果表明用人血清可以代替牛血清培养WuT3细胞,在1％人血清培养液中添加适当营养成分,可达到10％小牛血清浓度下的细胞浓度（1．5×106／ml）和单抗产量（大于50μg／ml）。放大到75L生物反应器中采用半连续方式培养,建立了中试培养工艺流程和质控点,收获时细胞浓度为1.0×106～1．5×106／ml,单抗产量为40～70μg／ml,平均日产单抗达1g。在3．5L、14L、75L逐级放大培养过程中,细胞支原体为阴性,收获上清中单抗免疫活性合格,热原试验合格。     

大规模提取体内治疗用单克隆抗体的工艺

用两步法从WuT3细胞培养上清中提取WuT3单克隆抗体（McAb）,首先将培养上清直接上SP离子交换柱,再上DEAE柱,获取提纯的McAb。该工艺的确定及放大均在Pharmacia产Biopilot中试纯化系统上进行。一次投料20L,纯化规模达2g,纯化的McAb经SDS－PAGE测定,纯度基本达到95％,免疫荧光活性为66±9％。热原质合格,支原体、残余DNA均为阴性,达到体内制剂质控要求。     

反义c-myc基因质粒对鼠脑胶质瘤细胞C6生长的影响

目的探讨反义ｃ－ｍｙｃ基因质粒对鼠脑胶质瘤细胞Ｃ６增殖及凋亡的作用。方法将可在真核细 胞表达大鼠反义 ｃ－ｍｙｃ基因的质粒 ｐＣＥＰ４ＡＳＣＭＲ以脂质体 ＦｕＧＥＮＥ６为介导,转染到大鼠脑恶性胶质瘤细胞 Ｃ６株 中,经ＭＴＴ检测,软琼脂集落生长,吖啶橙染色,琼脂糖电泳等方法分析实验结果。结果反义ｃ－ｍｙｃ基因质粒 ＤＮＡ具有抑制瘤细胞增殖的作用,并能引起瘤细胞凋亡;脂质体ＦｕＧＥＮＥ６有助于提高质粒ＤＮＡ的转染效率。结论 反义ｃ－ｍｙｃ基因质粒可抑制ｃ－ｍｙｃ基因的过度表达,促使肿瘤细胞凋亡,达到治疗脑神经胶质细胞瘤的目的。     

基于改进遗传算法的园区综合能源系统规划研究

通过能源综合化建设来实现终端能源的高效化,成为当前支撑碳中和碳达峰的重要途径之一。针对园区能源系统能效提升、规划配置等问题,提出了园区综合能源系统经济-能效多目标优化规划模型。分析园区综合能源系统的基本结构,以年总成本、综合能效为优化目标,并考虑能源规划投资和能源运行安全的各类约束,建立了园区综合能源系统多目标优化规划模型;然后,基于NSGA-II算法和融合模拟退火算法的特点,融合模拟退火算法的搜索机制改进NSGA-II的求解性能;最后,以我国某园区为例验证模型和算法的有效性。     

乳糖诱导重组人睫状神经营养因子在大肠杆菌中的可溶性表达

目的利用乳糖替代IPTG,诱导重组人睫状神经营养因子(Recombinanthumanciliaryneurotrophicfactor,rhC-NTF)在原核工程菌BL-TCS中可溶性表达,并选择最适的诱导表达条件。方法在不同的温度下,利用不同浓度的乳糖及0·5mmol/L的IPTG,诱导含有人CNTF基因的工程菌9h,比较菌体生长、乳糖消耗以及目标蛋白的表达规律。结果乳糖组的菌体A600值均高于IPTG组。乳糖诱导产生的rhCNTF主要以可溶形式表达,各浓度乳糖的诱导效果均能接近或超过IPTG的效果。以2%乳糖在25℃下诱导6h,可以达到比较好的诱导效果。结论乳糖可取代IPTG诱导人CNTF基因表达,并获得良好效果。     

抑癌基因CT—GalNAcT转染对结肠癌细胞COLO26的影响

【摘 要】目的 了解抑癌基因 CT－CalNAcT（N－acetylgalactosamine Transferase）对小鼠结肠癌细胞 COLO26的作用。方法 将抑癌基因 CT－GalNAcT序列构建到带有报道基因 FLAG的质粒上，重组质粒 pFLA－G－GalN－AcTDNA在阳离子脂质体Effectene介导下转染，并分别与绿色荧光蛋白基因质粒pcDNA3EGEP和潮霉素抗性基因质粒pCEP4转染结肠癌细胞COLO26，观察瘤细胞的生长状况。裂解细胞提取蛋白进行 Western blotting。结果 瘤细胞变圆，粘附性下降，细胞生长受到抑制，死亡细胞增多。与 pcDNA3EGEP、pCEP4共转染及 Western blotting确定 CT－CalNAcT已经转染到COLO26细胞内。结论 抑癌基因CT－GalNAcT对结肠癌细胞具有生长抑制作用。     

重组人睫状神经营养因子的纯化

目的纯化重组人睫状神经营养因子(rhCNTF)。方法破菌液上清经硫酸铵分级沉淀和G-25脱盐后,用QSepharose FF阴离子交换层析初纯,再经Superdex 75 prepgrade凝胶过滤精制,并对纯化产物进行各项检测。结果纯化的rhC-NTF纯度达95%以上,蛋白浓度约为2mg/ml,收率约30%,相对分子质量21600,等电点为6.15,与理论值相符合。Western blot检测证明纯化蛋白能够与特异性抗体结合,并能够明显刺激鸡胚背根神经节突触生长。结论采用盐析、离子交换、凝胶过滤等方法有机组合,成功分离纯化了rhCNTF蛋白。