不同采摘时期蒲公英功效成分的含量变化规律及降糖作用研究

以长白山野生蒲公英作为原料,探讨不同采摘时期蒲公英中黄酮类、皂苷类、肌醇类物质含量的变化规律,进而研究不同采摘时期蒲公英降血糖作用的差异,寻找出降血糖效果最好的蒲公英生长时期。采用乙醇浸提法提取蒲公英中的黄酮、皂苷及肌醇类物质,分别对几种物质的含量进行提取测定;并将各个时期得到的蒲公英水煮液用四氧嘧啶致糖尿病小鼠进行降血糖实验研究。结果表明：7月中旬到8月中旬期间采摘的蒲公英均有良好的降血糖效果。其中,在7月下旬的蒲公英降血糖效果最好,使四氧嘧啶致糖尿病小鼠的血糖值在15 d内下降49.3%;而且该时期的蒲公英中黄酮类物质含量为8.41 mg/g,皂苷类物质含量为0.41 mg/g,中肌醇的含量为15.90 mg/g,D-手性肌醇的含量为4.95 mg/g。     

引物间隔臂修饰对液相芯片食源性致病菌检测的影响

建立液相芯片同时检测鼠伤寒沙门氏菌(S.typhimurium)、志贺氏菌(Shigella)方法,并对引物进行间隔臂(Spacer C3)修饰,验证C3修饰对食源性致病菌检测的影响。对引物C3修饰组和未修饰组两种食源性致病菌进行条件优化和对比。试验表明所建立的食源性致病菌检测体系方法学评价良好,多批次结果显示稳定性较好,反应体系退火温度和杂交温度分别确定为56℃和38℃。结果表明,引物使用C3修饰对检测结果的阳性荧光值强度中值(median fluorescence intensity,MFI)有良好信号放大作用,为食源性致病菌液相芯片检测提供了参考。     

重组蓖麻毒素A链的表达及半乳糖修饰

目的表达重组蓖麻毒素A链(ricin toxin A,RTA),并进行半乳糖糖基化修饰。方法将重组质粒pET-28a-RTA转化E. coli BL21(DE3),经IPTG诱导表达重组蛋白RTA,通过镍离子亲和层析柱纯化包涵体,并复性。采用1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐[1-(3-dimethylaminopropyl)-3-ethylcarbodiimide hydrochloride,EDC]/N,N-羟基琥珀酰亚胺(N-hydroxysuccinimide,NHS)法对重组RTA进行半乳糖糖基化修饰,并对偶联反应温度(20、25、30和37℃)和半乳糖与RTA的投料比(100∶1、500∶1、1 000∶1、1 500∶1和2 000∶1)进行优化。结果 RTA蛋白相对分子质量约34 000,主要以包涵体形式表达,纯化复性后纯度大于90%。最适偶联反应温度为25℃,半乳糖与RTA最适投料比为1 000∶1。结论成功表达了RTA蛋白,并通过EDC/NHS法实现了半乳糖与RTA的偶联。     

碗扣式钢管脚支架在现浇连续梁桥施工中的应用

介绍了碗扣式钢管脚支架在沈大(沈阳至大连)高速公路后盐立交桥连续箱梁施工中的应用概况及碗扣式钢管脚支架的施工工艺和控制要点．通过后盐立交桥连续箱梁施工这一工程实例，详细论述了碗扣式钢管脚支架的平面布置方法及受力验算方法，提出了碗扣式钢管脚支架的U托旋出长度的计算方法及纵横坡的调整方法，并指出采用找零立杆的方法可以解决较大纵横坡度箱梁的施工问题；采用贴焊钢筋的方法可以解决U托偏心受压的问题．最后，阐述了施工中支架预压的重要性并给出了预留沉降值．     

汽车变速器装配线可视化装配工艺仿真技术的应用分析

本文将某一型号汽车变速器装配线当成研究对象,借助于三位数字化工厂方阵软件研究变速器虚拟装配线对象建模方法、规划与搭建装配工艺环境,剖析装配线面临的问题,通过与实际仿真数据结合优化调整规划装配线,获得相对理想装配线优化方案.     

小鼠肺泡巨噬细胞的分离及鉴定

目的分离小鼠肺泡巨噬细胞(alveolar macrophage,AM),并鉴定其纯度和吞噬活性。方法采用肺泡灌洗法分离小鼠AM,分别通过瑞氏-姬姆萨染色法和Diff-Quik染色法鉴定AM的纯度;将FITC标记的大肠埃希菌与AM按不同比例混合(10∶1、15∶1、20∶1)后孵育不同时间(20、25、30 min),荧光倒置显微镜下观察AM的吞噬活性。结果两种染色方法染色时,阳性细胞百分率均在94%以上,Diff-Quik染色法细胞阳性率略高于瑞氏-姬姆萨染色法,染色时间较瑞氏-姬姆萨染色法短,且背景干净无杂质。小鼠AM的吞噬率和吞噬指数随着FITC标记的细菌与AM比例的增加而增大,且随孵育时间的延长呈先升高再降低的趋势。当细菌与细胞比例为20∶1,孵育时间为25 min时,吞噬率和吞噬指数达最大,分别为(63.67±4.04)%和1.41±0.07。结论贴壁培养法可获得较高纯度的小鼠AM,Diff-Quik染色法鉴定巨噬细胞纯度优于瑞氏-姬姆萨染色法,其可代替瑞氏-姬姆萨染色法,成为一种快速、高效的鉴定巨噬细胞纯度的方法。