应用无血清培养中试的三批WuT3单抗的质量分析

为了对应用无血清培养中试的３批ＷｕＴ３单抗进行全面的质量分伍。我们参照国家药品监督管理局颁布的《人用鼠源性单克隆抗体制造及检定规程》进行检定。结果所有指标均符合规程要求,其中单抗蛋白含量为５．４５～５．５３ｍｇ／支,纯度＞９５％,ＩｇＧ单体纯度＞９５％,残余骨髓瘤细胞ＤＮＡ含量＜１００ｐｇ／剂量,用免疫荧光法检测单抗对正常人外周血淋巴细胞（ＰＢＩ）的反应活性为６４－６８（正常值范围为６６．６±９．８）。无菌试验、异常毒性试验、鼠源性病毒检测、支原体枉测、热原质试验均合格。在自检合格的基础上,送中…     

WuT3无血清培养上清中单克隆抗体纯化工艺的建立

目的对WuT3杂交瘤细胞生物反应器无血清培养上清中单克隆抗体进行分离纯化,建立中试分离纯化工艺。方法采用两步离子交换层析法结合硫酸铵盐析法分离纯化WuT3单抗。在通过小量试验优化纯化参数后,进行中量试验和中试放大。结果建立的纯化方法可以放大到中试规模,每批投料30000ml培养上清,可收获单抗达1.5g,单抗总回收率大于60%。经分离纯化后,单抗IgG纯度大于95%,采用免疫荧光法检测抗体活性合格。结论建立了一条生物反应器无血清培养杂交瘤细胞大规模分离纯化单抗的工艺路线。     

应用生物反应器大规模培养杂交瘤细胞生产体内治疗用WuT3单克隆抗体

用3．5L和14L生物反应器培养WUT3杂交瘤细胞,结果表明用人血清可以代替牛血清培养WuT3细胞,在1％人血清培养液中添加适当营养成分,可达到10％小牛血清浓度下的细胞浓度（1．5×106／ml）和单抗产量（大于50μg／ml）。放大到75L生物反应器中采用半连续方式培养,建立了中试培养工艺流程和质控点,收获时细胞浓度为1.0×106～1．5×106／ml,单抗产量为40～70μg／ml,平均日产单抗达1g。在3．5L、14L、75L逐级放大培养过程中,细胞支原体为阴性,收获上清中单抗免疫活性合格,热原试验合格。     

大规模提取体内治疗用单克隆抗体的工艺

用两步法从WuT3细胞培养上清中提取WuT3单克隆抗体（McAb）,首先将培养上清直接上SP离子交换柱,再上DEAE柱,获取提纯的McAb。该工艺的确定及放大均在Pharmacia产Biopilot中试纯化系统上进行。一次投料20L,纯化规模达2g,纯化的McAb经SDS－PAGE测定,纯度基本达到95％,免疫荧光活性为66±9％。热原质合格,支原体、残余DNA均为阴性,达到体内制剂质控要求。