Bacillus fordii MH602海因酶序列及同源建模分析

海因酶是5-取代海因生物转化制备手性氨基酸的关键酶.通过同源建模法建立MH602海因酶的三维结构,经分析,91.3%的氨基酸残基在可信区间,无氨基酸残基在不可信区间,而且能量处于较低水平,此模型可进一步研究.将MH602海因酶序列和PDB数据库中现有的6个海因酶序列比较(PDB编号为:1KID,1YNY,1NFG,1GKP,1GKQ,1GKR),结果显示了保守的活性位点残基(4个HIS,1个ASP),3个立体化学环(SGLs)和底物环外侧链结合的残基(MET63,PHE65,LEU94,PHE152,TYR155,VAL158,LEU159).通过比较发现MH602海因酶在159位是LEU,比其他海因酶的PHE159提供更大的底物结合空间,可能降低了对映体选择性但增加了对羟基苯海因的活力.为利用定点突变改造酶分子,提高MH602菌株生产L氨基酸的能力提供理论指导.     

山梨醇月桂酸酯的酶法制备工艺研究

研究了以山梨醇和月桂酸为原料,在固定化脂肪酶的催化下合成山梨醇月桂酸酯的反应。通过考查原料配比、酶的用量、溶剂(丙酮)的用量、反应温度及时间等因素对反应的影响,确定了最佳反应条件为:原料配比山梨醇∶月桂酸为2.0∶1(物质的量比),反应的溶剂为丙酮,丙酮用量为10 mL/mmol月桂酸,固定化脂肪酶的用量为0.24 g/mmol月桂酸,在60℃下反应72 h,月桂酸的转化率可达到98.2%。当山梨醇月桂酸酯的质量分数为0.06%时,产物的表面张力约为41.5×10-5 N/m。     

十二烯基琥珀酸单麦芽糖酯的合成研究及表征

将溶于一定量有机溶剂的十二烯基琥珀酸酐滴加入麦芽糖碱性水溶液中反应得十二烯基琥珀酸单麦芽糖酯。通过考察原料配比、酸酐溶剂、酸酐滴加速度、反应时间等因素对十二烯基琥珀酸单麦芽糖酯产率的影响,确定了最佳反应条件:原料配比麦芽糖∶酸酐(物质的量比)为4∶1,酸酐溶剂为丙酮,酸酐滴加1 h,在35℃条件下反应6 h,十二烯基琥珀酸单麦芽糖酯的产率为83.1%。当十二烯基琥珀酸单麦芽糖酯水溶液的质量浓度为1.35 mg/mL时,产物的表面张力约为36.64×10-3 N/m。     

耐有机溶剂脂肪酶产生菌的筛选及其酶学性质

以体积分数10%的甲苯等有机溶剂为筛选压力,从油污和污水等样品中筛选到一株产耐有机溶剂脂肪酶的有机溶剂耐受茵LX1,经16 S rDNA序列分析,该菌株鉴定为Pseudomonas aeruginosa.研究发现菌株LX1所产脂肪酶最适反应pH和温度分别为7.0和40℃,在较宽的pH范围内(6.5～10.5)具有较高的稳定性;金属离子鏊合剂EDTA和Ba~(2+)、Ca~(2+)对LX1脂肪酶活力均有明显的激活作用,推测该脂肪酶为金属激活酶.LX1脂肪酶在体积分数25%的疏水性和亲水性有机溶剂中均具有较好的耐受性,在十六烷、十四烷、十二烷、正庚醇、正辛醇和正己醇体系中半衰期显著延长到10 d以上,在DMF和DMSO体系中的半袁期为5 d以上,均高于在无溶剂体系中的半衰期.展现了LX1脂肪酶在有机相生物催化中的良好应用前景.     

耐热纤维素酶产生菌的筛选、鉴定及产酶条件优化

从温泉热源地区采集的大量泥土和水样中，筛选出一株在60℃生长的纤维素酶产生菌SH2。结合菌株的生理生化特性分析与Biolog微生物自动鉴定仪的鉴定结果，命名为热葡糖苷酶地芽孢杆菌（Geobacillus thermoglucosidasius）SH2，该菌株兼性好氧，在45～60℃能较好地生长。对菌体生长与产酶培养条件优化表明：初始pH值为5．5，碳、氮源分别为蔗糖和玉米浆时有利于产酶，经48h发酵后纤维素酶酶活达0．36IU／mL。纤维素酶反应条件研究表明，该纤维素酶的最适pH值为6．0，在pH4．0～10．0范围具有较强的耐受性；在45～65℃间酶活差异仅在5％之内，显示了很好的温度耐受性。     

组成型天冬氨酸转氨酶基因工程菌的构建与高效表达

天冬氨酸转氨酶AspAT是苯丙酮酸转氨制备L-苯丙氨酸的关键酶. 本研究将大肠杆菌中天冬氨酸转氨酶基因aspC克隆到3种不同质粒中，构建组成型表达质粒pUC/P-aspC, pSE/P-aspC, pET/P-aspC，并分别转化至6种常用的大肠杆菌宿主中. 通过对18种重组子的生长及产酶情况的分析，比较了各种重组子生长压力、质粒稳定性与表达酶活的关系，并经SDS-PAGE电泳分析AspAT的表达量，筛选出高产AspAT的重组子BL21(pET/P-aspC)，以该工程菌发酵液直接作为酶液，以天冬氨酸和苯丙酮酸(20 g/L)为底物，发酵液与底物以1:3的体积比转化生成L-苯丙氨酸16.2 g/L，转化率高达80.1%. 该体系表达无需诱导，转化无需添加辅酶PLP，展现了良好的产业化前景.     

极端微生物与工业生物催化剂开发

工业催化领域对生物催化剂提出了苛刻的要求,特别是高浓度底物或产物、高离子强度、酸碱条件及其非水相催化,如何获得高效的生物催化剂是催化技术发展的关键。极端微生物是高效工业生物催化剂的重要来源,本文主要介绍从嗜热菌、嗜盐菌或耐盐菌、耐辐射微生物、耐有机溶剂等极端微生物出发发现并开发高效工业生物催化剂,可望为生物技术的进一步发展提供一个更广阔的资源。     

纸基传感器的研究进展

近年来,柔性传感器以日新月异的速度进入大众视野,尤其是纸基传感器,因其具有柔性、成本低、可回收及环境可降解等优点被广泛应用于生物医学微流控、微生物检测、环境控制、食品安全及可穿戴等领域。虽然,纸基传感器相关研究仍在不断更新,但对其研究进展却缺乏全面而系统的报道;因此,本文主要对纸基传感器的制备方法、检测手段及多元应用进行详细的论述和总结,并对纸基传感器的最新发展和挑战进行综述,最后对该领域的未来展望提出笔者的看法和见解。     

重叠PCR技术在构建sodAP基因表达载体中的应用

目的应用重叠PCR技术,构建节杆菌DMDC12的Mn-SOD基因sodAP的重组表达质粒,并在E.coliBL21(DE3)中表达。方法设计两对引物,分别扩增启动子P121和sodAP基因序列,利用重叠PCR技术,将启动子P121与sodAP基因相连接并测序,连接产物插入原核表达质粒pET-22b(+),构建重组质粒pET-PsodAP,转化E.coliBL21(DE3)进行表达。用SDS-PAGE检测表达产物,光密度定量分析法分析目的蛋白表达量。结果启动子P121和sodAP基因的连接产物经凝胶电泳检测,可见约800bp的目的条带,测序结果与预期相符;重组表达质粒pET-PsodAP经双酶切鉴定,表明构建正确;目的蛋白在E.coliBL21(DE3)中获得了表达,表达量占菌体总蛋白的19%。结论应用重叠PCR技术,成功构建了sodAP基因的重组表达质粒,并在E.coliBL21(DE3)中获得表达,为Mn-SOD的进一步工业化生产奠定了基础。     

利用Biolog系统进行乳酸生产菌代谢能力的快速分析

利用Biolog系统考察目标菌株对产乳酸途径相关碳源的代谢能力,表明在厌氧条件下两自行筛选的候选菌株中S-18比菌株S-44具有更高的己糖激酶和乳酸脱氢酶等产乳酸代谢关键酶活力;通过好氧条件下产乳酸途径及旁路相关碳源利用能力的考察,显示在好氧条件下丙酮酸更易转向旁路代谢且L-乳酸脱氢酶受到强烈抑制,为乳酸发酵条件的优化与调控奠定了理论基础.利用Biolog系统对特定代谢途径代谢能力进行分析的方法具有快速、简便、重现性高的特点,并适合高通量分析的目的,可促进工业微生物代谢能力及代谢调控研究的普遍开展.