T C-1-HPV16 L1细胞模型与动物模型的建立与评价

为了解决人乳头瘤病毒16型L1蛋白(HPV16L1)为主要靶点的疫苗缺乏肿瘤模型细胞来验证疫苗的免疫效果的问题,构建了一个细胞模型并可以利用此细胞在实验动物体内形成肿瘤,用于以HPV16L1为主要靶点疫苗的验证实验。利用这个模型细胞或肿瘤模型可以在体内外检测疫苗的免疫学性质和保护功效。首先,利用聚合酶链式反应(polymerase chain reaction,PCR)的方法获得目标基因HPV16L1的基因序列并连接到载体质粒中,将质粒转染到细胞TC-1后在杀稻瘟菌素抗性压力筛选下获得稳定表达HPV16L1的细胞株。对TC-1和TC-1-HPV16L1两种细胞的生长增殖和成瘤特性进行比较发现,外源基因的加入对细胞特性没有影响。通过体外杀伤实验证实细胞TC-1-HPV16L1能够被HPV16L1靶点疫苗免疫过的小鼠脾淋巴细胞杀伤。实验动物被疫苗免疫后,进行攻瘤实验发现疫苗只对TC-1-HPV16L1组具有保护作用。综上,在本研究中成功地构建了可以检测HPV16L1疫苗的抑瘤效果的模型细胞TC-1-HPV16L1,为HPV疫苗的研究提供了一个模型细胞。     

系列鼠抗CD分子单克隆抗体轻、重链可变区基因的克隆和序列分析

目的 获取系列鼠抗人CD分子单抗的轻链及重链可变区基因并进行克隆和测序。方法 采用RT－PCR技术，从WuT4、WUT3、WuTac、WuLCA、WuT9杂交瘤细胞总RNA中分别扩增出轻链和重链可变区基因，进行克隆并作核苷酸序列分析。结果 以上几种抗体的轻重链可变区的 PCR产物大小均为 400bp左右，成功构建了pMD18－T－VL和 pMD18－T－VH克隆载体，经限制性酶切分析，其大小与预期结果相符，并按ABI PRLSM BigDye系统测序。结论 经与Kabat、Blast抗体基因同源数据库比较，所获基因片段均为抗体基因。