力学刺激促进骨髓基质干细胞体外软骨分化

目的探讨离心力刺激对猪骨髓基质干细胞(BMSCs)体外成软骨分化的作用,以及对三维支架上构建组织工程化软骨的影响,明确力学刺激与细胞分化及组织形成的关系,为体外软骨构建提供适当参数。方法抽取8周龄猪髂嵴骨髓,应用贴壁法分选单个核细胞,体外培养扩增后获得第2代BMSCs,以5.0×107/cm3的细胞密度接种到聚羟基乙酸(PGA)制成的圆柱形三维支架上,7d后分成4组,在不同的力学条件及诱导条件下培养。8周后取材,行相关检测。结果力学诱导组形成的组织呈白色,细腻光泽,形状规则,体积无明显改变,有良好的弹性和硬度,并具有典型的软骨陷窝结构和大量软骨特异性细胞外基质,Ⅱ型胶原及丰富的聚合蛋白多糖(GAG)成分。GAG含量为(6.0±1.2)mg/g,抗压强度为(2.2±0.8)kPa,弹性模量为(7.4±1.6)kPa。各项指标均明显优于其他各组。结论力学刺激有利于促进BMSCs成软骨分化,并在三维支架材料上构建组织工程化软骨。     

低密度传代培养人脂肪基质细胞的体外增殖和表面抗原表达

目的:观察低密度传代培养对人脂肪基质细胞的形态、增殖能力和表面抗原表达的影响。方法:实验于2004-05/2006-01在上海交通大学医学院附属第九人民医院整形外科和组织工程研究中心完成。①吸脂术获得脂肪组织,经胶原酶消化分离。②培养脂肪基质细胞,原代细胞80%融合后分别以5000/cm2和1000/cm2的接种密度传代至第3代。③四唑盐比色法和流式细胞法检测比较不同密度传代培养对细胞形态、增殖能力及表面抗原表达的影响。结果:①低密度传代培养的细胞形态相对均一、体积较小。②四唑盐比色法结果显示低密度传代细胞增殖活力与高密度传代培养组差异无显著性。③流式细胞学检测结果表明,低密度培养组表达CD105,CD166,Stro-1,Flk-1等干细胞相关表面抗原的细胞比例显著高于高密度培养组。结论:低密度传代培养有利于脂肪基质细胞的体外增殖,并能显著提高细胞群体中干细胞的比例,有可能发展成为一种简便的脂肪干细胞纯化方法。     

肠梗阻患者的临床护理体会

目的探讨肠梗阻患者的临床护理。方法回顾性分析我院近年来收治肠梗阻患者100例的护理体会进行分析。结果保守治疗及手术治疗后科学合理的护理,均取得痊愈。结论预防术后过度的粘连的产生,保证充分有效的胃肠减压,胃肠功能恢复后合理饮食是保证康复的首要条件。     

妇科细胞学检查按照VCE取材及Bethesda系统报告方式的体会

既往宫颈及阴道细胞学检查一直采用巴氏分级法。１９９８年６月起我们按照ＶＣＥ取材并用Ｂｅ－ｔｈｅｓｄａ系统报告方式,至１９９９年１２月共进行１４０５例,现将体会报告如下。１ＶＣＥ取材１． １ＶＣＥ的由来 Ｖ是 Ｖａｇｉｎａ的字头,指用刮板取自阴道上１／３段侧壁处的标本;Ｃ是Ｃｅｒｖｉｘ的字头,指用刮板取自宫颈外口鳞柱交界区的标本;Ｅ是Ｅｎｄｏｃｅｒｖｉｘ的字头,指用棉棒取自宫颈管粘膜组织处的标本。分别涂在同一张玻片上,按ＥＣＶ顺序均匀涂片,立即放置在９５％乙醇中固定２０ｍｉｎ,行巴氏染色,树脂胶封片…     

舒芬太尼复合罗哌卡因联合分娩镇痛对产程及阴道助产率影响的研究

目的探讨舒芬太尼复合罗哌卡因联合分娩镇痛对产程及阴道助产率的影响。方法选择足月阴道分娩初产妇486例,分为分娩镇痛组362例和非无痛分娩组（对照组）124例,观察镇痛效果、镇痛药物不良反应、第一产程、第二产程时间,缩宫素使用、产钳助产、胎儿窘迫、新生儿窒息及产后出血等发生情况。结果舒芬太尼复合罗哌卡因分娩镇痛效果显著（P〈0．01）;镇痛组第一产程活跃期和第二产程时间略长于对照组,但两组比较差异无统计学意义（P〉0．05）;缩宫素的使用、产钳助产、胎儿窘迫、新生儿窒息及产后出血量两组比较,差异无统计学意义（P〉0．05）。镇痛组主要的不良反应为皮肤瘙痒,与对照组比较,差异有统计学意义（11．6％ vs 2．4%,P〈0．05）;但呕吐及运动阻滞的不良反应两组间差异无统计学意义（P〉0．05）;结论舒芬太尼复合罗哌卡因用于分娩镇痛效果好,略延长产程,但并不增加助产率。     

增强型绿色荧光蛋白转染活细胞效率的研究

目的 研究影响增强型绿色荧光蛋白(EGFP)逆转录病毒表达系统转染活细胞效率的主要相关参数,建立一种稳定高效的活细胞EGFP标记技术.方法 培养、扩增携带EGFP逆转录病毒载体的包装细胞PGl3,分别于12h、24h、36 h和48 h收集病毒液,转染骨髓基质细胞(BMSCs),通过流式细胞仪和荧光显微镜检测不同时间点病毒转染效率.选择转染率最高时间点的病毒液,连续转染BMSCs两次,小剂量嘌呤霉素筛选6h,观察病毒转染率及细胞活力.再以上述方法转染脂肪基质细胞(ADSCs)和成纤维细胞(FBs),观察这种方法标记其他干细胞或成熟分化细胞的可行性.结果 根据流式细胞仪及荧光显微镜观察结果,24h收集的病毒液转染BMSCs效率最高(64.56±2.53)％,36 h次之(56.98±3.22)％,12 h(47.39+1.82)％与48 h(37.84±1.77)％相对较低.连续转染两次并经短暂筛选后,BMSCs转染率可达80％以上,且细胞活力不受影响.采用相同方法转染脂肪基质细胞(ADSCs)和成纤维细胞(FBs),转染率均能达到80％,且细胞形态、增殖能力均未见明显改变.结论 本实验建立了一种稳定高效的活细胞EGFP转染技术,为研究组织工程种子细胞的体内、外转归及细胞间相互作用提供了稳定且直观的检测手段.     

组织工程软骨生物反应器的设计

目的 根据流体力学原理优化反应器内腔结构,并设计一套组织工程软骨生物反应器.方法 采用计算机仿真的方法对反应器内腔流场进行仿真计算,通过流场分析确定内腔结构,最终构建一套完整的生物反应器系统.结果 确定了生物反应器的内腔结构,生物反应器由控制系统和细胞培养室两部分构成,能置于培养箱中对软骨细胞材料复合物进行动态培养.结论 反应器内腔的结构是合理的.整个生物反应器系统运行可靠.     

加强外来流动人VI围产期保健降低母儿围产期病率的研究

随着我国经济建设的快速发展，大批流动人口涌入沿海省市工作和生活，这些流动人口中占相当比例的民工，因生活水平、教育、经济及社会等原因所限，成为不可忽视的弱势群体。近年来随着我国围产期保健条件的改善和水平的提高，孕产妇及围产儿死亡率逐年下降，但是流动人口中孕产妇的围产期保健管理仍是一个薄弱的环节。我院位于珠江三角洲经济开发区，这里是民工集中的地区，为了探讨对外来流动人口中孕产妇的围产期保健问题，以我院收治孕产妇中本地居民与外来流动民工人口对比研究为例，对2001～2004年我院住院分娩的产妇及其围产期结局以及围产儿情况进行回顾性对比分析，以期针对这一类人群采取积极有效的保健措施，改善母婴不良围产结局。     

低密度传代培养人脂肪基质细胞的体外增殖和表面抗原表达

目的：观察低密度传代培养对人脂肪基质细胞的形态、增殖能力和表面抗原表达的影响。 方法：实验于2004-05／2006—01在上海交通大学医学院附属第九人民医院整形外科和组织工程研究中心完成。①吸脂术获得脂肪组织，经胶原酶消化分离。（函培养脂肪基质细胞，原代细胞80％融合后分别以5000／cm^2和1000／cm^2的接种密度传代至第3代。③四唑盐比色法和流式细胞法检测比较不同密度传代培养对细胞形态、增殖能力及表面抗原表达的影响。 结果：①低密度传代培养的细胞形态相对均一、体积较小。②四唑盐比色法结果显示低密度传代细胞增殖活力与高密度传代培养组差异无显著性。③流式细胞学检测结果表明，低密度培养组表达CD105，CD166，Stro-1，Flk-1等干细胞相关表面抗原的细胞比例显著高于高密度培养组。 结论：低密度传代培养有利于脂肪基质细胞的体外增殖，并能显著提高细胞群体中干细胞的比例，有可能发展成为一种简便的脂肪干细胞纯化方法。     

羟色胺对体外培养的人胎盘滋养细胞凋亡的影响

目的：探讨5-羟色胺(5-HT)对胎盘滋养细胞凋亡的影响及其与妊娠高血压疾病发生、发展的相关关系。方法：将正常妊娠37~39周经剖宫产术获取的无菌胎盘滋养细胞分离、纯化、高糖型DMEM培养传代，第1～2代培养的细胞分成4组，加无菌蒸馏水对照组和加入0.1、1及10 μmol·L^-1浓度5-HT组，分别孵育培养3、6、12及24 h后，采用TdT末端转移酶介导的原位缺口末端标记法（TUNEL）检测各组培养的胎盘滋养细胞凋亡指数；采用电镜观察各组凋亡滋养细胞的超微结构。结果：10 μmol·L^-1 5-HT组培养3、6、12及24 h可使胎盘滋养细胞凋亡指数分别升至8.40±2.48、17.82±5.43、29.53±7.41及45.56±12.10，与对照组(1.21±0.97、2.30±1.24、3.89±2.32及7.34±5.59)比较，差异均有显著性（P<0.05）；1 μmol·L^-15-HT组在培养12及24 h可使胎盘滋养细胞凋亡指数升高至17.96±3.48、23.76±8.47，与对照组比较差异均有显著性（P<0.05）；0.1 μmol·L^-1 5-HT组胎盘滋养细胞凋亡指数与对照组比较，差异无显著性(P>0.05)。透射电镜下可见对照组及0.1、1和10 μmol·L^-1浓度5-HT处理组发生凋亡的胎盘滋养细胞均呈特征性的凋亡细胞改变：染色质固缩成块，核仁裂解消失，可见凋亡小体。结论：高浓度5-HT可促进胎盘滋养细胞凋亡，此机制可能与妊娠期高血压疾病的发生、发展有关。