兔角膜缘上皮干细胞体外扩增及生物学鉴定

背景:角膜缘干细胞体外培养的关键在于建立稳定的体外培养体系,包括角膜缘干细胞的定位、培养条件、载体选择和鉴别方法等.目的:探索兔角膜缘上皮干细胞体外扩增方法,并对其生物学特性进行鉴定.方法:采用兔角膜缘组织块培养法,以人羊膜为载体,在体外进行兔角膜缘上皮干细胞原代和传代培养.倒置显微镜观察其体外生长特征;苏木精-伊红染色以及扫描电镜观察其形态;AE5和P63单克隆抗体免疫组织化学染色鉴定其蛋白表达.结果与结论:采用组织块培养法可在体外获得角膜缘上皮干细胞,能成功传代培养且保持较高增殖潜能.培养于去上皮羊膜上的干细胞可融合成片,呈"拉网"现象.原代角膜缘上皮干细胞AE5单克隆抗体染色阳性率低于5%,P63染色阳性达90%;随传代次数增加AE5染色阳性率增高,P63染色阳性率降低.结果显示兔角膜缘组织块培养法可以在体外成功获得角膜缘上皮干细胞,原代和传代细胞均具有干细胞特性,以羊膜为载体培养可形成角膜移植片.

Abstract：

BACKGROUND: How to establish a stable in vitro culture system, including location of corneal limbal epithelial stem cells, in vitro sample harvest, in vitro culture, vector selection, as well as identification methods, play a key role in corneal limbal epithelial stem cells culture. OBJECTIVE: To culture the isolated rabbit corneal limbal epithelial stem cells and to identify the biological properties of cultured cells. METHODS: The primary rabbit cornel limbal epithelial stem cells were isolated and cultured with tissue inoculation using human amniotic membrane as vector. The growth features of cells were observed under an inverted microscope. The morphology of cells was observed by hematoxylin-eosin staining and a scanning electron microscope. Furthermore, the monoclonal antibody AE5 and P63 two-step immunohistochemical staining were used to identify limbal epithelial stem cell protein expression. RESULTS AND CONCLUSION: The rabbit corneal limbal epithelial stem cells could be successfully cultured and maintained a relatively high value-added potential in vitro. Rabbit corneal limbal epithelial stem cells cultured on the amniotic membrane pull netted cellular layer. The AE5 monoclonal antibody positive rate of primary cultured cells was about 5% and P63 monoclonal antibody positive up to 90%. AE5-positive rate increased and P63-positive rate decreased with the increase in the number of subculture. The rabbit limbal epithelial stem cells can be successful culture and amplified on human amniotic membrane in vitro by limbal tissue culture method. The cultured cells maintain the characteristics of corneal epithelial cells. The rabbit corneal limbal epithelial stem cells can form grafts on the amniotic membrane.     

兔角膜缘上皮干细胞体外扩增及生物学鉴定

背景:角膜缘干细胞体外培养的关键在于建立稳定的体外培养体系,包括角膜缘干细胞的定位、培养条件、载体选择和鉴别方法等.目的:探索兔角膜缘上皮干细胞体外扩增方法,并对其生物学特性进行鉴定.方法:采用兔角膜缘组织块培养法,以人羊膜为载体,在体外进行兔角膜缘上皮干细胞原代和传代培养.倒置显微镜观察其体外生长特征;苏木精-伊红染...     

兔角膜缘上皮干细胞体外扩增及生物学鉴定

背景：角膜缘干细胞体外培养的关键在于建立稳定的体外培养体系,包括角膜缘干细胞的定位、培养条件、载体选择和鉴别方法等。目的：探索兔角膜缘上皮干细胞体外扩增方法,并对其生物学特性进行鉴定。方法：采用兔角膜缘组织块培养法,以人羊膜为载体,在体外进行兔角膜缘上皮干细胞原代和传代培养。倒置显微镜观察其体外生长特征;苏木精-伊红染色以及扫描电镜观察其形态;AE5和P63单克隆抗体免疫组织化学染色鉴定其蛋白表达。结果与结论：采用组织块培养法可在体外获得角膜缘上皮干细胞,能成功传代培养且保持较高增殖潜能。培养于去上皮羊膜上的干细胞可融合成片,呈＂拉网＂现象。原代角膜缘上皮干细胞AE5单克隆抗体染色阳性率低于5%,P63染色阳性达90%;随传代次数增加AE5染色阳性率增高,P63染色阳性率降低。结果显示兔角膜缘组织块培养法可以在体外成功获得角膜缘上皮干细胞,原代和传代细胞均具有干细胞特性,以羊膜为载体培养可形成角膜移植片。     

血管活性肠肽对哮喘小鼠气道炎症及Th17/Treg平衡的影响

目的探讨血管活性肠肽(VIP)对哮喘小鼠气道炎症的影响,以及对Th17细胞/调节性T细胞(Treg)失衡的调控作用。方法将30只BALB/c小鼠随机分成对照组、哮喘组、VIP组,每组10只。利用卵白蛋白(OVA)致敏和激发制作急性哮喘小鼠模型;对照组致敏和激发阶段均以生理盐水代替OVA;VIP组每次OVA激发前,先以VIP溶液(20μg/m L)雾化吸入30 min。留取各组小鼠支气管肺泡灌洗液、肺组织等标本。利用苏木精-伊红染色观察肺组织病理变化;ELISA法检测肺泡灌洗液中Th17/Treg相关细胞因子水平;免疫组化及Real-time PCR检测肺组织中Th17细胞特异性转录因子RORγt及Treg特异性转录因子Foxp3表达情况。结果病理组织学结果显示VIP组小鼠肺组织气道炎症表现较哮喘组减轻。哮喘组小鼠BALF中IL-17浓度高于对照组(P0.01),VIP组IL-17浓度较哮喘组降低(P0.01),但仍高于对照组(P0.01)。哮喘组BALF中IL-10浓度低于对照组(P0.01),VIP组IL-10浓度较哮喘组升高(P0.01),但仍低于对照组(P0.01)。哮喘组小鼠肺组织RORγt mRNA及蛋白表达高于对照组(P0.01),Foxp3 mRNA及蛋白表达低于对照组(P0.01);VIP组肺组织RORγt mRNA及蛋白表达水平低于哮喘组(P0.01),Foxp3 mRNA及蛋白表达水平高于哮喘组(P0.05)。结论哮喘小鼠存在Th17/Treg免疫失衡,VIP可通过调控Th17/Treg免疫失衡而改善哮喘小鼠气道炎症。     

兔角膜缘上皮干细胞体外扩增及生物学鉴定

背景：角膜缘干细胞体外培养的关键在于建立稳定的体外培养体系，包括角膜缘干细胞的定位、培养条件、载体选择和鉴别方法等。 目的：探索兔角膜缘上皮干细胞体外扩增方法，并对其生物学特性进行鉴定。 方法：采用兔角膜缘组织块培养法，以人羊膜为载体，在体外进行兔角膜缘上皮干细胞原代和传代培养。倒置显微镜观察其体外生长特征；苏木精-伊红染色以及扫描电镜观察其形态；AE5和P63单克隆抗体免疫组织化学染色鉴定其蛋白表达。 结果与结论：采用组织块培养法可在体外获得角膜缘上皮干细胞，能成功传代培养且保持较高增殖潜能。培养于去上皮羊膜上的干细胞可融合成片，呈“拉网”现象。原代角膜缘上皮干细胞AE5单克隆抗体染色阳性率低于5%，P63染色阳性达90%；随传代次数增加AE5染色阳性率增高，P63染色阳性率降低。结果显示兔角膜缘组织块培养法可以在体外成功获得角膜缘上皮干细胞，原代和传代细胞均具有干细胞特性，以羊膜为载体培养可形成角膜移植片。     

儿童肺炎支原体肺炎流行病学特征

目的：了解儿童肺炎支原体肺炎流行病学特点,为临床诊治提供参考。方法：对2011年2月至2012年1月确诊为社区获得性肺炎的3156例住院患儿应用酶联免疫吸附法检测血清肺炎支原体抗体IgM,同时对肺炎支原体肺炎患儿的鼻咽分泌物进行7种呼吸道病毒抗原检测。结果：（1）3156例患儿中,肺炎支原体抗体IgM阳性检出427例,阳性率为13.53%,其中女性患儿感染率高于男性（16.30% vs 11.70%, P<0.01）。（2）＜1岁、1岁～、3岁～、6～14岁肺炎支原体抗体IgM检出率分别为3.6%、12.5%、19.2%、24.4%（P<0.01）,其中≥3岁者总检出率高于<3岁者（P<0.01）。（3）不同季节肺炎支原体抗体IgM检出率不同,夏秋季节明显高于冬春季节（19.18% vs 9.61%,P<0.01）。（4）427例肺炎支原体抗体IgM阳性患儿中,合并呼吸道病毒感染 60例（14.1%）,合并比例最高的呼吸道病毒为呼吸道合胞病毒。结论：儿童肺炎支原体肺炎呈全年散发,以夏秋季节多见,学龄前及学龄期儿童高发,同时还存在混合感染现象。