我校药理学实验教学改革的一些尝试

本报道了我校在药理学教学中进行的一系列改革尝试，内容涉及实验内容、实验操作方法以及实验手段等方面，并经过反复的探索，实践证明改革的思路是正确的，可行的。     

COX-2表达与铝过负荷致小鼠脑损伤关系的初步研究

目的初步研究Cyclooxygenase-2表达与铝过负荷致小鼠脑损伤的关系。方法侧脑室注射铝盐，一天一次．连续5天，建立铝过负荷致小鼠脑损伤模型。美乐昔康．在每次给予铝盐前30min腹腔注射给予，连续5天，并在停止给予铝盐后继续给予10天。以行为学、病理形态学、脑组织MDA含量、脑组织ChAT、APP、Aβ、COX-2蛋白和COX-2 mRNA表达等的改变为观察指标。结果铝过负荷诱导了小鼠明显的学习记忆能力损害、海马神经元损伤、脑组织MDA含量显增加，脑组织APP、A8、COX-2蛋白和COX-2 mRNA表达明显增加，而ChAT蛋白明显降低；美乐昔康给予能以剂量依赖性的方式改善铝过负荷诱导的小鼠学习记忆能力损害、     

单胺氧化酶B在神经元退行性变模型中的意义研究

目的：研究不同神经元退行性变动物模型中单胺氧化酶B（MAOB）活性变化，并探讨其意义。方法：NIH雄性小鼠，分别建立脑缺血再灌注、铝过负荷及一氧化碳中毒神经元退行性变模型。采用Morris水迷宫和跳台实验进行学习记忆能力测试，HE切片染色光镜下观察海马病理变化和以市售标准试剂盒测定脑匀浆MAOB活性。结果：各模型组小鼠较相应对照组学习记忆能力显著降低，海马切片可见神经元核固缩和细胞丢失等退行性改变。脑缺血再灌注模型组MAOB活性与对照组相比无显著变化，但铝中毒和一氧化碳中毒模型小鼠MAOB活性较对照组显著升高。结论：MAOB活性异常升高在各种神经元退行性变动物模型中不具有普遍性意义。脑缺血再灌注模型可能适用于痴呆研究，而一氧化碳中毒和铝过负荷模型可能适用于痴呆和锥体外系疾病研究。     

COX-2抑制剂对慢性铝过负荷大鼠海马5-脂氧酶表达的影响

目的探讨COX-2抑制剂美洛昔康对慢性铝过负荷大鼠海马5-LO表达的影响。方法葡萄糖酸铝灌胃给予Wistar大鼠,1次/d,每周5 d,连续20 w,建立慢性铝过负荷致神经元退变大鼠模型。美洛昔康(1和3 mg/kg),在每次给予铝盐后30 min灌胃给予。RT-PCR检测大鼠海马5-LO mRNA的表达变化,Western印迹方法检测5-LO蛋白表达情况。结果慢性铝过负荷致大鼠海马5-LO mRNA和蛋白表达明显增加。美洛昔康能明显阻遏慢性铝过负荷诱导的大鼠海马5-LO mRNA和蛋白表达的增加。结论 COX-2抑制剂明显下调慢性铝过负荷大鼠海马5-LO表达。     

探索立体综合监管确保药品生产质量

自2006年2月起,北京市药品监督管理局将药品生产企业的日常监管职能划分到基层分局。职权划分之后,北京市     

人PPARδ受体cDNA全长序列的克隆及测序

目的:对人过氧化物酶体增殖物激活受体δ(hPPAR δ)全长cDNA序列进行克隆并测序,为构建含hPPAR δ基因真核表达载体及其受体功能研究奠定基础.方法:采用逆转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)从HepG2细胞总RNA克隆hPPAR δ全长cDNA序列,胶回收目的条带后与pMD19-T载体连接并转化DH5α感受态菌,用BamH Ⅰ、Sal Ⅰ双酶切及基因测序筛选、鉴定阳性克隆pMD19-hPPARδ-T载体中hPPARa基因的完整性和忠实性.结果:经酶切和测序证实pMD19-hPPARδ-T载体中插入的hPPARδ基因序列与GeneBank中提交的序列(AY919140)一致.结论:成功克隆了hPPARδ基因,构建了pMD19-hPPARδ-T中间载体,为含hPPARδ基因真核表达载体的构建和受体功能研究打下了良好的基础.     

大鼠皮层神经元原代培养方法的改进

目的:建立一种简单、较理想的新生大鼠皮层神经元体外原代培养方法.方法:采用低浓度、短时间胰酶消化和机械分离相结合的方法制备皮层神经元悬液,进行培养.结果:在体外培养条件下神经元结构特征明显,并能形成典型的神经元网络.结论:本方法适合普通实验室进行大鼠皮层神经元体外培养.     

重组人PPARα基因载体phPPARα-IRES2-EGFP高效体外转染表达体系的建立

目的 建立体外phPPARα-IRES2-EGFP质粒高效转染并获得重组基因hPPARα高效表达的体系.方法 采用阳离子脂质体Lipofectamine 2000将phPPARα-IRES2-EGFP转染入293细胞,荧光显微镜观察质粒转染的293细胞绿色荧光蛋白(GFP)报告基因表达强度及转染效率,并对转染细胞hPPARα的表达进行荧光定量PCR和Western Blot检测.结果 荧光显微镜下可见转染phPPARα-IRES2-EGFP的293细胞GFP报告基因高表达,转染效率高达(83±9)%;并且,其hPPARα mRNA表达水平高于空载体转染对照组3个数量级,hPPARα蛋白表达也远高于对照组(P＜0.01),说明导入的重组质粒能够高效表达bPPARα.结论 成功建立重组质粒phPPARα-IRES2-EGFP高效体外转染表达体系,为hPPARα受体功能的研究及基于hPPARα为靶标的药物筛选平台的建立奠定了基础.