云南昆明彝族和汉族儿童HLA-DQB1等位基因的多态性研究

研究不同人群HLA的多态性，对于探讨相关疾病的致病机制及器官移植配型都有着重要的理论和应用意义。本文采用了聚合酶链反应．序列特异性引物(polymerase chain reaction—sequence specific primers，PCR—SSP)技术对云南昆明地区70名彝族和72名汉族健康儿童进行了HLA—DQB1基因分型，旨在探讨昆明彝族和汉族人群HLA—Ⅱ类基因频率分布特征，从而提供一些遗传学方面的数据。     

昆明白族和彝族人群HLA-DRB1/DQB1等位基因遗传特点及频率分布比较

目的研究昆明白族和彝族儿童HLA-DRB1／DQB1等位基因多态性,分析比较昆明白族和彝族人群的遗传特点。方法采用PCR-SSP基因分型技术,分别对70名白族儿童和70名彝族儿童进行HLA-DRB1／DQB1基因分型。结果昆明白族儿童在HLA-DRB1位点上共检出13种等位基因,依次为DRB1*08(20．7％)、*04(16．4％)、*12(16．4％)、*15(8．57％)、*0901(8．57％)、*14 (6．43％)、*11(5．71％)、*16(5．00％)、*13(4．29％)、*07(2．86％)、*03(2．86％)、*01 (1．43％)、*10(0．71％);HLA-DQB1位点上共检出7种等位基因,依次为DQB1*0301(23．6％)、*06(21．4％)、*05(18．6％)、*04(18．6％)、*0303(7．14％)、*0302(6．43％)、*0201(4．29％)。彝族儿童在HLA-DRB1位点上共检出12种等位基因,依次为DRB1*12(33．57％)、*0901 (11．43％)、*04(11．43％)、*01(8．57％)、*11(7．86％)、*14(7．14％)、*15(7．14％)、*08 (5．00％)、*03(2．83％)、*13(2．14％)、*07(1．43％)、*16(1．43％);HIA-DQB1位点上共检出7种等位基因,依次为DQB1*0301(45％)、*05(22．14％)、*0303(12．14％)、*04(6．43％)、*06 (6．43％)、*0201(4．29％)、*0302(3．57％)。组间比较HLA-DRB1／DQB1等位基因总体分布及诸多等位基因频率均有显著差异。结论昆明白族和彝族人群HLA-DRB1／DQB1等位基因分布具有各自遗传特点。     

彝族儿童幽门螺杆菌感染HLA-DQA1免疫遗传学特征分析

目的研究人类白细胞抗原(HLA)DQA1基因位点上是否存在H.pylori感染的易感基因或抵抗基因，探讨免疫遗传因素在H.pylori感染中的作用。方法用聚合酶链反应-序列特异性引物(PCR-SSP)技术对用血清学试验及^13C尿素呼气实验确诊的31例H．pylori感染的彝族儿童及39例无感染儿童进行HLA．DQA1基因分型。结果感染组HLA-DQA1*0102等位基因频率明显高于对照组(14．52％vs3．85％，P=0．025，Pc=0．35)，OR=4．245(95％CI：1．097～16．428)；感染组HLA-DQA1*0302等位基因频率低于对照组(0 vs12．82％，P=0．003，Pc=0．042)，OR=1．147(95％CI：1．053-1．249)。结论在HLA-DQA1位点上，H．pflori感染的彝族儿童与对照组儿童存在免疫遗传学差异，HLA-DQA1*0102基因可能是彝族H．pylori感染的易感基因，而HLA-DQA1*0302基因则可能是抵抗基因和具有免疫抵抗作用。     

16SrRNA荧光定量PCR技术检测轮状病毒肠炎患儿肠道菌群变化的临床意义

目的以轮状病毒(RV)肠炎患儿和健康婴幼儿为研究对象,探讨荧光定量PCR技术在检测肠道菌群变化的实用性和可行性。 方法应用荧光定量PCR技术测定细菌的16SrRNA，对RV肠炎患儿和健康婴幼儿粪便中双歧杆菌、乳酸杆菌和大肠杆菌进行定量检测和分析,并和其他专家用传统方法所获得的结果进行比较。 结果RV肠炎患儿的肠道菌群与健康儿童比较发现肠道中双歧杆菌和乳酸杆菌的数量变化差异有显著性(P<0.05)，而大肠杆菌的数量差异无显著性(P>0.05)。其结果与其他文献报道的用细菌培养的方法所得结果一致。 结论RV肠炎患儿肠道中益生菌的数量较正常对照组明显减少。荧光定量PCR技术比传统方法特异性高、敏感性强，更省时和省力，临床上可用此方法对患儿肠道细菌变化进行定量分析。     

云南昆明白族和汉族儿童HLA-DRB1、HLA-DQB1位点基因多态性比较

目的研究昆明白族、汉族人群HLA—DRB1、HLA-DQB1位点的遗传特征。方法采用序列特异性引物（PCR-SSP）方法对昆明70名白族、72名汉族儿童的HLA-DRB1、HLA-DQB1位点等位基因进行分析。结果在HLA-DRB1位点上，昆明白族儿童共检出13个等位基因，汉族检出12个；在HLA-DQB1位点上两组均检出7个等位基因。组间比较HLA—DRB1／DQB1等位基因总体分布及诸多等位基因频率均有显著差异。结论昆明白族和汉族儿童在HLA—DRB1、DQB1等位基因频率分布上既有相似性，又存在差异性。     

2007年至2008年昆明地区腹泻患儿轮状病毒非结构蛋白基因特征的分析

目的 探讨轮状病毒非结构蛋白(NSP4)基因的特征及变异情况.方法 在2007年和2008年昆明医学院第一附属医院儿科住院的96例秋冬季腹泻患儿中,随机选取轮状病毒阳性的12例(其中2007年6例,2008年6例)患儿粪便标本,采用RT-PCR扩增NSP4基因,并进行测序,测序结果 用DNAassist软件对核苷酸序列进行翻译,并用Clustal-mp软件与Genbank Datebase中的4株人RV(Wa、KUN、AU-1、Hochi)、3株动物RV(EW、OSU、SAll)和中国北京、上海、广州的流行株的NSP4序列进行分析比较.结果 (1)选取的2007年6份和2008年6份样本均可以扩增出NSP4的全长片段,测序表明:2007年6份样本中有5株属于Wa株,1株属于KUN株;2008年6份样本中也有5株属于Wa株,1株属于KUN株.10株Wa株与来自GenBank Database的4株人RV(wa、KUN、AU-1、Hochi)和3株动物RV(EW、OSU、SAll)同源性分别为96.3%、85.3%、84.7%、95.1%和57.7%、92%、82.8%,与中国北京、上海、广州的流行株同源性均在95%以上;2株KUN株与以上来自GenBank Database的标准株的同源性分别为85.3%、98.2%、82.8%、85.9%、60.1%、85.3%、94.3%,和其他地区流行株的同源性为85%左右; (2)以Wa株为参考,10株Wa株的NSP4基因变异发生在第34位氨基酸,第76位氨基酸,第141位氨基酸,第145位氨基酸,第161位氨基酸和第169位氨基酸;以KUN株为参考,2株KUN株的NSP4基因变异仅在第87位氨基酸和第140位氨基酸.结论 2007年和2008年昆明地区流行株NSP4基因为Wa组和KUN组,以Wa组为主.     

慢性胃炎患儿家族内幽门螺杆菌亚型感染分析

目的了解慢性胃炎患儿家族幽门螺杆菌（Hp）感染的情况以及家族内幽门螺杆菌亚型的分布。方法采集14例因反复腹痛来我院就诊的患儿及其家庭成员共73例的静脉血,应用幽门螺杆菌金标免疫斑点法和免疫印迹法对患儿及其家族成员进行Hp抗体和亚型的检测。结果慢性胃炎患儿家族中Hp抗体阳性率i00％,免疫印迹Hp亚型抗体阳性率95．9％,其中I型Hp感染占60．3％,Ⅱ型Hp感染占35．6％。I型HP及Ⅱ型Hp感染阳性率在患几与二级亲属之间差异均有统计学意义（P〈0．05）,VacA抗体检出率在有胃肠道疾病组（66．7％）及无胃肠道症状组（35．3％）之间差畀有统计学意义（P〈O．05）。家族成员患Hp感染胃肠道疾病有家庭聚集现象。结论慢性胃炎患儿家族中Hp感染阳性率高,I型Hp感染阳性率随年龄的增加而升高,Ⅱ型Hp感染阳性率随年龄的增加而降低,VacA抗体的分布与消化道症状有关。     

云南省昆明市汉族儿童幽门螺杆菌感染HLA-DRB1、DQB1免疫遗传学分析

目的探讨昆明市汉族幽门螺杆菌感染儿童HLADRB1、DQB1免疫遗传学特征。方法应用聚合酶链反应序列特异性引物方法,对35例昆明市汉族儿童幽门螺杆菌感染(实验组)和37名汉族健康儿童(对照组)进行HLADRB1、DQB1基因分型。结果实验组幽门螺杆菌感染HLADRB10901、DQB103032基因频率明显低于对照组健康儿童(7.14%vs.31.08%,χ2=13.16,Pc<0.012;5.71%vs.25.68%,χ2=10.68,Pc=0.007)。其余等位基因的频率比较均无明显的差异。结论HLADRB10901、DQB103032基因可能是昆明汉族儿童抵抗幽门螺杆菌感染的保护基因。     

昆明地区2002-2004年轮状病毒肠炎患儿的病毒分子流行病学特征

目的研究昆明地区2002~2004年轮状病毒肠炎患儿的病毒分子流行特征。 方法收集昆明医学院第一附属医院2002、2003、2004年9~12月儿科住院和门诊轮状病毒肠炎患儿的粪便标本计210份。采用聚丙烯酰胺凝胶电泳法检测轮状病毒基因组，用逆转录 聚合酶链反应(RT PCR)以及巢式 PCR(net PCR)对5种主要的VP7的血清型(G1、G2、G3、G4和G9)进行分型，并采用RT PCR对VP7阳性标本进行NSP4(非结构蛋白4)的基因扩增，选取30份标本用net PCR法扩增出NSP4 CDNA 500bp送去测序。 结果210份标本中轮状病毒基因阳性143份(681%)，其中长型143份，未发现短型和混合型。143份阳性标本行RT PCR扩增VP7全基因，134份获得阳性产物，进一步用net PCR分型显示G3型73例(73/134，545%)，G1型38例(284%),未分型11例(82%)，混合型8例(6%)，G4型4例(3%),未发现G2和G9型。所有VP7阳性标本均可以扩增出NSP4的全长，其中30份标本送去测序显示有变异。 结论A组轮状病毒是目前昆明地区婴幼儿腹泻的主要致病原，在不同的3年中，轮状病毒电泳型以长型为主，血清型以G3、G1型为主，G4型少见，未见G2、G9型。3年监测结果显示NSP4存在变异，但未发现轮状病毒肠炎临床症状与NSP4的变异有关。     

云南昆明白族、汉族、彝族儿童HLA-DQA1等位基因多态性分析

为了解昆明白族、汉族、彝族儿童HLA-DQA1等位基因多态性。采用PCR-SSP技术对昆明地区无血缘关系的3个民族儿童的HLA-DQA1等位基因进行分析。结果显示3个民族儿童HLA-DQA1基因位点上共检出14种等位基因。其中昆明白族儿童HLA-DQA1最常见的等位基因为*0601(16.67%),高频等位基因为*0103、*0102、*0303;昆明汉族儿童HLA-DQA1最常见的等位基因为*0302(26.67%),高频等位基因为*0103、*0601;昆明彝族儿童HLA-DQA1最常见的等位基因为*0601(38.57%),除*0601外没有高频等位基因,余基因频率均小余10%,同时在基因排序上3个民族也存在着差异。结果提示,昆明地区3个民族儿童HLA-DQA1基因分布既有共同特点,又有其独特性。