单侧特发性声带麻痹神经电刺激治疗后即刻疗效初步观察

目的 探讨单侧特发性声带麻痹喉返神经/喉上神经电刺激治疗后即刻对主观声音改变、声学参数以及动态喉镜观察结果的影响。 方法 选取诊断为单侧特发性声带麻痹的患者,回顾性收集其行喉肌电图检查并同期行神经电刺激治疗前后的动态喉镜及嗓音分析检查结果,分析检查及治疗前后主观声音改变,声学参数(jitter、shimmer、DSI、MPT)及动态喉镜观察结果。 结果 共计43例单侧特发性声带麻痹患者符合纳入标准,其中喉返神经合并喉上神经受损4例、喉上神经受损1例、喉返神经受损38例。喉肌电图检查及神经电刺激治疗后患者即刻均自觉讲话较前轻松感;治疗后即刻动态喉镜检查发现5例(11.6%)患者声带闭合较前无明显变化,声嘶无明显好转;38例(88.4%)患者动态喉镜显示声门裂均较检查前明显变小,可采集到基频及黏膜波,声嘶较前明显好转;声学参数前后变化:MPT(6.58±2.75 vs 10.3±5.18,P<0.001)、DSI(-3.79±6.7 vs -0.11±1.68,P=0.002),jitter及shimmer治疗前后比较差异无统计学意义(P>0.05)。 结论 特发性声带麻痹患者早期接受喉肌电图检查及神经电刺激干预治疗可改善患者声嘶,明显延长最长发音时间,改善嗓音障碍严重指数,显著改善声门闭合程度,提示对神经功能的恢复有促进作用。     

山东省中药配方颗粒备案审查现状及问题思考

近几年,我国大力推动中医药发展,通过改革完善中药审查审批机制,全面加速中医药产业现代化进程。中药配方颗粒是传统中药融入现代的传承,其便捷度、高效性等特点为中药临床应用拓展了一个新渠道。随着中药配方颗粒试点工作的结束和国家药品标准的出台,中药配方颗粒进入了蓬勃发展阶段。为促进中药配方颗粒的安全、有效及质量可控,本文概述了我国及山东省中药配方颗粒发展历程、山东省备案审查现状,并对中药配方颗粒备案审查及研发生产中存在的问题进行了探讨,提出建立符合中药配方颗粒特点的备案审查体系、鼓励企业做好基础性和前瞻性研究工作的建议,为今后中药配方颗粒的备案审查和研发生产提供参考。     

阻塞性睡眠呼吸暂停低通气综合征患者严重程度与睡眠质量及白天嗜睡的相关性研究

目的研究阻塞性睡眠呼吸暂停低通气综合征(obstructive sleep apnea hypopnea syndrome，OSAHS)严重程度与睡眠质量及白天嗜睡的相关性。方法2016年5月—2018年10月在西安交通大学第二附属医院耳鼻咽喉科确诊为OSAHS的患者257例，分为轻、中、重3组，用Epworth嗜睡（Epworth sleeping scale,ESS）量表和匹兹堡睡眠质量指数(Pittsburgh sleep quality index，PSQI)量表分别评价患者的嗜睡程度和睡眠质量，共253例患者完成量表。将呼吸睡眠暂停低通气指数（apnear hypopnea index,AHI）与嗜睡程度、睡眠质量进行比较，评价其相关性。结果患者AHI与白天嗜睡程度呈正相关（r=0.249, P<0.001）；与PSQI量表中主观睡眠质量(成分Ⅰ)呈正相关（r=0.261, P=0.004）；与日间功能障碍（成分Ⅶ）呈正相关（r=0.127, P=0.025）。PSQI总体睡眠质量评分与ESS的嗜睡程度呈正相关（r=0.214, P=0.001）。结论AHI、白天嗜睡、睡眠质量三者均只能从各自角度反映OSAHS患者的严重程度。在评估OSAHS患者严重程度时，三者不能互为替代，要相互结合、综合评价。     

大鼠背部毛乳头细胞的分离培养和鉴定

目的:建立一种高效分离成年SD大鼠背部毛乳头细胞(DPCs)的方法,考察DPCs在体外培养条件下的生长特性。方法:采用改良二步酶消化法分离大鼠背部DPCs,应用相差显微镜进行形态学观察,流式细胞技术检测细胞周期,细胞计数法绘制生长曲线,流式细胞技术和免疫细胞化学法检测细胞表面分子标志。结果:分离培养的DPCs多呈短梭形,融合前细胞呈现凝集性生长趋势;传代细胞呈多角形或短梭形,传代后第3天开始呈对数生长,第9天达增殖高峰。第1、3、5代的细胞增殖时间分别为68、52和36h。流式细胞仪检测第1、3、5代细胞周期,处于G0/G1期分别为(90.21±5.13)%、(81.23±1.85)%和(75.16±5.32)%,随着传代次数的增加,G0/G1期细胞比例逐渐下降,但仍大部分处于静止期;经免疫化学SABC法染色显示,α-SMA抗体表达阳性,CK抗体表达阴性,细胞表面分子表达CD44、CD90,但不表达CD34。结论:改良二步酶消化法能成功分离培养成年SD大鼠背部DPCs,体外培养的DPCs与干细胞的生物学特性相吻合,有望成为一种新的细胞替代疗法的种细胞来源。     

间歇低氧模型大鼠肝脏组织中IGF-1、IGFBP-3的表达及分析

目的 检测阻塞性睡眠呼吸暂停低通气综合征(OSAHS)间歇性低氧模型大鼠肝脏组织中IGF-I及IGFBP-3水平的变化,探讨间歇低氧对肝脏的影响,为研究儿童OSAHS的病理生理改变提供客观依据。 方法 24只雌性20日龄SD大鼠随机分为对照组、轻度低氧组、重度低氧组,轻度低氧组、重度低氧组大鼠饲养于间歇性缺氧密闭箱内8 h/d。35 d后处死取材,免疫组织化学法检测肝脏IGF-1、IGFBP-3。 结果 对照组、轻度低氧组、重度低氧组肝组织IGF-1的阳性表达分别为2/8、3/8和6/8,IGFBP-3的阳性表达分别为3/8、4/8和7/8,有逐渐升高趋势。对照组与轻度低氧组肝组织IGF-1、IGFBP-3的表达差异无统计学意义。对照组与重度低氧组肝组织IGF-1、IGFBP-3的表达差异无统计学意义。Spearman秩相关检验表明,重度低氧组中IGF-1与IGFBP-3的高表达呈正相关(r=0.746, P<0.05)。 结论 间歇性低氧模型中大鼠肝细胞IGF-1与IGFBP-3含量受生长激素(GH)-IGF1-IGFBP3轴功能紊乱的影响不大,重度低氧组大鼠肝细胞IGF-1与IGFBP-3含量与对照组及轻度低氧组比较无显著差异。     

大鼠Atohl真核表达载体pAtoh1-IRES2-EGFP的构建及转染293T细胞的研究

目的:利用基因工程方法克隆SD大鼠Atohl基因编码区序列,构建Atohl的真核表达载体pA-tohl-IRES2-EGFP,并验证其在293T细胞中的表达.方法:通过RT-PCR从SD大鼠结肠组织内扩增出Atohl基因全长CDS序列,并TA克隆于PMD-19T载体中.纯化回收的目的片段测序后连接于真核细胞表达载体pIRES2-EGFP中,构建pAtohl-IRES2-EGFP真核表达载体.再次测序后脂质体介导重组质粒转染293T细胞,荧光显微镜下观察绿色荧光蛋白的表达.结果:测序后将扩增得到的大鼠Atohl CDS序列与GeneBank公布的参考序列对比,有两处碱基发生突变,但克隆序列编码的氨基酸序列与参考序列完全一致,两处碱基应为单核苷酸多态性,突变为无义突变,不影响蛋白表达.双酶切和测序结果证明Atohl已正确地克隆到真核表达载体pIRES2-EGFP中,重组质粒转染293T细胞24 h后荧光显微镜下观察到绿色荧光蛋白表达.结论:获得正确Atohl编码序列,真核表达载体pAtohl-IRES2-EGFP构建成功并可以在293T细胞中表达,为进一步对感音神经性聋的基因治疗奠定了基础.     

大鼠核转录因子Atoh1的克隆表达及鉴定

目的利用基因工程方法克隆SD大鼠Atoh1基因CDS区序列,构建大鼠核转录因子Atoh1的真核表达载体并在真核细胞中表达。方法从两只SD大鼠结肠黏膜提取总RNA,采用逆转录PCR法扩增Atoh1基因CDS区序列并亚克隆于PMD-19T载体中。测序鉴定后将Atoh1基因连接于含有EGFP和内部核糖体转入位点(IRES)的真核细胞表达载体pIRES2-EGFP中,对重组质粒进行酶切鉴定和测序鉴定后,以脂质体介导法转染至293T细胞,荧光显微镜和Western blot检测其在293T细胞中的表达。结果扩增得到大鼠Atoh1 CDS区长1 056 bp,编码351个氨基酸,与GeneBank公布的参考序列对比,有两处碱基发生突变,但克隆序列编码的氨基酸序列与参考序列完全一致,两处碱基应为单核苷酸多态性(SNP),突变为无义突变,不影响蛋白表达。双酶切和测序结果证明Atoh1已正确地克隆到真核表达载体pIRES2-EGFP中,荧光显微镜和Western blot证实Atoh1目的蛋白能在293T细胞中稳定表达。结论基因工程方法可成功克隆出Atoh1编码序列,真核表达载体pAtoh1-IRES2-EGFP构建成功并可以在293T细胞中表达。     

达克罗宁胶浆与利多卡因复合麻醉在窄带成像内镜喉部疾病检查中的应用

目的 探讨达克罗宁胶浆与利多卡因复合麻醉在窄带成像内镜喉部疾病检查中应用的临床效果。 方法 对240例接受窄带成像内镜喉部疾病检查的患者,随机分成达克罗宁组、利多卡因组、达克罗宁与利多卡因复合麻醉组,每组80例,观察其麻醉效果,记录总有效率、视觉模拟量表(VAS)评分。 结果 三组麻醉效果总有效率分别为70%、90%、88.75%,其中复合麻醉组与利多卡因组总有效率无统计学差异,均显著高于达克罗宁组;复合麻醉组患者VAS评分最低(4.38±2.48),利多卡因组次之(4.78±2.83),达克罗宁胶浆组(5.94±2.70)最高,三者差异有统计学意义。 结论 应用达克罗宁胶浆与利多卡因复合麻醉可以安全有效地帮助患者完成窄带成像内镜喉部疾病检查,检查效果与单用利多卡因表面麻醉相当,但能够更好的减少患者的痛苦。单用达克罗宁胶浆麻醉无法很满意的完成窄带成像内镜下喉部疾病检查。