异补骨脂查耳酮对前列腺癌细胞PC3增殖、迁移、凋亡、侵袭的影响

目的 探讨异补骨脂查耳酮对前列腺癌细胞PC₃增殖、迁移、凋亡和侵袭的影响。方法 实验分为空白组(A组，等体积培养基)，阿霉素组(B组，20μmol/L)，异补骨脂查耳酮低、中、高剂量组(C₁组、C₂组、C₃组，10,20,40μmol/L)。各组细胞以培养基或加入相应药物的培养基处理。采用CCK-8法，测定450 nm波长处细胞的吸光度，并计算细胞存活率；改良Matrigel Boyden室测定法检测细胞侵袭力，并统计侵袭细胞数；划痕实验法检测细胞相对迁移力，并计算相对迁移率；流式细胞术检测细胞凋亡情况，并计算细胞凋亡率；实时荧光定量聚合酶链式反应(qPCR)法检测细胞核因子红系2相关因子(Nrf2)、超氧化物歧化酶1(SOD1)mRNA表达水平；Western blot法检测细胞Nrf2、SOD1蛋白表达水平。结果 与A组比较，B组和C₁组、C₂组、C₃组细胞的存活率、侵袭数、迁移率均显著降低(P <0.05)，凋亡率、Nrf...     

基于UHPLC-Q-TOF-MS技术的中药补骨脂化学成分表征与鉴定

建立超高效液相色谱-四极杆飞行时间质谱联用技术(UHPLC-Q-TOF-MS),结合自建化学成分数据库，系统开展中药补骨脂化学成分的表征与鉴定。通过单因素实验依次对色谱分离条件(固定相、柱温、流动相、洗脱梯度)和质谱监测的关键参数(毛细管电压、喷嘴电压、Fragmentor)进行了优化，最终采用BEH C₁₈色谱柱(2.1 mm×100 mm, 1.7μm),流动相为0.1%甲酸水-乙腈，流速0.4 mL·min^-1,柱温30℃,在正、负离子模式下采用Auto MS/MS进行数据采集。通过对照品比对、二级质谱裂解碎片解析、自建数据库检索以及文献分析等，从中药补骨脂中共鉴定或初步推导了83种化合物，包括58种黄酮类、11种香豆素类、4种萜酚类、10种其他类。其中有16种化合物通过与对照品比对获得鉴定，10种化合物可能尚未从补骨脂中报道。该研究对补骨脂中的化学成分进行快速定性分析，为阐释其物质基础、促进质量控制提供了有益参考。     

基于网络药理学、分子对接和体外实验探讨补骨脂定抗鼻咽癌的作用机制

目的：基于网络药理学和生物信息学探讨补骨脂定（PSO）治疗鼻咽癌的作用及分子机制。方法：将鼻咽癌5-8F细胞分为5-8F组（0μmol/L PSO）,PSO低剂量组（10μmol/L组）、中剂量组（20μmol/L组）、高剂量组（30μmol/L组）。通过CCK-8、平板克隆探究PSO对鼻咽癌5-8F细胞增殖、克隆形成的影响；Pubchem、Pharmmapper、GeneCards数据库得到PSO治疗鼻咽癌的潜在靶点；DAVID数据库进行GO、KEGG分析；STRING、GEPIA数据库和Cytoscape软件构建网络图并得到核心靶点；分子对接、western blotting对核心靶点及主要通路进行验证。结果：PSO呈浓度依赖性抑制5-8F细胞的增殖；与5-8F组比较，PSO各剂量组细胞克隆形成能力降低（P<0.05）;PSO治疗鼻咽癌的潜在靶点共有66个，KEGG分析显示，与PI3K-Akt信号通路密切相关；核心靶点为ALB、HSP90AA1、SRC、EGFR、CASP3、ANXA5、MAPK1，其中ALB、HSP90AA1、ANXA5为生存相关靶点；PSO与核心靶点ALB...     

基于AMPK/GSK-3β/Nrf2信号通路探讨补骨脂相反相成配伍减毒机制

目的 探讨补骨脂的反成配伍对大鼠肝脏的减毒作用及作用机制。方法 80只SD大鼠采用随机数字表法分为空白组、模型组、补骨脂组、补骨脂+制何首乌1∶1组、补骨脂+制何首乌1∶2组、补骨脂+制何首乌2∶1组、补骨脂+熟地黄1∶1组、补骨脂+五味子1∶1组，每组10只大鼠。除空白组外，其他组皮下注射氢化可的松(25 mg/kg)制备肾阳虚大鼠模型，每日1次，连续注射14 d。大鼠建立肾阳虚模型后，给予相应药物干预，各组给药剂量均为12.6 g/kg,连续灌胃4周。HE染色观察大鼠肝脏组织病理变化。酶联免疫吸附测定检测大鼠血清中谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)、碱性磷酸酶(ALP)、直接胆红素(DBIL)和总胆红素(TBIL)水平，以及肝组织中超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)表达水平。实时荧光PCR检测核因子E2相关因子2(Nrf2)、Kelch样环氧氯丙烷相关蛋白1(Keap1)、血红素加氧酶-1(HO-1)、醌氧化还原酶1(NQO1)mRNA的表达。蛋白质印迹法检测AMP活化蛋白激酶(AMPK)/糖原合成酶激酶-3β(GSK-3β)/N...     

补骨脂异黄酮对UVB诱导HaCaT细胞凋亡的保护作用及机制研究

目的探讨补骨脂异黄酮对中波紫外线(UVB)诱导人永生化角质细胞(HaCaT)凋亡的保护作用及相关机制。方法采用四甲基噻唑蓝(MTT)法检测HaCaT细胞增殖率,筛选补骨脂异黄酮的实验浓度及UVB的照射时间,建立UVB诱导的HaCaT细胞凋亡模型。采用流式细胞术检测细胞凋亡率;试剂盒检测细胞中超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)、过氧化氢酶(CAT)活性;qRT-PCR法检测HaCaT细胞半胱氨酸蛋白酶(Caspase-3)mRNA表达;Western Blot法检测HaCaT细胞p-AKT、AKT、Caspase-3蛋白表达。结果选择10-5mol·L^-1浓度用于后续实验,10 min的UVB照射时间用于建立HaCaT细胞凋亡模型。与空白组比较,模型组的细胞增殖率明显下降,细胞凋亡率明显升高,SOD、GSH-Px及CAT活性显著降低,Caspase-3mRNA及p-AKT、Caspase-3蛋白表达显著上调,差异均有统计学意义(P<0.01)。与模型组比较,补骨脂异黄酮组的细胞增殖率显著升高,细胞凋亡率明显降低,SOD、GSH-Px、CAT活性显著升高,Caspase-3 mRNA及p-AKT、Caspase-3蛋白表达显著下调,差异均有统计学意义(P<0.05,P<0.01)。结论补骨脂异黄酮对UVB诱导的HaCaT细胞凋亡具有保护作用,可能与下调Caspase-3及p-AKT表达,提高抗氧化酶的活性有关。     

碱提酸沉法提取补骨脂中补骨脂乙素的工艺研究

目的：通过碱提酸沉的方法对补骨脂乙素的提取进行工艺优化。方法：以补骨脂乙素的含量为指标，通过单因素试验和正交试验考察料液比、碱液浓度、碱提时间、酸沉pH、酸沉时间以及超声时间对补骨脂乙素提取工艺的影响。结果：碱提酸沉法提取补骨脂乙素的最佳工艺为：料液比为1∶10、碱液浓度为4%、碱提时间为2 h、酸沉pH为6、酸沉时间为0.5 h、超声时间为20 min。结论：本研究优化的最佳工艺条件具有良好的复重性，且稳定可靠、经济环保，适合大量提取补骨脂中的补骨脂乙素。     

基于网络药理学及实验验证补骨脂乙素治疗2型糖尿病的作用机制

目的 通过网络药理学与实验验证相结合的方法探究补骨脂乙素治疗2型糖尿病的作用机制。方法 使用ECTM、SwissTargetPrediction、PubChem数据库预测补骨脂乙素的作用靶点,使用GeneCards数据库预测2型糖尿病的潜在靶点。使用Venn数据库进行靶点交互分析,通过STRING数据库计算蛋白相互网络关系(PPI),通过Cytoscape 3.9.1插件MCODE和Cytohubba筛选核心靶点。通过DAVID数据库进行基因本体(GO)和京都基因与基因组百科全书(KEGG)途径的富集分析。建立胰岛素抵抗的HepG2细胞模型,通过2-NBDG检测细胞对葡萄糖摄取的能力,通过RT-PCR和Western blotting检测网络药理学预测的磷脂肌醇-3-激酶(PI3K)/蛋白激酶B(Akt)信号通路相关mRNA及蛋白表达。结果 补骨脂乙素和2型糖尿病共同作用的基因92个,PPI网络(交互得分 ≥ 0.150)包含补骨脂乙素和2型糖尿病共同目标的86个节点和379个"边"。在MCODE和Cytohubba的筛选结果交叉后,获得了35个共同靶点。聚类分析表明,补骨脂乙素作用于2型糖尿病涉及PI3K/Akt信号通路等多种途径及细胞氧化还原反应等多种细胞进程。补骨脂乙素显著增强了胰岛素抵抗细胞对葡萄糖的摄取能力(P<0.05、0.01)。与模型组相比,补骨脂乙素处理后显著增加了胰岛素受体(INS-R)、胰岛素受体底物1(IRS1)、葡萄糖转运蛋白2(GLUT2)、PI3K、Akt mRNA的表达(P<0.01、0.001)。与模型组相比,二甲双胍组和补骨脂乙素组的INS-R、IRS1、GLUT2、Akt、PI3K、p-Akt、p-PI3K的蛋白表达显著上调(P<0.05、0.01、0.001)。结论 补骨脂乙素可能通过PI3K/Akt信号通路增加胰岛素抵抗细胞对葡萄糖的摄取能力,发挥其抗2型糖尿病作用。     

基于斑马鱼在体模型高效筛选补骨脂配伍减毒研究

目的   基于斑马鱼在体模型高效筛选补骨脂配伍减毒药味，探讨其减毒机制，为临床用药安全提供理论依据。方法   采用受精后1~6 dpf斑马鱼，研究不同药味对斑马鱼的影响，观察鱼脏器行态/形态，计数死亡数，快速筛选确定安全浓度；以补骨脂素为代表毒性成分，观察不同药味与其配伍后对斑马鱼毒性的变化，筛选有效减毒的药味及成分；采用RNA-seq技术(RNA sequencing)对杜仲代表活性成分桃叶珊瑚苷配伍补骨脂素进行转录组测序，建立基因表达谱(DGE)文库，进行肝毒相关基因本体论(GO)功能注释和京都基因与基因组百科全书(KEGG)通路分析，筛选出肝脏相关通路中有代表性的差异表达基因，初步探讨桃叶珊瑚苷配伍减毒机制。结果   通过筛选表明桃叶珊瑚苷可显著降低补骨脂对斑马鱼的肝脏毒性影响。RNA-Seq富集显示，加入桃叶珊瑚苷配伍后与原有的单一补骨脂素组相比，毒性、疾病(癌症)、免疫激活、化学致癌特征信号方面有明显的减少，神经营养因子、长寿调节、血小板激活信号通路增强。同时筛选出差异表达基因gpx1b、pgd、rrm2、gstp2、anpepb、cyp1a、prf1.5、nfκb2。结论   利用斑马鱼在体快速评价的优势，实现基于体内过程的毒性评价，先从毒性明确的代表成分补骨脂素配伍可快速锁定减毒药味及成分，利用RNA-seq技术可进一步分析其配伍减毒的机制，该研究对其临床药味配伍减毒理论具有一定的意义。