脉冲凝胶电泳分型在伤寒暴发中的应用

目的:探讨深圳市某区伤寒暴发在不同厂区,不同来源的伤寒沙门菌之间的遗传相关性,建立分子流行病学研究,进行同源性分析,并与表型分型比较。方法:对深圳市某街道社区10个工厂的伤寒患者分离的28株伤寒沙门菌,根据不同厂区、不同来源的伤寒菌株,采用传统的生化分型、血清学分型,肥达反应,药物敏感分型,荧光PCR及脉冲场凝胶电泳(PFGE)分子生物学分型的技术进行研究。结果:从93例发热现症病人的血和粪便中分离出28株伤寒沙门菌,肥达反应阳性(“O”≥1∶80;“H”≥1∶160;)59例,分离出伤寒沙门菌患者中,肥达反应阳性19例。从伤寒沙门菌菌株中抽取4个工厂患者中分离的11株伤寒沙门菌和1株乙型副伤寒沙门菌,进行了荧光PCR和脉冲场凝胶电泳(PFGE)全基因DNA指纹图谱分析,12株伤寒沙门菌的指纹图谱完全相同,有高度的同源性。对12株伤寒沙门菌荧光PCR检测均呈阳性,28株伤寒沙门菌生化表型相同,血清学分型相同,药敏结果有差异,肥达实验抗体滴度与健康人群比较,差异有统计学意义。结论:生化表型和血清学分型不能进行同源性分析,而通过脉冲场凝胶电泳(PFGE)全基因DNA指纹图谱分析,可追溯其同源性,通过12株伤寒菌株的PFGE分型图谱分析,菌株之间有高度的同源性,确认是由相同病原菌引起的一宗伤寒疫情。     

深圳市细菌性食物中毒病原菌的调查与预防

目的了解深圳市近年引起细菌性食物中毒常见病原菌的种类、特点和趋势，为检测和预防控制细菌性食物中毒提供科学依据。方法根据《中华人民共和国国家标准食品卫生检验方法》微生物学部分对深圳市2003-2005年细菌性食物中毒检测致病菌资料进行统计分析。结果在3a中报告的63起细菌性食物中毒中依次是以副溶血弧菌（39．7％）、变形杆菌（15．9）、沙门菌（12．7）、金黄色葡萄球菌（11．1％）、蜡样芽胞杆菌（3．2％）为主要致病菌。结论深圳市为沿海城市，细菌性食物中毒病原菌以副溶血弧菌、变形杆菌为主，今后在对食品污染监测时，可重点监测上述致病菌，开发快速检测方法，这样可为预防、处理和治疗食物中毒赢得时间，确保食物中毒病人及时得到治疗，保障病人的安全和身体健康。     

深圳市SARS临床诊断病例血清学及病原学实验研究

严重急性呼吸综合症（severe acute respiratory syndrome,SARS）是一种新的急性呼吸道传染病.该病于2002年11月16日最早发现于广东省佛山市,随后广东多个城市均出现SARS病例.广东省共发生SARS病例1 511例,死亡58例.我国共发生SARS病例5 326例,死亡346例.全世界共32个国家和地区出现SARS病例8454例,死亡792例.2003年2月下旬,香港、德国和美国的实验室通过病毒分离培养、电镜、RT-PCR检测和免疫荧光抗体检测,发现一种新型的冠状病毒（又称SARS病毒,SARS-Cov）,是导致SARS的病原体.     

伤寒和甲、乙、丙型副伤寒沙门菌多重PCR及荧光PCR分型方法的建立与评价

目的建立伤寒和甲、乙、丙型副伤寒沙门菌的快速和特异的检测方法,用于沙门菌属内的分型鉴定。方法根据GenBank公布的伤寒和甲、乙、丙型副伤寒沙门菌的保守序列设计引物和改良分子信标探针,建立多重PCR检测方法和实时荧光PCR检测方法。结果采用所建立的多重PCR方法可分别检测到伤寒的3条特异性条带、甲型副伤寒沙门菌的2条特异性条带和丙型副伤寒沙门菌的1条特异性条带,但是乙型副伤寒沙门菌未出现特异性条带。建立的实时荧光PCR方法可以快速、特异、灵敏地检测出伤寒和甲、乙、丙型副伤寒沙门菌,纯DNA和菌液的最低检出限分别可达10 fg/reaction和20 CFU/reaction;对77株细菌的检测正确率达100%。结论建立的实时荧光PCR检测方法比多重PCR方法更能快速、特异、灵敏地检测伤寒和甲、乙、丙型副伤寒沙门菌。     

深圳西乡近五年副溶血弧菌的分子特征及血清型别变迁研究

目的了解深圳西乡街道五年来引起感染性腹泻的副溶血弧菌血清型分布、毒力因子及分子流行病学特征,为暴发疫情早期预警预测提供基础数据。方法用传统血清凝集法做血清型鉴定、用荧光PCR法检测毒力基因,再采用脉冲场凝胶电泳(PFGE)对副溶血弧菌进行分子分型。并用BioNumerics软件对PFGE分型图谱进行聚类分析。结果从4 825份标本中,分离出目标致病菌1 077株,其中病原菌副溶血弧菌851株,占79.01%。851株中,563株副溶血弧菌为O3:K6型,占66.15%,其次是O4:K8型,占10.34%。93.4%(795/851)的菌株是tdh+tlh+trh-菌株。对60株O3:K6型副溶血弧菌进行PFGE图谱分析共得到20种不同的PFGE图谱类型,各菌株图谱条带差异小于3条。结论深圳西乡街道五年来副溶血弧菌感染以O3:K6型为主,93.4%的菌株是tdh+tlh+trh-菌株。各菌株图谱具有同源性。     

深圳地区2002-2008年副溶血弧菌分子特征研究

目的了解深圳地区副溶血弧菌主要血清型和分子分型以及毒力因子分布,分析新O3:K6型克隆群与国际流行株的进化关系.方法对2002-2008年深圳地区1005株副溶血弧菌临床分离株进行血清型分型;采用荧光PCR方法对68种不同血清型的28 1株副溶血弧菌进行tlh、toxR、tdh和trh毒力基因检测;对281株菌株进行orf8检测;采用脉冲场凝胶电泳(PFGE)对不同分离时间的5种主要血清型菌株进行分子分型,根据有代表性的分子分型图谱选取82株副溶血弧菌菌株进行GS-PCR检测,并选取60株副溶血弧菌菌株进行toxRS基因测序;进而对41株O3:K6和O1:K25副溶血弧菌菌株进行多位点序列分型(MLST)分析,采用eBURST软件分析进化关系.结果1005株菌共得到79种不同的血清型,主要血清型为O3:K6、O4:K8、O1:K25、O1:KUT、O4:K68、O1:K56和O9:K44,所占比例分别为57.9%、8.16%、5.27%、5.87%、1.39%、1.39%和0.99%.243株为tlh+、toxR+、tdh+、trh-,37株为tlh+、toxR+、tdh-和trh-,1株tlh+、toxR+、tdh+和trh+.35株O3:K6型菌株的MLST序列类型为ST3,是同源复合体CC3,O4:K8型副溶血弧菌的序列类型为ST189,无同源复合体.结论深圳地区主要流行的副溶血弧菌为tdh+、trh-的O3:K6、O4:K8和O1:K25菌株,2006年后出现O1:K56、O9:K44、O3:K29、O4:K9新的血清型;其中O3:K6血清型属于新的O3:K6克隆群,与其他国家流行的副溶血弧菌属于同一克隆群,同时也存在新、旧克隆群.血清的多样性和新旧克隆群的存在是造成深圳地区副溶血弧菌腹泻病高发态势的主要原因之一.     

去甲乌药碱与6-姜酚对心肌细胞的正性肌力作用

目的:研究去甲乌药碱(higenamine)与6-姜酚(6-gingerol)单体及其配伍在正常心肌细胞的正性肌力作用.方法:急性分离成年SD大鼠左心室肌细胞,分别使用不同单体和单体间不同浓度的相互配伍作用于心肌细胞,使用Ion Optix单细胞收缩与离子测量系统检测细胞的最大收缩舒张速率(±dp/dt)、收缩幅度(ph/bl)、50％收缩舒张时间常数(T50S,T50D)的变化.结果:0.03 ～1 μmol·L-1去甲乌药碱能够浓度依赖性增强心肌收缩力和最大收缩舒张速率,起效浓度为0.1μmol·L-1,1 μmol·L-1能到最大效应,其使收缩幅度增加为234％,最大收缩速率增加为219％,最大舒张速率增加为272％,其对50％收缩舒张常数无影响,EC50约为0.205 μmol·L-,＞1 μmol·L-1即产生心肌毒性作用.3～30μmol· L-16-姜酚对心肌细胞收缩功能无显著影响,大于30 μmol·L-使心肌细胞产生不节律收缩.相互配伍不能增强去甲乌药碱的强心作用.结论:去甲乌药碱具有强心作用,与6-姜酚配伍不能显著增强去甲乌药碱的强心作用.     

消瘀降脂胶囊对载脂蛋白E基因敲除小鼠颈动脉粥样硬化的干预作用

目的探讨消瘀降脂胶囊对载脂蛋白E基因敲除(ApoE^-/-)小鼠血脂、颈动脉粥样硬化程度及斑块的影响。方法ApoE^-/-小鼠采用高脂饲料饲养,建立颈动脉粥样硬化模型。将ApoE^-/-小鼠按体重分为模型组、阿托伐他汀组及消瘀降脂胶囊低、高剂量组,每组22只。以12只C57BL/6Cnc小鼠为对照组,采用普通饲料喂养。阿托伐他汀组灌胃阿托伐他汀混悬液1.3 mg/kg,消瘀降脂胶囊低、高剂量组灌胃消瘀降脂胶囊混悬液325、975 mg/kg,对照组和模型组灌胃等体积的蒸馏水。按0.1 ml/10 g小鼠体重灌胃,1次/d,每周记录小鼠体重。连续灌胃12周后,检测小鼠血脂水平、肝脏指数。采用油红O染色和Van Gieson胶原纤维染色观察颈动脉病理学改变。结果与模型组比较,消瘀降脂胶囊高剂量组小鼠体重降低(P<0.05),血清TC[(25.92±4.21)mmol/L比(30.39±4.67)mmol/L]、LDL-C[(7.97±2.14)mmol/L比(10.26±1.97)mmol/L]水平降低(P<0.05),消瘀降脂胶囊低、高剂量组HDL-C[(0.31±0.07)mmol/L、(0.34±0.13)mmol/L比(0.26±0.09)mmol/L]水平升高(P<0.05)。病理结果显示,阿托伐他汀组及消瘀降脂胶囊高剂量组颈动脉脂质沉积阻塞比例低于模型组(P<0.05),且尚未形成血管斑块。结论消瘀降脂胶囊可降低ApoE^-/-小鼠血清LDL-C、TC水平,升高HDL-C水平,改善高血脂症状,减轻颈动脉狭窄程度,减缓颈动脉斑块生成。     

深圳市食源性金葡菌的耐药趋势及携带肠毒素监测

目的了解深圳市食源性金黄色葡萄球菌（金葡菌）的耐药趋势及携带肠毒素状况,为临床用药、防控金葡菌引发的食源性疾病提供理论依据。方法对2006～2009年自深圳市食品污染物监测及食物中毒样本检出的菌株,均按GB／T4789．10—2008对其进行生化鉴定确定。按NCCLS（2006版）进行K—B法药敏试验,同时检测诱导型克林霉素耐药。用全自动酶联荧光免疫分析仪进行金葡菌肠毒素的检测。结果从185株中检测到9株诱导型克林霉素耐药菌株;对红霉素等3种药物的耐药率呈现上升趋势,对利福平耐药率呈现下降趋势,对其他药物的耐药率呈现波动状态。食品来源的菌株与食物中毒来源的菌株对头孢西丁等4种药物的耐药率有显著性差异。食品污染物和食物中毒分离株的金葡菌肠毒素阳性率分别为49．4％和81．7％,两者有显著性差异。结论食源性金葡菌的耐药性呈上升趋势,普遍具有多重耐药。食物中毒来源的金葡菌产毒率和耐药率高于食品污染物来源的菌株。     

葡萄球菌和蜡样芽胞杆菌肠毒素液相悬浮芯片方法的建立

目的 采用Luminex液相悬浮芯片检测方法,建立一管同时检测19种葡萄球菌肠毒素和蜡样芽胞杆菌肠毒素的快速筛查方法.方法 根据GenBank公布的葡萄球菌肠毒素entA-entR基因、蜡样芽胞杆菌cesB,nheB基因,设计特异性引物和探针,优化反应体系和条件,建立19种肠毒素的Luminex液相悬浮芯片检测法.结果 Luminex液相悬浮芯片体系检测19种肠毒素互不干扰,经验证80株金葡菌和蜡样芽胞杆菌菌株,均出现特异性荧光中值信号.Luminex液相悬浮芯片技术从样品处理到检测结果需3.5h左右.结论 Luminex液相悬浮芯片筛查方法可应用于食物中毒等应急检测的快速和高通量筛查.