剪切应力对家兔血管内膜增生及动脉粥样硬化斑块形成的影响

目的设计局部狭窄而导致血流动力学改变的实验模型,探讨剪切应力对血管内膜增生以及动脉粥样硬化斑块形成的影响。方法兔颈总动脉平直段套环形成狭窄度为40%的局部狭窄,饲以正常饮食4周;数值计算的方法模拟血流流场和剪切应力分布及其特征;HE染色检测颈总动脉病理改变;Verhoeff法染色观察血管弹力纤维分布;油红O染色观察斑块内的脂质沉积;高效液相色谱检测血管壁脂质含量。结果套环形成局部狭窄后,颈总动脉血流流场发生显著的扰动,狭窄远心端有涡流以及二次流形成;狭窄近心端形成局部高剪切应力区域(6Pa),而在远心端形成振荡的低剪切应力区域(0～0.3Pa);HE染色显示颈总动脉狭窄的近心端和远心端均有明显的内膜增生以及动脉粥样硬化斑块形成,近心端比远心端病变更严重,近心端增生内膜厚度为165.6±28.3μm,远心端增生内膜厚度为38.5±12.7μm,并且近心端增生内膜的细胞成分主要为圆形的泡沫细胞而远心端增生内膜的细胞成分主要为梭形平滑肌细胞;Verhoeff染色显示病变处弹力纤维排列紊乱,部分内弹力板断裂;油红O染色发现增生的斑块中有大量的脂质沉积;高效液相色谱检测也表明狭窄近心端胆固醇含量(7.6±2.1mg/g)以及远心端胆固醇含量(5.6±1.8mg/g)较对照侧(1.3±0.5mg/g)明显增加。结论高剪切应力以及低振荡剪切应力均引发动脉粥样硬化病变的形成,但不同的剪切应力对斑块的组成和特性有着不同的作用。     

基质细胞衍生因子1α对大鼠血管平滑肌细胞与单核细胞粘附的影响

目的探讨基质细胞衍生因子1α对大鼠血管平滑肌细胞与单核细胞粘附的影响。方法原代培养的大鼠血管平滑肌细胞与50mg/L氧化型低密度脂蛋白孵育48h,将单核细胞与平滑肌细胞共孵育后洗脱检测粘附功能,并用基质细胞衍生因子1α抗体阻断。结果经氧化型低密度脂蛋白处理的血管平滑肌细胞基质细胞衍生因子1α上调5倍,单核细胞粘附增加29倍,但可被基质细胞衍生因子1α单抗所阻断。结论基质细胞衍生因子1α参与单核细胞与大鼠血管平滑肌细胞的粘附过程。     

TET1s响应振荡切应力调控血管内皮细胞功能的机制研究

目的动脉粥样硬化(AS)是心脑血管疾病的诱因之一。振荡切应力(OSS)引起的血管内皮细胞功能紊乱是AS发生发展的重要病理基础。TET1s是DNA去甲基化酶TET1的截短变体,本研究试图阐明TET1s响应OSS调控内皮功能促AS发生的分子机制。方法首先对小鼠正常血管和原代人脐静脉内皮(HUVEC)中TET1s的表达情况进行分析。然后构建小鼠振荡流模型,通过血管enface染色、qPCR及Western blot实验检测不同切应力下TET1s的表达变化,并通过生物信息学预测结合体外拮抗实验筛选TET1s上游效应分子。同时通过基因功能缺失和获得实验结合体外细胞切应力加载实验验证TET1s在OSS引起的内皮过度增殖和炎症反应中的作用。最后通过免疫荧光染色评估TET1s在内皮中的DNA去甲基化功能,并通过体外切应力加载实验和分子生物学实验探究TET1s响应OSS调控Hippo下游效应因子YAP蛋白活性的分子机制。结果 qPCR检测发现TET1s在HUVEC中高表达,而全长TET1表达极低。组织切片免疫荧光结果显示TET1s主要在血管内膜表达。OSS作用下,内皮TET1s的表达都受到显著抑制,而TET1表达没有明显变化。利用生物信息学方法发现在TET1s启动子区域存在力学敏感转录因子C/EBP beta结合位点,通过小分子H-89抑制C/EBP beta活性可下调TET1s表达。干扰TET1s表达促进内皮增殖和炎症反应,过表达TET1s可回救OSS引起的内皮增殖和炎症。免疫荧光染色显示TET1s表达变化对内皮DNA去甲基化水平并没有明显改变。TET1s响应OSS通过下调pYAPS127和上调pYAPY357水平促YAP入核并激活下游靶基因表达进而促内皮增殖和炎症反应。结论 OSS通过下调TET1s表达进而促进YAP转录活性并最终促进内皮异常增殖和炎症反应。