CRISPR-Cas9基因编辑报道系统应用于AAVS1安全港的定点整合

摘要:目的 利用ZFN 与 TALEN 基因编辑以及同源重组技术将 Cas9表达框、基因编辑效率荧光报道系统以及真 核细胞筛选标记的 DNA 超长片段定点插入 HEK-293T 细胞基因组 AAVS1安全港,建立可用于衡量 CRISPR-Cas9基 因编辑的稳定 细 胞 株。方 法 利 用 分 子 克 隆 技 术 构 建 AAVS1-all-in-one-CRISPR 质 粒。利 用 脂 质 体 将 识 别 并 切 割 AAVS1基因组序列的ZFN 和 TALEN 质粒以及 AAVS1-all-in-one-CRISPR质粒共转染入 HEK-293T细胞。使用嘌呤 霉素筛选获得单克隆细胞后,利用杀稻瘟菌素S筛选、红色荧光检测、Cas9 Westernblot以及基因组 PCR 鉴定等方法获 得 CRISPR-Cas9基因编辑报道系统完整整合入 AAVS1安全港的稳定细胞株。继而,将 EGFP修复模板单链 DNA 及 EGFPsgRNA 瞬时转染入这些稳定细胞株,对失去荧光的 EGFP进行基因编辑,恢复其发光功能,并通过荧光检测技术 验证基因编辑结果。结果 成功获得3株同时具有嘌呤霉素和杀稻瘟菌素 S抗性以及表达红色荧光蛋白的单克隆细 胞,Westernblot证实其成功表达 Cas9蛋白,基因组 PCR 鉴定目的基因成功整合入基因组 AAVS1位点。经 EGFP基 因编辑后,细胞恢复绿色荧光。结论 利用 ZFN 与 TALEN 将完整的 CRISPR-Cas9基因编辑报道系统成功整合入 HEK-293T细胞基因组的 AAVS1安全港,整合 DNA 片段长度达11.5kb,并利用 Cas9成功编辑 EGFP报道基因。     

虹膜身份识别技术在彝族地区大规模流行病学调查中的应用

目的 探索在彝族地区开展艾滋病大规模流行病学调查的有效方法.方法 引进虹膜身份识别技术,在大规模的全民体检中,将虹膜信息与个人基本信息关联,在关键环节通过虹膜技术进行身份识别,杜绝冒名顶替给数据信息带来的混乱.结果 现场体检10 104人,全部都采集到虹膜信息,采集时间在10 s内完成,识别可在1 s内完成.现场5名冒名顶替或重复体检者被有效识别,避免了虚假信息给数据库带来的混乱.结论 通过虹膜进行身份识别,能有效解决既往彝族地区大规模调查信息混乱的问题,为准确摸清当地疫情,建立居民电子健康档案奠定了基础.     

浙南地区基层医疗机构全科医生急救能力的问卷调查

目的了解浙南地区基层医疗机构全科医生急救技能和基层医疗机构急救设施配置情况。方法自行设计浙南地区基层全科医生急救技能和设施调查表,对温州、台州和丽水地区的169家基层医疗机构的480名全科医生进行问卷调查。问卷内容包括:全科医生一般资料,心肺复苏、电除颤、气管插管等急救技术掌握情况及对其在基层急救中的重要性评价,常见急危重病抢救能力、识别与转诊能力等急救应对能力是否掌握及对其在基层急救中的重要性评价,基层医疗机构心肺复苏机、心电图、床边超声等急救设施配置情况和全科医生对其在基层急救中的重要性评价。共发放问卷480份,回收有效问卷447份(93.1%)。结果447名全科医生中男性占55.9%(250/447),本科及以上学历者占70.9%(317/447),中、高级职称者占60.2%(269/447)。急救技术方面重要性评价较高者依次为心肺复苏术99.6%(445/447)、电除颤术86.6%(387/447)、呼吸球囊使用76.1%(340/447)、气管插管术69.8%(312/447),其掌握率分别为84.3%(377/447)、32.0%(143/447)、55.2%(247/447)和12.9%(58/447)。急救应对能力方面重要性评价最高者为危重症抢救能力92.4%(413/447),其掌握率为32.4%(145/447);认为床边超声应用能力重要者41.4%(185/447),其掌握率为3.8%(17/447)。在急救设施配置方面认为心肺复苏机重要者77.4%(346/447),医疗机构的配备率为16.0%(27/169);重要性评价较高的急救特检项目为心电图98.9%(442/447)、超声检查88.4%(395/447),医疗机构配备率分别为98.2%(166/169)和84.0%(142/169)。结论浙南地区基层医疗机构全科医生对心肺复苏技术掌握较好;对电除颤、气管插管、急危重症抢救掌握率较低,对其重要性认识有较大差异。     

老年患者泌尿道感染菌群分布及耐药性分析

[目的]分析引起老年患者泌尿道感染的病原菌分布特点及耐药特征，补充泌尿道感染耐药监测中老年人群的资料。[方法]利用全自动微生物鉴定系统VITEK-2对老年患者分离的菌株进行鉴定和药敏试验。[结果]肠道的正常菌群，如大肠埃希菌、肺炎克雷伯菌、粪肠球菌是老年患者泌尿道感染的主要病原菌，且真菌感染比例远高于其他人群，同时，分离株耐药程度较高。[结论]引起老年患者泌尿道感染的病原菌分布及耐药性有其相应的模式特点，相关的研究分析结果对合理使用抗菌物有重要意义。     

甲状腺脱细胞生物支架的制备及鉴定

目的 采用十二烷基硫酸钠（SDS）浸泡联合平板振荡制备兔甲状腺脱细胞生物支架,并对脱细胞支架进行评估。方法 20只新西兰大白兔随机分为正常对照组和脱细胞组,每组10只,脱细胞组兔甲状腺组织浸泡于1%SDS溶液后放置于37.0 ℃恒温振荡器中振荡24 h,去离子水振荡清除支架内残留去细胞试剂及DNA成分。对支架进行HE染色、DNA含量检测、扫描电子显微镜检查以及免疫荧光染色进行鉴定。 结果 甲状腺脱细胞支架DNA含量显著低于正常甲状腺组织（P<0.01）,DNA清除率达90%以上;经检测甲状腺脱细胞支架内无DNA成分残留,同时较为完整地保存了支架3D空间结构及蛋白成分。 结论 浸泡法联合平板振荡法可有效清除甲状腺细胞成分,较为完整地保留支架空间结构及蛋白成分。     

近年临床常见病原菌对环丙沙星的耐药趋势分析

[目的]探讨医院常见病原菌对环丙沙星的耐药性变迁，为临床合理用药提供参考依据。[方法]用常规鉴定方法分离鉴定病原菌，用K—B法作体外耐药监测。[结果]从2001～2006年6年临床常见病原菌对环丙沙星耐药率呈上升趋势，总耐药率从2001年的43．1％上升到2006年的67．6％；耐药率居前3位的分别是金黄色葡萄球菌、大肠埃希菌和凝固酶阴性葡萄球菌，其中金黄色葡萄球菌和大肠埃希菌的耐药率增长更为明显，分别达84％和77．6％；而分离率与金黄色葡萄球菌和凝固酶阴性葡萄球菌接近的铜绿假单胞菌和肺炎克雷伯菌耐药率仅为50．2％和36％，耐药率的增长存在明显差异。[结论]临床常见病原菌对环丙沙星的耐药性增长趋势不但与临床广泛应用喹诺酮类药物有关，而且与经验性应用喹诺酮类药物治疗不同部位感染也有相当密切的关系。必须在药敏结果的指导下合理使用以环丙沙星为代表的氟喹诺酮药物，控制细菌的耐药性增长。     

Extra Backup（XB）Cordis指引导管致右冠开口夹层后成功救治1例

1病例描述
　　患者男性,60岁,因“突发胸闷痛4天”为主诉于2012年10月28日入院。既往高血压病10年,吸烟20年,每天约1包,无糖尿病。入院查肌钙蛋白1 ng/mL,心电图示ST1、avl导联下移0.1 mv,STV2-6下移0.2 mv,诊断为冠心病急性非ST段抬高型心肌梗死,予积极控制血压、心率,口服玻立维、阿斯匹林抗血小板,低分子肝素抗凝治疗后于10月31日11：00行冠脉造影示：左主干未见明显狭窄,前降支近中段99%狭窄,右冠全程弥漫病变,中段最重处90%,考虑前降支为罪犯血管,经右桡动脉血管鞘送入6 FXB 3.0指引导管,在前降支近中段成功植入Firebird 23.0×29mm(16atm)药物支架（见图1、图2）。考虑患者右冠粗大,供血范围广,拟行右冠中段介入治疗。因为患者桡动脉痉挛及右锁骨下动脉至升主动脉处迂曲,更换导管存在麻烦,回想既往介入经验交流会中有报道[1]使用JL 4.0行右冠慢性完全闭塞病变及Extra Backup (XB) Cordis指引导管行右冠介入治疗的情况,遂将XB 3.0指引导管退出左窦并旋转至右冠窦,尝试使用XB 3.0指引导管行右冠介入治疗。XB导管顺利送到右冠开口,但Rinato导丝不能顺利进入右冠近段,冒烟示右冠开口下壁已形成夹层,指引导管及导丝顶在夹层处,马上退导管及导线,更换6 F JR 4.0指引导管,在右冠开口处植入Firebird 24.0×18 mm(18 atm)药物支架后于13：00结束手术（见图3～5）。术后患者血压心率稳定,无胸闷不适,诉右前臂疼痛,查患者右前臂肿胀明显,但桡动脉搏动尚可,予抬高右侧上肢,中药消炎散外敷,对症止痛治疗。17：20患者突感胸闷痛,大汗,测血压74/40mmHg,心率45次/min,心电图示STII、III、avf弓背上抬0.2～0.5 mv,诊断急性下壁心梗,考虑右冠开口支架内急性血栓形成。立即予多巴胺、阿托品静推后推送入导管室。17：48患者进入导管室后反复发作室速、室颤,予反复除颤,可达龙、利多卡因静推后终止。穿刺右侧股动静脉,经静脉鞘送临时电极入右室心尖保护性起搏,经动脉鞘送6 FJR 4.0指引导管入右冠造影示右冠开口支架血流通畅,中段闭塞。沿导管将Rinato及Runthrough二导丝送入右冠远端,2.5×15 mm球囊不能通过病变,反复调整导丝后仍不能成功。考虑JR指引导管顶在右冠开口支架上悬空,支撑差,或导丝穿支架近端网眼入右冠远端,退导丝,换6 F XBRCA入右冠开口[2],将Rinato及Runthrough导丝送入右冠远端,球囊顺利通过病变并以6 atm预扩张,在右冠中段植入Firebird 24.0×33 mm(16 atm)药物支架,退支架球囊以20 atm扩张开口支架后结束手术（见图6～8）。术后查患者心率102次/min,血压130/80 mmHg(多巴胺泵入)维持,改玻立维150 mg/d,肝素500 U/H维持24 h。经治疗1周患者病情好转好院。随访3年,患者能从事一般活动,无心绞痛发作。     

心理护理对精神分裂症住院患者家属的心理健康状况的影响

目的：探讨精神分裂症住院患者家属的心理状态,并提出相应的心理护理方法。方法：将我院2010年3月至5月收治的精神分裂症住院患者的家属60例分为观察组和对照组,对照组不采用心理护理,观察组采用心理护理,采用医院焦虑自评量表（SAS）及抑郁自评量表（SDS）评定家属的护理前后的心理状况。结果：两组患者的SDS、SAS评分均高于国内常模,P〈0．05。护理后观察组SDS、SAS评分显著改善优于对照组,P〈0．05。结论：精神分裂症家属不同程度的存在负性心理,心理护理有利于缓解家属的不良心理,保证患者的治疗。     

超选择性肾动脉栓塞治疗MPCNL术后肾出血

目的研究MPCNL术后肾出血的介入止血方法和效果。方法 2008年4月至2009年10月间经MPCNL治疗上尿路结石后肾出血患者15例,行超选择性肾动脉栓塞治疗术,回顾性分析其临床资料。结果本组患者治疗后效果满意,一次栓塞成功14例（93.3%）,1例栓塞后另一血管分支再出血,经第二次栓塞血止。结论介入方法治疗MPCNL术后肾出血具有安全、有效、创伤小、预后好、恢复快等优点,是MPCNL术后肾出血的首选手术方法之一。