CCK-8对LPS攻击小鼠IL-1β、IL-6、IL-4、IL-10表达的影响

目的： 观察LPS攻击小鼠IL-1β、IL-6、IL-4、IL-10的动态变化规律及八肽胆囊收缩素（CCK-8）对其表达的影响。方法: 将小鼠分为4组：对照组、LPS组（腹腔注射LPS）、LPS+CCK-8组（注射LPS前 30 min 腹腔注射CCK-8）及CCK-8组（单独注射CCK-8）。用ELISA及PT-PCR方法检测各组小鼠血清、肺组织中IL-1β、IL-6、IL-4、IL-10的含量及mRNA的表达情况。结果: LPS攻击可使小鼠血清及肺组织中 IL-1β、IL-6、IL-4、IL-10蛋白及mRNA的表达增加，预先注入CCK-8可显著抑制IL-1β、IL-6的表达，并使 IL-4、IL-10的表达进一步增加。结论: CCK-8可能通过抑制LPS攻击小鼠IL-1β、IL-6的表达和进一步增加 IL-4、IL-10的表达参与抗炎反应过程，从而减轻LPS引起的肺组织炎症反应。     

cAMP-PKA信号通路在CCK-8抑制LPS诱导的大鼠肺间质巨噬细胞NF-κB活化中的作用

目的：探讨cAMP-PKA信号通路对八肽胆囊收缩素（cholecystokinin octapetide，CCK-8）抑制IPS诱导的大鼠肺间质巨噬细胞（pulmonary interstitial macrophages，PIMs）核因子-κB（nuclear factor-κB，NF-κB）活性的影响。方法：采用SD大鼠，分离培养PIMs。实验分为7组：正常对照组：RPMI-1640培养基中加入与实验组等体积的生理盐水；LPs组：培养基中加入LPS 10mg／L；CCK组：培养基中加入CCK-8S 10^-6mol／L；LPS＋CCK组：培养摹中同时加入LPS 10mg／L和CCK-8S 10^-6moL／L；Fsk组：培养基中加入5μmol／L Fsk；LPS＋Fsk组：培养基中加入LPS 10mg/L和Fsk 5μmoL／L；LPS＋CCK＋H-89组：培养基中加入LPS 10mg／L、CCK-8S10^-6mol／L和H-89 100mmol／L。用EMSA法检测大鼠PIMs中NF-κB活性，Westem blot分析IκB-α和p-IκB-α蛋白水平。     

大鼠肺间质巨噬细胞CCK受体的结合特性

目的:观察大鼠肺间质巨噬细胞(PIMs)胆囊收缩素(CCK)受体的表达亚型和结合特性。方法:用酶消化法结合肺泡耗竭灌洗和肺循环灌洗技术分离纯化大鼠PIMs,超速离心法提取细胞膜,与标记的硫酸化CCK-8(-CCK-8S)进行放射配基结合实验,用非标记的CCK-8S、CCK-A受体(CCK-AR)特异性拮抗剂CR1409及CCK-B受体(CCK-BR)特异性拮抗剂CR2945进行竞争抑制实验,观察配体受体结合的特异性及CCK受体表达亚型,观察孵育时间和温度对特异性结合的影响。结果:正常大鼠PIMs未能检出特异性结合,静脉注射脂多糖(LPS)48h出现特异性结合,且对孵育时间与温度有依赖性。经Scatchard分析,平衡解离常数(Kd)值为:(0.68±0.28)nmol·L^-1,最大结合容量(Bmax)值为(32.50±2.70)pmol·g^-1蛋白。通过竞争抑制实验,-CCK-8S与膜的结合可被CCK-8S、CR1409、CR2945所抑制,其IC₅₀值分别为:(3.20±1.13)nmol·L^-1,(0.19±0.06)μmol·L^-1和(2.30±0.80)nmol·L^-1。结论:大鼠PIMs存在CCK-A和CCK-B两种受体亚型,为CCK对生理及病理条件下巨噬细胞发挥效应提供了直接的结构依据。     

褪黑素对吗啡戒断大鼠脑内CaM和CaMKⅡ活性的影响

目的 :观察褪黑素对吗啡戒断大鼠海马和脑干内CaM及CaMKⅡ活性的影响。方法 :以剂量递增法连续 5d皮下注射吗啡建立吗啡依赖大鼠模型 ,分别用流式细胞术和放射酶法检测脑内CaM及CaMKⅡ的活性变化。结果 :(1)与对照组比较 ,吗啡依赖大鼠海马和脑干内钙调蛋白活性明显升高 (P <0 .0 1) ,而CaMKⅡ活性则显著降低 (P <0 .0 5 )。纳洛酮催促戒断后海马和脑干内CaMKⅡ活性明显高于吗啡依赖大鼠 (P <0 .0 1) ,但钙调蛋白相对活性无显著变化 (P >0 .0 5 ) ;(2 )与吗啡依赖组比较褪黑素可使吗啡戒断大鼠海马和脑干内CaM及CaMKⅡ的活性明显降低 (P <0 .0 5或P <0 .0 1)。结论 :褪黑素对吗啡依赖大鼠戒断综合征的抑制作用可能与MT降低脑干和海马内CaM及CaMKⅡ活性有关。     

河北汉族人群四个Y-STR位点遗传多态性的研究

长期以来 ,Y染色体一直被用做性别鉴定。 2 0世纪 80年代后 ,对人类Y染色体的研究已进入了DNA多态性分析阶段。随着PCR技术的不断发展 ,已开始采用微卫星DNA (microsatelliteDNA)标记对DNA多态性位点进行研究。常染色体中DNA多态性来源除了突变外 ,还有可能来自减数分裂中的重组 ,而Y染色体除了长臂和短臂末端的拟常染色体区 (pseudoautosomalregion)在减数分裂中与X染色体发生重组外 ,其余的大部分Y染色体特异区(95 % )不发生重组 ,而是以单倍体形式从父亲遗传给儿子 ,称为非联合Y染色体。而发生与Y染色体非重组部分的DNA序列…     

河北汉族人群miniSTR D20S1082、D18S853、D17S1301基因座复合扩增及遗传多态性研究

基因组DNA多态性的研究,对人类进化和群体遗传提供了更为科学和可靠的依据。短串联重复序列(short tandem repeats,STR)遗传标记系统,由于在人类基因组中分布广泛,并且具有高度的遗传多态性及简单快捷的检测方法而被广泛应用于法医学等领域。MiniSTR基因座分析技术是通过将聚合酶链反应(polymerase chain reaction,PCR)引物的设计尽可能靠近重复区域而缩短扩增片段的一种新方法,应用于高度降解DNA样本检测,可提高检测成功率。本文从正常健康人血液中提取DNA,采用PCR技术和毛细管电泳技术,对中国河北省115例汉族无关个体进行了群体…     

MVR-PCR检测中国汉族人群D16S309基因座遗传多态性

0 引言 D16S309(MS205)基因座位于16p13.3(AE006466)[1],表现出高度的多态性. 核心序列为45～54 bp,重复次数8～87次[2]. 研究采用小卫星变异重复单位聚合酶链反应(minisatellite variant repeat-PCR,MVR-PCR)技术,选择3′侧翼区引物(公共引物)205B(X68405)与MVR特异性引物205-TAG-A和205-TAG-T匹配进行PCR扩增,联合聚丙烯酰胺凝胶电泳及银染法对106名中国河北汉族无关个体进行调查,并对家系样品进行分析,揭示了河北汉族人群D16S309基因座3'端遗传多态性.     

CCK-8对大鼠肺间质巨噬细胞cAMP-PKA信号通路的激活作用

目的探讨八肽胆囊收缩素(CCK-8)对大鼠肺间质巨噬细胞(PIMs)cAMP-PKA信号通路的激活作用。方法分离纯化大鼠PIMs,采用放射免疫分析法测定细胞内cAMP含量,放射激酶法测定PKA活性,受体拮抗剂的IC50值由对数-几率单位法求得。结果正常对照组大鼠静息状态下PIMscAMP含量和PKA活性分别为(2.04±0.13)nmol·g-1和(118.3±11.2)nmol·min-1·g-1。低浓度CCK-8[(10-12～10-10)mol·L-1]对细胞内cAMP含量和PKA活性没有影响(与正常对照组比较:P>0.05);高浓度CCK-8[(10-9～10-5)mol.L-1]可明显提高细胞内cAMP含量和PKA活性(与正常对照组比较:P<0.05)。10mg·L-1脂多糖(LPS)刺激大鼠PIMs,可明提高细胞内cAMP含量和PKA活性,分别为(5.15±0.12)nmol·g-1和(188.6±13.5)nmol·min-1·g-1。不同浓度的CCK-8与LPS共同孵育PIMs,细胞内cAMP含量和PKA活性的变化趋势与CCK-8作用于静息状态下大鼠PIMs的变化趋势完全相同。CCK受体拮抗剂丙谷胺、CR-1409、CR-2945可呈剂量依赖性地抑制CCK导致的cAMP含量的升高,它们的IC50值分别为(0.5×10-6、4.1×10-6、7.2×10-4)mol·L-1。丙谷胺、CR-1409、CR-2945也可明显减弱CCK-8所导致的PKA活性的升高;其中,丙谷胺的抑制作用最强,CR-1409次之,CR-2945的抑制作用最小。结论CCK-8可剂量依赖性地激活静息状态和LPS诱导的大鼠PIMscAMP-PKA信号转导途径,这可能是CCK抗炎作用的分子机制之一。CCK激活cAMP-PKA通路是通过CCK受体来实现的,且CCK-AR的作用比CCK-BR的作用更为明显。     

慢性吗啡依赖及戒断对大鼠不同脑区NSF附着蛋白表达的影响

目的探讨慢性吗啡依赖及戒断对大鼠伏隔核(NAc)、尾壳核(CPu)及海马(Hip)中NSF附着蛋白(SNAPs)表达的影响。方法成年♂Wistar大鼠,随机分为对照组、吗啡组和戒断不同时间组,吗啡组大鼠背部皮下注射吗啡8d,每日3次,剂量递增,对照组大鼠注射等体积生理盐水。吗啡组末次注射吗啡4h后处死,断头取脑。自然戒断组分别在戒断不同时间处死动物。各组均设平行对照。利用RT-PCR和Western blot技术分别检测各脑区SNAPs的mRNA和蛋白表达水平。结果与对照组相比,慢性吗啡依赖大鼠CPu内γ-SNAP的mRNA和蛋白表达水平均上调25%左右(P<0.01),NAc及Hip脑区则无明显变化,自然戒断d2、d3、d7组亦未观察到γ-SNAP明显的表达改变。α-SNAP和β-SNAP在吗啡依赖和自然戒断状态下3个被检脑区(NAc、CPu、Hip)均未检测到明显的表达变化。结论慢性吗啡依赖可增加CPu内γ-SNAP的表达,对α-SNAP和β-SNAP的表达没有影响,提示SNAPs 3种亚型在慢性吗啡依赖过程中行使不同的功能,可能与特定神经递质的分泌有关。慢性吗啡依赖及戒断引起的突触前神经递质释放改变可能不是由α-SNAP和β-SNAP表达量变化介导的,其具体机制可能与其内在活性变化或蛋白在细胞内的转位有关。