在大肠杆菌中融合表达重组羧肽酶抑制剂

利用PCR技术扩增得到编码土豆羧肽酶抑制剂（carboxypeptidase inhibitor from potato，CPI）活性多肽基因，克隆于表达载体pGEX-4T-1的多克隆位点中，得到重组质粒pGCPI，测序后将重组质粒转化到受体菌Escherichia coli BL21中。重组菌经IPTG诱导表迭，超声波破菌后，通过谷胱甘肽sepheroseFF亲和层析柱一步纯化得到融合蛋白，纯度大于979，6。融合蛋白经凝血酶切割并分离除去谷胱甘肽-S-转移酶后得到纯度大于98％的重组CPI，ELISA鉴定产物具有免疫原性，体外检测表明其促进纤溶的生物功能与天然CPI无明显差异。     

Streptoverticillium mobaraense谷氨酰胺转胺酶的表达、纯化和复性

以基因组DNA为模板 ,利用PCR技术从茂原轮链丝菌 (Streptoverticilliummobaraense)中扩增得到产成熟谷氨酰胺转胺酶MTG的结构基因mtg ,克隆于表达载体pQE 3 0T ,构建成lac启动子控制下的His6融合表达质粒pMTG ,将此重组质粒转化到受体菌E .coliM1 5中。对质粒稳定性的研究表明 ,E .coliM1 5在无选择压的情况下 ,于 3 7℃连续转接 5次 ,质粒丢失率仅有 2 4%,说明质粒基本稳定。重组菌经IPTG诱导 ,表达的重组谷氨酰胺转胺酶占菌体总蛋白的 1 8%,经SDS PAGE分析 ,表达的蛋白质的分子质量为 3 8ku ,与预期分子质量相符。表达产物主要以包涵体的形式存在。细胞经超声破碎 ,离心取包涵体溶于 8mol/L的尿素中 ,然后通过Ni NTA亲和柱分离纯化和稀释法复性。目的蛋白的纯度可达 95 %以上。比酶活为 1 0 3U/mg。     

含砾粗砂岩地层双模盾构土压模式渣土改良技术

为了进一步提高双模盾构土压掘进模式对含砾粗砂岩地层的适应性,依托广州地铁7号线二期工程洪圣沙站-裕丰围站区间项目开展了渣土改良技术研究。首先优选渣土改良剂并测定其性能,然后根据二次改良试验结果提出合理的渣土改良参数,并通过实际应用效果验证了渣土改良参数的合理性。采用优选的改良参数时,刀盘扭矩系数和螺机扭矩系数均有所减小,有利于盾构掘进,但是由于刀具破岩效率受渣土改良影响较小,地层贯入指数变化较小。