激发型抗CD40单克隆抗体对CD40+B细胞恶性肿瘤的生长抑制和促凋亡作用

目的　研究CD40 抗原在恶性B淋巴细胞肿瘤中的表达及其CD40 抗原激发所致的生物学效应。方法　将激发型CD40 单克隆抗体 (单抗 ) 5C11加入肿瘤细胞的体外培养体系 ,采用细胞计数、流式细胞仪分析等方法分析单抗 5C11对不同肿瘤细胞株的作用。结果　 5C11能引起CD40 表达强阳性的多发性骨髓瘤 (MM)细胞XG2发生同型聚集 ,抑制其生长并介导细胞凋亡 ;5C11可引起CD40 的恶性B淋巴瘤细胞株Daudi发生同型聚集 ,抑制其生长并使细胞发生G2 M期阻滞 ,但并不介导细胞凋亡。结论　激发型CD40 单抗通过诱导恶性B淋巴瘤细胞的凋亡或使G2 M期细胞阻滞 ,抑制肿瘤细胞的体外生长     

60Coγ辐射诱导下IL-6对人多发性骨髓瘤细胞株凋亡效应的实验研究

目的研究白介素-6(IL-6)在60Coγ辐射诱导人多发性骨髓瘤细胞株XG-6、XG-7凋亡效应中的作用及其可能的分子生物学机理.方法运用流式细胞仪技术(FACS)、DNA片段释放法和RT-PCR,观察了IL-6对细胞株XG-6、XG-7中Bcl-xL、BaxmRNA相对表达的影响及其与辐照诱导的细胞凋亡率的相关性.结果IL-6存在时,XG-6、XG-7细胞的Bcl-xL、BaxmRNA表达在辐照后迅速上升,4h达最高峰后逐渐下降,24～48h恢复到照射前水平;不加IL-6的XG-6、XG-7细胞的Bcl-xL的表达在同样实验条件未检测到,而这2株细胞BaxmRNA的表达在照射后不同时间均低于相应的加IL-6组,但尚有明显的表达.对不加IL-6的细胞组,辐照后不同时间的凋亡率明显高于相应的加IL-6组(P＜0.05).结论IL-6可通过调节Bcl-xL、Bax的表达及改变BcL-xL/Bax二者比率,保护辐照诱导XG-6、XG-7的细胞凋亡.     

胶原支架负载BMP-2促进大鼠脊柱横突融合的临床观察

目的探讨胶原支架负载骨形成蛋白2（BMP2）在脊柱横突融合中的应用价值。方法将60只雄性SD大鼠随机分成3组,假手术组、材料组与复合材料组,各20只,行脊柱后外侧横突间融合手术,材料组和复合材料组大鼠L4～5横突间分别植入胶原支架和胶原支架负载BMP2,未植入任何材料组为假手术组。术后8周予手触力学评定、X线评分、mi-cro-CT扫描、H＆E染色观察等分析和检测。结果手触力学评定、X线评分、micro-CT扫描、H＆E染色观察显示8周后材料组和复合材料组大鼠L4～5横突间均有不同程度融合,假手术未见融合,且复合材料组融合效果优于单纯材料组。结论胶原材料负载BMP2促进大鼠脊柱横突融合,具有潜在的临床应用价值。     

多种教学方法的灵活运用对提高医学免疫学教学质量的影响

医学免疫学是一门重要的医学基础课和桥梁学科,其理论和技术广泛渗透到基础医学、临床医学、生物学和遗传学等多门学科;同时这些学科的发展也促进医学免疫学的发展更新,因此成为生命科学中的研究热点领域.医学免疫学理论性强、内容繁杂抽象,加上日新月异的学科发展,造成教者较难教,学生较难学的局面.如何优化教学方案,提高医学免疫学教学效果,发挥学生的积极主动学习能力就成为我们讲授医学免疫学老师义不容辞的责任.因此提高教师自身的业务水平,更好的完成"传道、授业、解惑"的任务是首要任务,其次就是灵活运用多种教学方法,促进医学免疫学教学质量,作者根据多年的医学免疫学教学和在国外学习的经验,就以下几点谈谈自身的体会.     

诺扬复合丙泊酚在门诊无痛人流中的临床应用

目的：探讨诺扬应用于门诊无痛人流术中的临床效果。方法：选择计划生育门诊需要实施无痛人流术的健康患者100例，随机分为2组，诺扬组50例，使用丙泊酚复合诺扬静脉麻醉下实施手术；芬太尼组50例，使用丙泊酚复合芬太尼静脉麻醉下实施手术。结果：诺扬组较芬太尼组相比，镇痛、镇静、恶心呕吐、呼吸抑制等均无显著差异。结论：诺扬复合丙泊酚行静脉麻醉用于门诊无痛人流是一种安全、有效的麻醉方法。     

胎盘间充质干细胞向神经细胞诱导的实验研究

目的间充质干细胞(MSCs)具有自我更新和多向分化能力的特点，尽管其主要来源骨髓间充质干细胞(BMSCs)已被认为是治疗多种疾病的良好细胞来源。但在严重感染或随着年龄的增长骨髓细胞数及增殖、分化能力均明显下降等情况下，就无法顺利获得足量可用于治疗的BMSC，有必要寻找MSC的新来源。方法消化胎盘组织、贴壁培养获得基质细胞；用流式细胞仪检测其细胞表面标志；比较叔丁对甲氧酚(butylated hydroxyanisole，BHA)、复方丹参注射液、β-巯基乙醇(BME)等对培养的基质细胞向神经细胞分化的作用；采用免疫细胞化学的方法对分化的细胞进行鉴定。结果胎盘组织中分离出的基质细胞与骨髓间充质干细胞有相似形态和细胞表面标志，并可诱导表达神经元和星型胶质细胞标志神经元特异性烯醇化酶(neuron specific enolasen，NSE)、神经微丝(neurofilament，NF)和胶质纤维酸性蛋白(glial fibrilament acidic protein，GFAP)。结论胎盘组织中存在能分化为神经元样细胞的间充质干细胞。胎盘间充质干细胞可能是一种可为临床治疗提供丰富新来源的间充质干细胞。     

人TACI-Fc融合蛋白对XG6细胞体外生长的调节作用

目的 建立人TACI-Fc基因转染细胞，获得该融合蛋白，研究其对多发性骨髓瘤细胞系XG6的生物学作用。方法利用RT-PCR方法从扁桃体细胞中克隆全长TACI cDNA片段，将该基因的胞外段sTACI与人IgGI Fc段连接到pcDNA真核表达载体上，使两者融合表达。脂质体法将重组质粒pcDNA-sTACI-Fc转入小鼠成纤维细胞系L929-ELISA法测定转染TACI-Fc基因的L929细胞培养上清中TACI-Fc的含量，培养上清经亲和层析柱纯化，获得纯化的融合蛋白TACI-Fc。然后应用台盼蓝染色活细胞计数和^3H-TdR掺入法检测其对XG6细胞的生长和增殖的调节作用。结果经RT-PCR和ELISA方法检测表明，成功构建了稳定表达sTACI-Fc融合蛋白的基因转染细胞。基因转染细胞的培养上清经亲和层析柱纯化，得到TACI-Fc融合蛋白。体外检测其生物学活性结果表明，该融合蛋白可有效地阻断Blys对骨髓瘤细胞株XG6的促增殖作用。结论本实验成功地将TACI胞外段与人IgG1 Fc段在真核细胞中进行融合表达，表达的蛋白质具有良好的生物学功能，这为进一步对TACI基因进行功能研究奠定了物质基础。     

重组人CD40配体对卵巢癌SKOV3细胞生长特性的影响

目的： 观察重组人CD40配体（rhCD40L）对卵巢癌细胞株SKOV3增殖、表面抗原变化、细胞周期、凋亡相关基因及肿瘤坏死因子受体相关因子( TRAFs)的影响。 方法： 在体外将SKOV3细胞与不同浓度的rhCD40L作用72 h后MTT法测定细胞增殖；直接免疫荧光标记流式细胞术测定细胞表面抗原及TRAFs变化，RT-PCR法测定凋亡相关基因c-myc、bcl-2、bcl-xl的表达程度，并用Annexin V和PI双标记测定细胞凋亡水平。 结果： rhCD40L在100 μg/L的低剂量时即可抑制SKOV3细胞增殖（0.65±0.10 vs 0.81±0.05），其作用随着rhCD40L浓度的增加而加强，10 mg/L时抑制率达（0.13±0.12 vs 0.83±0.15，P＜0.01），呈明显的浓度相关性，并使细胞分裂阻滞于G1期；rhCD40L可上调SKOV3细胞CD95的表达（42.4% vs 59.2%, P＜0.05），下调抗凋亡基因bcl-2和bcl-xl的表达，促进其凋亡；SKOV3细胞高表达TRAF2（81.3%±9.2%）、TRAF5（47.2%±7.2%）和TRAF6（44.5%±6.3%），rhCD40L可显着下调TRAF2（50.4%±5.3%，P＜0.05）、TRAF5（7.2%±2.1%，P＜0.01）和TRAF6（5.1%±1.1%，P＜0.01）表达，而上调TRAF3（25.2%±6.2% vs 68.8%±5.3%，P＜0.01）表达，对TRAF1（4.3%±1.2% vs 5.1%±1.4%）和4（7.4%±1.2% vs 8.1%±1.4%）的表达则无作用。 结论： rhCD40L通过下调bcl-2和bcl-xl基因表达，并改变细胞内TRAFs表达，使SKOV3细胞的增殖受阻滞于G1期，并促进其凋亡。     

人B7-H3基因转染及其生物学功能的研究

B7 H3是新近发现的B7家族新成员。为探讨其体外生物学功能及单克隆抗体的研制构建了B7 H3基因转染细胞。利用PCR的方法扩增出B7 H3基因 ,继而插入逆转录病毒载体pGEZ Term ,重组逆转录病毒载体与两个辅助病毒载体脂质体法共转染包装细胞 2 93T ,经用含有完整病毒颗粒的 2 93T细胞的培养上清感染L92 9细胞 ,Zeocin筛选获得B7 H3的基因转染细胞。RT PCR、Westernblot和流式细胞仪表型分析等方法鉴定表明 ,B7 H3/L92 9基因转染细胞能稳定表达人B7 H3蛋白。继而基因转染细胞对T细胞体外培养试验显示该基因转染细胞与T细胞共培养可抑制其体外增殖。ELISA法分析表明该基因转染细胞抑制活化T细胞IFN γ及IL 10的分泌。CD2 8信号可以逆转B7 H3对活化T细胞的抑制效应。综上结果证实 ,B7 H3对体外活化的T细胞具有负性调控作用。     

胎盘间充质干细胞样细胞的培养及生物学特性的实验研究

目的本研究拟从胎盘组织中分离培养获得间充质干细胞(placenta derived mesenchymal stem cells, PMSCs),研究其生物学特性,探讨其在移植治疗方面的可行性.方法将胎盘组织经胶原酶消化和贴壁培养获得的基质细胞,用免疫荧光标记和免疫细胞化学检测细胞表型,用活细胞记数和碘化丙啶(propidium iodide,PI)检测其增殖能力,用叔丁对甲氧酚(butylated hydroxyanisole ,BHA)、N2培养基等对培养的细胞分别向神经和脂肪方向诱导分化,继而采用免疫细胞化学等方法对分化的细胞进行鉴定.结果由胎盘组织中分离获得了一群具有与骨髓间充质干细胞(bone marrow mesenchymal stem cells,BMSCs)相似的形态和细胞表面标志的细胞:该群细胞增殖能力强;表达CD29、 CD44、CD105 (SH2)、ASMA、Ⅰ型和Ⅲ型胶原以及免疫应答负性调控分子PDL-1,但不表达CD11b、 CD34、CD45、CD19、CD106 (VCAM-1)、CD117、HLA-DR、vWF、MySM、HLA-DR,以及免疫应答正性调控分子CD40、CD40L、CD28、CD80和CD86;可诱导表达神经元标志神经微丝(neurofilament,NF)和星型胶质细胞标志胶质纤维酸性蛋白(glial fibrilament acidic protein,GFAP),并且这些细胞表达神经干细胞标志巢蛋白(nestin),向脂肪分化的细胞苏丹Ⅲ染色阳性.结论本实验中获得的胎盘基质细胞具有与骨髓间充质干细胞相似的细胞形态、表面标志和多向分化潜能的特点,它增殖能力强、来源方便、丰富,无伦理学限制,是良好的细胞移植来源.