蛋白质组学:在生殖系统疾病研究的新方法

人类基因组大规模测序 ,揭示基因组精细结构的同时 ,还显示出基因数量的有限性和结构的相对稳定。随着生物技术的飞速发展 ,创立了与基因组相对应的蛋白质组学 (proteomics) ,将从生命功能的执行体———蛋白质水平研究基因的表达及功能。生殖系统的疾病 ,并非均由遗传变异引起 ,许多分子水平的变化发生在翻译后蛋白质的修饰。利用蛋白质组学可从分子水平了解生殖系统的健康状况和疾病的发生机制     

5-氟尿嘧啶毫微囊的药物动力学研究

本文报告了5-氟尿嘧啶毫微型胶囊(5-Fu NC)的药物动力学研究结果:兔体内单次静注给药后,用高效液相色谱法测定了5-Fu Nc和5-氟尿嘧啶注射液的血药浓度,并且用PKBPN1药代程序计算了各项药物动力学参数。结果表明:制成毫微囊后,5-氟尿嘧啶在体内分布得更为迅速,作用时间也更长。     

多烯紫杉醇主动靶向脂质体对S180肉瘤细胞小鼠移植瘤生长的影响

目的:研究叶酸受体多烯紫杉醇主动靶向脂质体(FA-PDCT-L)对S180肉瘤细胞小鼠移植瘤的抑制作用及体内毒性。方法:利用自制两亲性嵌段共聚物叶酸-聚乙二醇-聚胆固醇氰基丙烯酸脂(FA-PEG-PCHL)修饰FA-PDCT-L,采用激光共聚焦显微镜检测脂质体与MCF-7细胞的结合机制;建立S180肉瘤细胞小鼠皮下移植瘤动物模型,随机分为DCT注射液(DCT-I)、未修饰DCT脂质体(DCT-L)和FA-PDCT-L和模型组(生理盐水),按10 mg·kg-1·d-1尾静脉注射给药,观察小鼠移植瘤生长变化并计算抑瘤率;采用TUNEL法测定细胞凋亡;观察各组动物肝功能及骨髓抑制血液生化指标。结果:FA-PDCTL与MCF-7细胞的结合量明显高于其他试验组。与模型相比,DCT-I,DCT-L和FA-PDCT-L组小鼠瘤体积均减少,其中FAPDCT-L的作用最为显著,抑瘤率79.03%,凋亡指数(45.7±3.4)%。FA-PDCT-L组动物的肝功能及骨髓抑制生化指标均与空白组无显著差异。结论:FA-PDCT-L通过FA-PEG-PCHL介导的细胞内化使脂质体进入细胞,显示出了比市售DCT-I更好的抗肿瘤疗效和更低的毒性。     

子宫内膜胚泡黏附时着床点与着床旁组织的分离

目的：分离小鼠子宫内膜胚泡着床点和着床旁组织，以利于对着床机制及生育调控的研究。方法：取妊娠第5天(D5)小鼠，尾静脉注射0．4％台盼蓝(Trypan blue)，10min后脱颈处死，取小鼠子宫，用处理的4号针头滑动挤压子宫角。结果：取得的子宫内膜完整，着床点染成蓝色，与着床旁组织区别明显，易于分离。结论：用简便易行的方法，分离小鼠胚泡着床点和着床旁组织，为胚泡着床机制的研究提供有意义的物质材料。     

卡维地洛固体自微乳化药物传递系统的应用

目的为了提高卡维地洛的溶解度和溶出速度,制备了一种新型的固体自微乳化硬胶囊。方法考察了卡维地洛在各种基质中的溶解度,绘制三元相图用来确定Gelucire 44/14-Lutrol F68-Transcutol P及Tefose 63-Lutrol F68-Transcutol P两种三元系统的有效自乳化和自微乳化区域。优选Gelucire 44/14-Lutrol F68-Transcutol P系统制备了自微乳化硬胶囊,对其粒径分布,ζ-电位及体外溶出特征进行了评价。结果自制自微乳化硬胶囊能够显著地提高药物的体外溶出速率。结论自制卡维地洛固体自微乳化硬胶囊有希望提高药物的生物利用度。     

PCR检测丙型肝炎病毒感染各高危人群

用ＰＣＲ方法克隆了中国丙型肝炎病毒（ＨＣＶ）感染者的５’端非编码区（５’－ｎｏｎｃｏｄｉｎｇｒｅｇｉｏｎ，５’－ＮＣＲ）序列，并根据此序列合成引物检测我国ＨＣＶ各高危感染人群的病毒复制情况，结果显示ＨＣＶＲＮＡ在慢性丙型肝炎患者的血清标中的阳性率为８１．８％（９／１１），在ＨＣＶ抗体阳性的血液透析患者血清标本中的阳性率为６３．６％（７／１１），在ＨＣＶ抗体阳性的献血员血清标中的阳性率为２０％（４／     

加替沙星阳离子脂质体的制备及性质测定

 目的制备加替沙星阳离子脂质体并测定其粒径、Zeta电位、包封率。方法采用薄膜分散法制备加替沙星阳离子脂质体,正交实验筛选处方,葡聚糖凝胶法测定其包封率,COULTERLS粒径分析仪测定粒径,COULTER DELSA 440SXξ电位仪测定Zeta电位,采用改良的Fraze扩散池和离体角膜测定加替沙星阳离子脂质体的体外释放,并比较普通滴眼剂、中性脂质体和阳离子脂质体角膜透过系数。结果采用薄膜分散法制备的加替沙星阳离子脂质体外观良好,包封率为69.5%,平均粒径为163nm,Zeta电位为44.7mV,阳离子脂质体的角膜透过系数分别是普通滴眼剂和中性脂质体的5.44和1.19倍。结论自制的加替沙星阳离子脂质体包封率较高,粒径较小,粒度分布较窄,脂质体囊泡荷正电,离体角膜透过性良好,较可能成为一种理想的眼用制剂。     

人类免疫缺陷病毒1型HXB2株Tat突变体的构建、原核表达及免疫原性分析

目的 构建HIV-1 HXB2株Tat基因半胱氨酸富集区3'末端移位突变体,经原核表达和纯化,分析该突变体蛋白(Tat-cct)的免疫原性.方法 用PCR方法将HIV-1 HXB2株Tat基因的半胱氨酸富集区(64～111位核苷酸)移位至Tat基因的3'末端,获得其突变体DNA序列,并构建其原核表达质粒pET32a-Tat-cct,转入大肠埃希菌E.coli BL21(DE3)中进行诱导表达及纯化.以Tat-cct融合表达蛋白免疫BALB/c小鼠,ELISA方法对该抗血清进行免疫原性检测分析.结果 pET32a-Tat-cct重组质粒可在E.coli BL21(DE3)中诱导表达,纯化后其融合蛋白相对分子质量约为31 000.Tat-cct重组蛋白免疫小鼠诱导产生的抗体滴度为1:1600,该抗体与Tat-cct蛋白和Tat蛋白(1～101位氨基酸)均呈特异性结合反应.结论 Tat突变体重组蛋白Tat-cct能在大肠埃希菌中有效表达.并较好保留其免疫原性,为HIV-1 Tat疫苗的基础研究提供了有价值的实验结论.     

人精液源性病毒感染增强因子研究进展

人精液前列腺酸性磷酸酶(prostatic acid phosphatase,PAP)多肽片段形成的淀粉样原纤维具有促进人类免疫缺陷病毒(human immunedeficiency virus,HIV)感染的作用,这些原纤维被称为精液源性病毒感染增强因子(semen-derived enhancer of viral infection,SEVI),其中PAP第248-286位多肽片段(PAP248-286)促进HIV感染的作用最强.具有阳离子特性的SEVI可通过静电作用捕获HIV颗粒而促进HIV感染.近期研究报道,SEVI对异嗜性小鼠白血病病毒相关病毒感染也有增强作用,可能与前列腺癌发生有关.某些多聚阴离子化合物和绿茶多酚成分能明显抑制SEVI活性.研究SEVI生物学特性及其功能对于HIV等病毒感染的防治具有重要意义.     

氟比洛芬阳离子脂质体温敏凝胶滴眼剂的眼部刺激性和药效学

目的制备氟比洛芬阳离子脂质体温敏凝胶滴眼剂(flurbiprofen cationic liposome thermo-sensitive hydrogel,FCLTH),考察其包封率、胶凝性质、眼部刺激性和药效作用。方法采用乙醇注入-超声法制备氟比洛芬阳离子脂质体,并对其包封率和理化性质等进行了测定。将氟比洛芬阳离子脂质体制备成温敏凝胶滴眼液,考察了FCLTH的胶凝行为、眼部刺激性和药效学。结果氟比洛芬阳离子脂质体包封率可达(84.9±2.75)%,zeta电位为(+33.4±9.68)mV,平均粒径(136±2.98)nm。FCLTH胶凝温度为31.9℃。眼部刺激性实验多次给药后,裂隙灯显微镜观察新西兰兔眼角膜无混浊,虹膜和结膜未见红肿、充血、肿胀等异常现象。组织病理学检查显示,新西兰兔眼7天多次给药后,与空白溶剂相比,给药组组织病理学改变无明显差异。药效学结果显示,FCLTH相对于氟比洛芬滴眼剂对新西兰兔眼急性炎症有抑制作用更强。结论采用乙醇注入-超声法制备的氟比洛芬阳离子脂质体有较高的包封率,且FCLTH在眼部温度下自发形成凝胶,无眼部刺激性,并能够有效抑制眼部炎症作用。