儿童特发性血小板减少性紫癜Th细胞IFN-γ、IL-4表达分析

目的：探讨Th1/Th2极化改变与儿童cITP之间关系。方法：采用流式细胞仪对21例cITP患儿治疗前后和28例健康者外周血CD3^＋CD8^-细胞内IFN-γ和IL-4进行分析。结果：cITP患儿治疗前Th0、Th1细胞和Th1/Th2比值较对照组显著降低（P〈0.01）,治疗后Th0、Th1细胞和Th1/Th2比值较治疗前显著增高（P〈0.01）,Th2细胞无明显差别（P〉0.05）,与对照组比较,治疗后cITP患儿Th0、Th1细胞增高（P〈0.05）,Th2细胞和Th1/Th2比值无显著差异（P〉0.05）。结论：cITP患儿起病时表现为Th1减低,Th2相对优势表达,治疗有效者表现为Th1显著增高,Th2无改变,cITP起病时Th1分泌的IFN-γ分泌减少可促进产生自身抗体,糖皮质激素治疗主要通过增加IFN-γ的分泌达到治疗目的。     

流式细胞仪检测CD59在阵发性睡眠性血红蛋白尿症诊断中的应用

阵发性睡眠性血红蛋白尿症(PNH)系获得性红细胞膜缺陷引起的慢性血管内溶血.近年来,利用流式细胞术(FCM)检测和计数缺乏CD59的血细胞,被认为是诊断PNH更敏感、更特异的方法[1].本文采用流式细胞术测定红细胞CD59表达,探讨该方法在PNH诊断中的意义.     

从G-CSF动员的外周血细胞悬液培养的成纤维细胞样细胞的特性分析

目的： 研究从G-CSF动员的外周血细胞（PBC）悬液培养的成纤维细胞样（F-L）细胞的特性。 方法： 取PBC中贴壁细胞分4组培养：①RPMI-1640组；②L-DMEM组；③粒细胞集落刺激因子（G-CSF）组；④白细胞介素-3（IL-3）组。流式细胞仪分析各组培养的F-L细胞特性。 结果： 培养2-3周后，4组均能收获到F-L细胞，细胞贴壁生长，但不融合，不能连续传代培养，③④组细胞数量明显多于①②组，4组F-L细胞表型相似：CD33+、CD11c+、CD64+、CD14+、CD45+、HLA-DR+、CD86+、CD34-、CD38-、CD3-、CD19-、CD56-、CD29-、CD44-、CD105-；与单核细胞（PB-M）表型差异仅CD38表达不同而与间质干细胞（MSC）或树突状细胞（DC）表型明显不同。 结论： 从PBC培养的F-L细胞为巨噬细胞，不是MSC或DC；G-CSF、IL-3能提高F-L细胞培养数量，不改变PB-M向巨噬细胞分化的分化方向。     

乳腺癌患者外周血树突状细胞亚群及其HLA-DR表达的变化

目的：探讨乳腺癌患者外周血树突状细胞(DC)亚群和其HLA-DR表达变化及血浆中DC相关细胞因子水平的变化。方法:4色荧光流式细胞术分析57例乳腺癌术前、术后1周、术后6个月的患者及正常对照的外周血DC前体细胞pDC₁/pDC₂（CD11c+CD123-/CD11c-CD123+）比值及其HLA-DR的表达；酶联免疫吸附法检测血浆细胞因子白细胞介素-12p40（IL-12p40）、白细胞介素-10（IL-10）、γ-干扰素（IFN-γ）、白细胞介素-4（IL-4）水平。结果:57例乳腺癌患者中, 2例Ⅲ期、4例Ⅳ期外周血pDC缺乏，其余患者Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ期外周血pDC₁/pDC₂比值分别为1.62±0.59、1.41±0.63、0.91±0.32、0.81±0.29，均显著低于对照组（1.94±0.44,P<0.05）；Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ期患者术后1周pDC₁/pDC₂比值为1.71±0.47、1.52±0.54、1.04±0.36，与术前比较均无显著差异（P>0.05），但显著低于对照组（P<0.05）; 术后6个月pDC₁/pDC₂比值分别为1.92±0.72、1.63±0.65、1.28±0.34，与术前比较，均有显著提高（P<0.05），但与对照组比较，仅Ⅰ期患者恢复正常（P>0.05）,Ⅱ、Ⅲ期患者仍然显著降低（P<0.05）。乳腺癌患者pDC亚群HLA-DR表达以及血浆中IL-12p40、 IL-10、IFN-γ、IL-4水平及IL-12p40/IL-10、IFN-γ/IL-4比值与对照组比较均无显著差异（P>0.05）。结论:Ⅰ-Ⅳ期乳腺癌患者外周血pDC₁/pDC₂比值降低，部分Ⅲ、Ⅳ期患者外周血pDC缺乏。pDC的HLA-DR表达及DC分泌相关细胞因子的能力没有同步变异。术后患者pDC亚群Ⅱ、Ⅲ期明显改善，Ⅰ期恢复正常。     

三氧化二砷耐药白血病细胞株K562/AS2的建立及其与多药耐药的关系

目的:建立三氧化二砷(As₂O₃)耐药白血病细胞株,用于研究其耐药机制。初步探讨该细胞系与多药耐药的关系。方法:As₂O₃耐药白血病细胞株的建立通过逐步增加药物浓度方法。细胞毒实验采用MTT法,细胞周期测定采用碘化丙啶荧光染色法,细胞表面P-糖蛋白(P-gp)、细胞内柔红霉素(DNR)浓度、以及细胞免疫表型测定采用流式细胞术测定。结果:As₂O₃耐药白血病细胞株K562/AS2的细胞倍增时间和细胞周期与敏感细胞株K562相似。K562/AS2对As₂O₃、DNR、足叶乙甙(VP16)和阿糖胞苷(Ara-C)的耐药倍数分别为(7.4、2.9、3.8和1.1倍)。多药耐药细胞K562/A02对As₂O₃、DNR、VP16和Ara-C的耐药倍数分别为(0.8、94、2.5和0.9倍)。K562细胞与K562/AS2细胞之间的表面P-gp和细胞内DNR荧光强度无明显差异。结论:建立一株对临床可获得药物浓度(2μmol/L)的As₂O₃产生耐药的白血病细胞K562/AS2。K562/AS2对As₂O₃的耐药倍数是敏感株K562的7.4倍。K562/AS2对DNR和VP16部分耐药,其机制与多药耐药基因1(mdr1)表达产物P-gp作用无关。     

腺病毒载体介导的发夹状RNA抑制三氧化二砷耐药的K562/AS2细胞MRP1基因表达的实验研究

 目的　构建MRP1特异性发夹状RNA（shRNA）重组腺病毒载体,并研究其对耐三氧化二砷（ATO）的白血病K562／AS2细胞MRP1基因表达的抑制作用。方法　构建MRP1特异性shRNA重组腺病毒,并感染K562／AS2细胞;用荧光实时定量PCR法分析MRP1 mRNA的表达水平;流式细胞术检测MRP1蛋白表达;MTT法检测该细胞对ATO及依托泊苷（VP16）的细胞毒作用。结果　pAd-EGFP-U6-MRP1-shRNA重组腺病毒感染前后,K562／AS2细胞中MRP1 mRNA和蛋白表达水平分别为（34.70±0.28）、（4.19±0.03）（P＜0.05） 和 （26.40±0.16）、（10.85±0.37）（P＜0.05）;感染前后K562／AS2细胞对ATO及VP16耐药倍数分别为（11.4078±0.3183）、（1.6126±0.3015）和（5.9141±0.0149）、（1.7664±0.1038）,逆转倍数分别为（7.2409±1.3668）和（3.3555±0.1886）（P＜0.05）。结论　成功构建了pAd-EGFP-U6-MRP1-shRNA重组腺病毒载体,该载体感染K562／AS2细胞后可抑制细胞MRP1基因表达以及逆转该细胞对ATO和VP16的耐药。     

短发夹RNA抑制三氧化二砷耐药的白血病K562/AS2细胞MRPI基因表达的实验研究

目的 研究短发夹RNA(shRNA)对耐三氧化二砷(As2O3)的白血病K562/AS2细胞MRPI基因表达的抑制作用.方法 设计并合成3条针对MRPI基因的shRNA序列,在脂质体的介导下转染K562/AS2细胞;用荧光实时定量PCR分析MRPI mRNA的表达水平;流式细胞术检测MRPI蛋白表达和细胞内柔红霉素蓄积量.结果 经MRPI shRNA作用24 h后,K562/AS2细胞株中MRPImRNA和蛋白表达水平明显下降,最大下调幅度分别为(79.1±0.07)%和(62.48±0.86)%(P<0.05),同时细胞内柔红霉素蓄积量显著增加(P<0.05).结论 MRPI shRNA可抑制As2O3耐药的白血病细胞株K562/AS2细胞MRPl基因的表达.     

全程健康教育模式在糖尿病护理管理中的应用

目的:进行糖尿病护理管理中全程健康教育模式应用效果的探讨.方法:选择我院收治160例糖尿病患者,将其随机平均划分为对照组和观察组.对照组患者护理采用常规护理模式,观察组患者护理采用全程健康教育护理模式,进行两组患者护理效果的探讨.结果:护理后观察组患者自我管理率、糖尿病知识掌握率、血糖变化、护理满意度均比对照组高,各指标组间比较差异显著,P<0.05.结论:在糖尿病患者中实施全程健康教育,能够使患者血糖水平得到有效改善,并促进患者自我管理能力、疾病知识掌握率、护理满意度的提升,具有较高的临床推广价值.     

不规则抗体的筛查和鉴定在临床输血中的意义

目的检查有输血史或妊娠史的患者血清（浆）中的不规则抗体，降低或避免溶血性输血反应的发生。方法用微柱凝胶coombs IgG卡对6486例有输血史或妊娠史患者的血标本进行不规则抗体筛查和鉴定，将不规则抗体阳性的标本用coombs IgG卡进行交叉配血。结果不规则抗体阳性24例，阳性率0．37％。其中，抗-D3例，抗-E4例，抗-C2例，抗-A1 1例，抗-M2例，抗-EC2例，抗-Cc 1例，抗-JKa 2例，抗-JK^b1例，抗-FY^a2例，抗-Le^a 1例，非特异性抗体3例。结论不规则抗体筛查能有效降低或避免溶血性输血反应的发生，保证输血安全，对有输血史和妊娠史的患者尤为重要。     

慢性免疫性血小板减少性紫癜患者滤泡辅助性T细胞变化的研究

目的 探讨滤泡辅助性T细胞（Tfh）在成年人慢性免疫性血小板减少性紫癜（ITP）免疫发病机制中的作用.方法 采用流式细胞术检测42例慢性ITP患者治疗前后、42名健康者外周血CXCR5＋CD4＋细胞比例,采用酶联免疫吸附试验检测血浆白细胞介素（IL）-21浓度.结果 初发ITP患者组外周血中CXCR5＋CD4＋T细胞占CD4＋T细胞比例高于健康对照组[（12.15±6.82）％比（8.79±4.91）％,P＜ 0.005];经过激素治疗后,ITP患者外周血中CXCR5＋CD4＋T细胞占CD4＋T细胞比例有所下降[治疗后（9.01±5.13）％,P＜ 0.001],治疗后与健康对照组相比差异无统计学意义（P＞0.05）.初发ITP患者外周血血浆IL-21浓度高于健康对照组[（97.56±29.48） μg/ml比（30.36±12.93） μμg/ml,P＜0.001];经过激素治疗后,ITP患者外周血血浆IL-21浓度较治疗前有所下降[治疗后（67.35±20.58） μμg/ml,P＜0.001],但仍高于健康对照组（P＜ 0.001）.结论 慢性ITP患者存在Tfh细胞分布及功能异常,可能与慢性ITP的发生发展有关.