siRNA沉默ZNF580基因对内皮细胞MMP-2的表达及侵袭能力的影响

【目的】观察ZNF580基因沉默后内皮细胞MMP-2的表达及迁移和侵袭能力的变化,为探讨ZNF580基因功能提供科学依据。【方法】针对ZNF580基因不同部位设计并化学合成3对不同靶向小干扰RNA(siRNA),脂质体介导瞬时转染EA.hy926内皮细胞;应用半定量RT-PCR、Western blotting及明胶酶谱检测转染前后内皮细胞ZNF580和MMP-2 mRNA、蛋白的表达及活性变化;运用划痕愈合实验和Transwell小室模型检测转染前后内皮细胞迁移和侵袭能力的改变。【结果】筛选出最佳干扰序列siRNA序列3;下调ZNF580基因表达后,MMP-2 mRNA的表达及明胶酶的活性均下调(P<0.05),且内皮细胞体外迁移和侵袭能力显著降低(P<0.01)。【结论】ZNF580在内皮细胞运动转移过程中具有重要作用,可能成为肿瘤基因治疗的一个新靶点。     

基于基因表达数据库的鼠ZFP580基因功能分析

基因表达数据库(gene expression omnibus,GEO)是美国国立生物技术信息中心(National Center for biotechnology information,NCBI)在2000年7月首次公布的基因表达相关数据的公共贮存平台。2005年,NCBI等四家科研机构联合统计表明:     

中西医结合治疗痤疮30例临床观察

痤疮是皮肤科常见病,发病与多种因素有关,诊断易明,单用西药治疗容易反复,且副作用明显,单用中药治疗见效较慢.本院2010年3月～2010年10月采用中西医结合方法治疗痤疮60例,取得较好疗效,现报道如下.     

临床研究用间充质干细胞的体外制备策略

目的探讨一种安全、有效并易于推广的临床研究用间充质干细胞的产业化制备策略。方法常规方法分离获得原代脐带间充质干细胞,P1~P3代以含小牛血清培养基进行稳定传代后,以无血清培养基对P4~P6代细胞继续培养和扩增,并以含血清培养基作为对照。倒置显微镜每天定时观察细胞生长状态,CCK-8法比较P4代和P6代细胞在两种培养基中的增殖能力,并对P4~P6代细胞的细胞裂解液和细胞培养上清中的牛血清白蛋白(BSA)残留量进行检测。结果对分离获得的原代脐带间充质干细胞进行传代培养,在含血清培养基中,P1~P3代细胞增殖能力稳定,以4×104/ml密度接种,3.5~4d可达到90%融合;细胞进入P6后,在无血清培养基培养条件下增殖能力与含血清培养基相近;BSA残留量检测结果显示,无血清培养基组中细胞的培养上清和细胞裂解液中残留的BSA量低于10ng/106细胞,满足《中国生物制品规程》对相关细胞治疗产品中BSA残留量的标准要求。结论含血清培养与无血清培养相结合的程序性培养扩增体系,可为临床提供数量充足、质量可控的间充质干细胞。     

差异显示法研究氧化低密度脂蛋白诱导血管内皮细胞基因差异表达

目的：研究血管内皮细胞在致动脉粥样硬化因子作用下，差异表达基因的结构与功能。 方法：氧化低密度脂蛋白（ＯＸ－ＬＤＬ）诱导培养的人脐静脉内皮细胞，用差异显示－多聚酶链式反应（ＤＤＲＴ－ＰＣＲ）技术，克隆表达水平有明显差异的基因片段，并用Ｎｏｒｔｈｅｎ印迹法证实阳性结果。 结果：发现ＯＸ－ＬＤＬ诱导培养的人脐静脉内皮细胞（ＨＵＶＥＣ）出现一些上、下调节的基因片段。已知的上调基因包括人的胸腺素（Ｔｈｙｍｏｓｉｎ）β４、细胞间粘附因子（ＩＣＡＭ）－１、ＦＫ５０６结合蛋白、ＥＲｐ７２；下调的基因有细胞色素Ｂ５６１、Ｒｅｓｔｉｎ。用Ｎｏｒｔｈｅｒｎ印迹证实了ＤＤＲＴ－ＰＣＲ的结果，不同的上、下调节基因表达水平变化在３０％～２００％之间不等。 结论：本研究首次用ＤＤＲＴ－ＰＣＲ的方法证实在体外ＯＸ－ＬＤＬ可诱导ＨＵＶＥＣ许多基因表达水平的变化。细胞中细胞间粘附因子的高表达，进一步说明细胞间粘附因子是参与动脉粥样硬化过程重要的粘附分子。胸腺素β４基因的上调表达与ＯＸ－ＬＤＬ诱导细胞肌动蛋白张力纤维的生成增加有关，可能影响内皮细胞的增殖。     

树（鼠/句）载脂蛋白CⅡ的cDNA和蛋白质结构分析

以从树（鼠/句）肝脏mRNA反转录获得的cDNA一链为模板,应用SMART-RACE技术,获得了树NEA4DapoCⅡ的cDNA序列,并推导出其蛋白质氨基酸序列,应用分子生物学软件对该蛋白的一级、二级结构进行分析和比较.结果显示,树NEA4DapoCⅡ cDNA序列(在GenBank中的注册号为AF335585)长483 bp,其中开放阅读框架306 bp,编码101个氨基酸的前原蛋白,其蛋白原由79个氨基酸组成.树NEA4DapoCⅡ的氨基酸顺序与人、猴、狗的同源性分别为86%、87%和81%.与人及其它种属动物的相同序列比较显示,树NEA4DapoCⅡ分子C-端激活LPL功能区比N-端脂质结合区更具保守性.     

氟氯化钡：铕高速增感屏在X线摄影中的应用

目的：探讨提高小X光机拍照效果的途径。方法：在暗盒中采用氟氯化钡；铕高速增感屏进行拍摄X光胶片。结果：所拍照片背景极为干净，无灰雾，杂乱污斑；图像细腻，层次分明；微细结构及软组织阴影清晰可辩。结论：采用氟氯化钡；铕高速增感屏，可大幅度提高小X光机拍照效果。节省设备投资，减少X射线对人体的伤害。     

ZNF580对内皮细胞IL-8表达及单核细胞趋化功能的影响

【目的】研究瞬时过表达锌指基因ZNF580(zinc finger factor-8)对白介素-8(interleukin-8)的表达以及单核细胞趋化功能的影响。为探讨ZNF580在炎症反应中的机制提供依据。【方法】重组质粒p EGFP-ZNF580经转染试剂Lipofectamine TM2000瞬时转染内皮细胞融合株EA.hy926,通过鉴定高表达ZNF580后采用Real-time PCR检测IL-8的m RNA表达水平以及酶联免疫吸附法检测过表达ZNF580细胞上清中IL-8的分泌情况,运用transwell小室趋化实验分析高表达ZNF580对单核细胞THP-1细胞趋化功能的影响差别。【结果】瞬时过表达ZNF580的内皮细胞构建成功,高表达ZNF580后内皮细胞IL-8 m RNA表达及上清中分泌水平均上调,同时趋化实验证实,过表达ZNF580可引起THP-1细胞趋化功能的明显差异。【结论】构建瞬时过表达ZNF580对内皮细胞IL-8的表达及THP-1细胞趋化功能有重要促进作用,初步揭示ZNF580在动脉粥样硬化炎症的发生中的重要作用。     

有上腹部手术史的患者行腹腔镜胆囊切除术的技巧探讨

正腹腔镜胆囊切除术(LC)有减少术后疼痛、进食早、住院时间短、下地活动早、切口小、术后粘连性肠梗阻发生率低等优点。现在LC已被广泛接受作为胆囊切除手术的首选,然而仍有相当比例的患者不能成功实施LC进而转换为开腹手术。一些合并相对禁忌证的患者行LC是否可行?随着术者经验的增长,选择行LC的患者标准已被逐渐放开。本文专门研究有上腹部手术病史的患者行LC的可行性与安全性。现     

武警某院校医学科研实验室的整合与管理

实验室工作的水平是反映高等院校教学水平、科研水平和管理水平的一个重要标志.武警某院校正处于转型重组期,需要对现有科研实验室进行整合,组建综合实验中心,构建协同科研平台.本文在分析武警某院校科研实验室的现状及必要性的基础上,提出了整合的措施与方法,并探讨了整合的目的及意义.通过本文的分析,既可以为领导制定相关院校科研实验室的建设规划提供参考依据,又可以为部分科研实验室的管理提供借鉴方法,从而构建同类学院所需的科研体系,提高科研质量.