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目的构建、表达1型艾滋病病毒(HIV-1)重组蛋白,并尝试用于HIV-1新发感染捕获酶联免疫试验。方法设计、合成1种HIV-1重组蛋白(编号HIV-Ag-R03)的核酸序列,将它与pET30a-trx载体骨架连接、构建重组质粒。将重组质粒转化BL21(DE3)细胞,经异丙基硫代半乳糖苷诱导表达蛋白质。用重组蛋白包被酶标板,检测48份血浆样品(其中HIV-1抗体阳性、HIV阴性各24份),分析蛋白质的抗原性。将HIV-Ag-R03标记辣根过氧化物酶(HRP)后,取代BED捕获酶联免疫试验(BED CEIA)试剂盒中的BED肽及后续组分,比较2种方法检测18份HIV-1阳性样品的结果相关性。结果成功构建了HIV-Ag-R03的重组质粒,核酸序列确认无误。获得了包涵体表达的蛋白质,经十二烷基磺酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳分析大小与预测值一致。使用包被HIV-Ag-R03的间接酶联免疫试验检测48份1∶101稀释血浆样品,结果HIV-1抗体阳性样品的吸光度(OD)值(1.513±0.991)显著高于HIV阴性样品的OD值(0.022±0.008),差异有统计学意义(t=7.336,P0.01)。用HIV-Ag-R03-HRP取代BED CEIA试剂盒中的BED肽及后续组分,调试HIV-Ag-R03-HRP的最佳稀释度为1∶2 500,18份HIV-1阳性样品的检测结果ODn值与BED CEIA的ODn值相关性好(r=0.939,P0.01)。结论获得了1种具有抗原性的重组蛋白并成功标记HRP,建立了检测HIV-1新发感染的新模式。 相似文献
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目的研究干血斑样本用于艾滋病病毒(HIV)抗体检测的稳定性。方法使用两个品牌HIV酶联免疫吸附试验(ELISA)法抗体检测试剂盒与HIV1/2重组免疫印迹(RIBA)法抗体检测试剂盒,对不同保存形式下干血斑(DBS)存放不同时间后的样本进行HIV抗体光密度(OD)值与条带测定,分析DBS在HIV抗体检测中的稳定性。结果同一份样本经ELISA法试剂A与试剂B检测所得结果存在差异。在室温下,中阳、弱阳、阴性样本放置2周后用试剂A检测均出现OD值增高现象,而用试剂B检测均未出现OD值变化;在37℃下,中阳、弱阳、阴性样本在放置1周后用试剂A检测即出现OD值显著增高现象,而用试剂B检测时,只有放置4周后的弱阳和阴性样本出现OD值升高现象;4℃下,试剂A与试剂B检测各样本OD值均比较稳定,只有在用试剂A检测中阳样本时发现6周后出现OD值升高现象; RIBA检测发现4℃下放置16周后样本稳定性良好,而室温和37℃下随放置时间延长会导致弱阳和中阳样本条带变弱,而阴性样本在37℃密封无干燥剂情况下放置1周后会出现p31、p24、p17等条带;冻存在-20℃的DBS洗脱后样本反复冻融1~6次后OD值无明显变化。结论用国产耗材试剂制备的DBS样本在4℃和-20℃下稳定性较好,不同试剂检测出的样本稳定性差异较大,DBS样本洗脱液可反复冻融使用至少6次。 相似文献
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目的 探求适合在艾滋病自愿咨询检测(VCT)点应用的检测艾滋病病毒(HIV)抗体的替代策略.方法 从河南、安徽和山西省的27个VCT检测点日常工作中采集样品10 310份,离心分离血浆后,全部用HIV快速检测试剂1(RT1)和HIV快速检测试剂2(RT2)进行检测,其中任何一种试剂的检测.结果 为阳性时,分别用酶联免疫吸附试验(ELISA)试剂和免疫印迹试验(WB)试剂复检.当两种快速检测均为阴性时,保留血浆,集中用ELISA试剂复检,复检为阳性者,进一步用WB确认检测.结果 RT1检测为阳性的样品418份,WB确认阳性的样品386份;RT2检测为阳性的样品427份,WB确认阳性的样品388份;RT1和RT2均为阳性的样品391份,WB确认阳性的样品386份.RT1和RT2检测.结果 不一致的样品共63份,57份为ELISA阴性,6份为ELISA阳性.结论 使用任何一种HIV快速检测试剂可以筛查出99%以上的阴性样品;两种HIV快速检测试剂的检测.结果 均为阳性时,可以筛查出98%以上的阳性样品;两种HIV快速检测试剂的检测.结果 不一致时,ELISA复检为阴性的样品可按HIV抗体阴性咨询,ELISA复检为阳性的样品应进一步做WB确认检测.使用RT1 RT2 ELISA策略,可以替代98.54%的WB确认检测,并且与WB确认检测.结果 的符合率为99.94%,因而可以在保证检测.结果 质量的同时,大大减少检测费用,提高检测效率和成本效益. 相似文献
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目的:探讨健脾化痰凉血活血利水方治疗乙型肝炎肝硬化腹水临床疗效。方法乙型肝炎肝硬化腹水患者100例,随机分为观察组、中药组各50例。观察组常规予西药治疗,中药组选用中药+常规西药治疗,两组疗程均为28 d。分别观察二组患者症状改善情况,肝功能变化,判断临床疗效。结果中药组在改善肝功能、症状改善明显优于观察组,差异有统计学意义(P<0.05),且无不良反应。结论健脾化痰凉血活血利水方治疗乙型肝炎肝硬化腹水疗效显著,安全可靠。 相似文献
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目的制备人类免疫缺陷病毒1型(HIV-1)基因型耐药检测能力验证考核品,并对其均匀性和稳定性进行评估。方法选取前期检测出的5个HIV-1阳性血浆样本,其中4个具有不同耐药位点,1个对药物敏感,提取HIV-1病毒RNA,经逆转录PCR和巢式PCR获得3 100bp的pol区基因;将目的基因与pMDTM19-T载体连接后进行基因克隆,从阳性菌液中提取回收重组质粒并测序鉴定,最后评估考核品的均匀性和稳定性。结果 5个目的基因扩增测序均成功,与载体连接后得到重组载体V1、V2、V3、V4、V5,梯度退火荧光PCR结果显示考核品退火温度为64.1℃;质粒稀释倍数≤10 000时,各个样本做荧光PCR的Ct值均小于30,因此,将每种质粒稀释10 000倍分装制成考核品;选择浓度不同的3个样本V1、V2和V3分别做均匀性检测,3组Ct值差异均无统计学意义(P>0.05),该考核品均匀性良好;选择V1、V2、V3做稳定性检测,结果显示该考核品至少可以在室温和4℃稳定保存20d,在-20℃和-80℃保存反复冻存5次后浓度均未发生明显变化,表明该考核品稳定性较好。结论本研究中用克隆载体制备的HIV-1基因型耐药检测能力验证考核品均匀性稳定性良好,是一种经济便捷的HIV-1基因型耐药检测考核品制备方法 。 相似文献
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我国艾滋病母婴传播水平传播时期及干预效果研究 总被引:2,自引:0,他引:2
目的 了解我国部分艾滋病高流行地区艾滋病母要传播水平、传播时期及预防艾滋病母婴传播干预措施的效果.方法 在艾滋病病毒(HIV)感染相对高发的4个省15个县/市/区,于2004年12月至2007年6月,对287名确诊的艾滋病病毒Ⅰ型(HIV-1)感染孕产妇进行问卷调查及追踪管理,对其分娩的287名婴幼儿进行HIV-1DNAPCR检测和HIV抗体检测.结果 287名HIV-1感染孕产妇分娩的婴幼儿中,38名婴幼儿感染了HIV,艾滋病母婴传播总体水平为13.24%(38/287);未采取任何干预措施的孕产妇组艾滋病母婴传播水平为34.78%,规范应用抗逆转录病毒药物和采取人工喂养措施组的母婴传播率为4.48%,人群水平的总体母婴传播率从34.78%下降到13.24%,下降率为61.94%(x2=7.82,P<0.01).24例HIV感染婴幼儿可明确其发生艾滋病母婴传播的时期,37.50%(9/24)母婴传播发生在宫内,33.33%(8/24)发生在产时,29.17%(7/24)为产后经母乳喂养传播.结论 预防艾滋病母婴传播干预措施能有效降低艾滋病母婴传播水平,应加强提供规范的预防艾滋病母婴传播干预措施,进一步降低母婴传播率. 相似文献
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目的研究艾滋病病毒(HIV)感染者的阴性配偶,对杀微生物剂的可接受性及相关影响因素。方法采用横断面设计,于2009年5-7月,在云南省德宏州潞西市和盈江县,采用便利抽样选取301名HIV感染者的阴性配偶进行调查。结果共有278名调查对象符合研究标准,47.5%的调查对象表示将来愿意购买并使用杀微生物剂。影响调查对象购买并使用杀微生物剂的因素有:调查对象的阳性配偶近半年是否有外出打工经历,是否参加过HIV相关防治和调查项目,是否愿意使用安全套。具有以下特点的杀微生物剂易被调查对象接受:(1)能安全有效地预防HIV感染;(2)一次使用的价格在5元以下;(3)非处方药;(4)剂型为栓剂。结论调查对象对杀微生物剂的使用态度较积极,但购买需求较低。 相似文献
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目的评价检测艾滋病病毒Ⅰ型(HIV-1)新发感染的限制性抗原亲和力酶联免疫试验的重复性、稳定性和准确度,探讨该方法推广应用的可行性。方法采用检测精密度、孔间精密度、批间差、两实验员和两实验室之间结果的相关性,评价试剂的重复性;利用37℃热稳定性试验评价试剂的稳定性;使用国际标准盘评价试剂的准确度。结果检测精密度结果显示,所有样本标化吸光度值(ODn)的变异系数(CV)〈15%,两实验员和两实验室试验结果的相关系数R2值均〉0.99,孔间精密度CV值最小为3.76%,3个批次试剂的批间差结果显示,25份内控盘样本中,只有1份样本CV值〉15%,为22.5%。37℃放置7天与4℃保存的酶结合物和酶联板,对内控盘样本检测的ODn值没有明显区别。国际标准盘评判结果与预期值一致。结论检测HIV-1新发感染的限制性抗原亲和力方法具有较好的稳定性、重复性和准确度,可以在实验室网络中推广应用。 相似文献