HIV抗体质控血清的稳定性研究

目的：研究配制的质控血清的稳定性和影响因素。方法：将配制的HIV抗体质控血清进行不同的处理，然后统一用3种试剂进行检测：（1）在37℃，室温和4℃保存不同时间；（2）加入0．1％的叠氮钠和0．01％的硫柳汞保存不同时间；（3）室温和－20℃之间反复冻融。结果：人工配制的质控血清在4℃条件下6个月内可以保持稳定，在室温条件下1个月内保持稳定。反复冻融及加入0．1％的叠氮钠或0．01％的硫柳汞对检测结果没有影响。双抗原夹心法试剂检测的S／CO值显著高于间接法试剂。结论：在常规条件下血清中的HIV抗体能够在较长时间内保持稳定。     

HIV感染者CD4/CD8细胞与病毒载量的关系

目的　探讨HIV感染者体内CD4细胞数与病毒载量的关系。方法　对 84人的 2 0 7次血样进行病毒载量的测定 ,对 194人的 491次血样进行CD4/CD8细胞数的检测。CD4/CD8细胞计数采用流式细胞仪的绝对计数法进行检测 ,使用核酸序列测试 (NASBA)方法检测病毒载量。对其中一部分人进行随访 ,采集血样并检测相应指标。结果　HIV感染者体内的CD4细胞数与病毒载量的Log值呈负相关 (r =-0 576,P <0 0 1) ,CD4/CD8比值与病毒载量的Log值呈负相关 (r =-0 544,P <0 0 1)。CD4细胞数较低的感染者 ,CD8细胞数也较低。在HIV感染者体内 ,随着病毒载量的升高 ,CD4细胞数呈下降趋势。结论　病毒载量与CD4有明显的相关关系 ,当病毒载量较低时 ,使用CD4细胞数可以粗略估计血浆中病毒载量的高低。CD4/CD8比值与病毒载量的Log值呈现负相关。当病毒载量较高时 ,HIV感染者体内病毒载量与CD4细胞数的变化趋势相反 ,但不完全同步     

SARS病毒对温度耐受性的实验研究

为观察SARS病毒在冷藏和自然温度下的稳定性以及灭活SARS病毒的有效温度,将SARS病毒培养的上清液(10~6TCID_(50))分装到10ml离心管中,放置在4℃冰箱、室温(24.5℃)、37℃、56℃和70℃水浴中,间隔一定时间以后取样0.5ml,接种Vero-E6细胞。结果,SARS病毒在冷藏和室温条件下十分稳定,冷藏(4℃)放置10d,滴度只下降大约2个log,室温放置5d,滴度下降大约4个log,仍然保持较高的感染性。加热时SARS病毒的滴度迅速下降,56℃加热30min、70℃加热15min检测不出有活病毒。结论,SARS病毒在冷藏和自然温度下十分稳定,加热是灭活SARS病毒简单有效的方法。     

第4代HIV抗原抗体联合检测试剂的评价

目的评价HIV(1+2)抗原抗体联合检测试剂,了解其是否适合于血液筛查。方法用HIV抗原抗体联合检测试剂和第3代HIV抗体检测试剂平行检测HIV感染或疑似感染样本205份、吸毒人群样本1486份、有既往献血史人群样本427份、献血和献浆人群样本7237份和丙型肝炎患者样本176份,对两种试剂检测结果不一致样本进行HIV p24抗原或RNA的检测,并分析其特异性和灵敏度。结果联合检测试剂检测HIV p24抗原的分析灵敏度为(2.5~5.0)U/ml,检测HIV抗体的分析灵敏度与第3代HIV抗体检测试剂相当。共检测出8996份HIV抗体阴性样本和503份HIV抗体阳性样本,与第3代试剂相比其特异为99.67%,灵敏度为100%,而且2份HIV感染“窗口期”样本也能检出。结论该试剂在增加HIV p24抗原检测的情况下,对HIV抗体检测的特异性和敏感性没有降低,可用于血液筛查以减少“窗口期”样本传播HIV的风险。     

广西壮族自治区2008 - 2009年HIV-1流行毒株基因型及其分布

目的了解广西地区目前HIV-1流行毒株的基因型及其分布。方法收集广西地区13个市294名2008-2009年新诊断的HIV感染者血浆标本和背景信息,感染途径主要为异性性传播(86.1%)。采用RT PCR法分别扩增HIV-1 gag,pol全长基因(分别为1584 by和3147 by)及enu:基因的C2V3片段(558 bp),序列编辑后用Genotyping及Mega 5.031具确定病毒的基因型,用Simplot和Recombinant HIV-1 Drawing Tool软件进行病毒基因的重组分析。结果获得全长gag基因序列270条、全长pol基因序列246条、。enu>基因C2V3区序列223条,确定272例标本的基因型。CRFO1_AE占的比例最高(77.6% ),其次为CRF08_BC(10.7%)和CRF07_BC ( 7.4% ),有4例B(B'')亚型,1例G亚型,还有7例未知重组型。性别、民族间病毒基因型分布的差异无统计学意义。7株新型重组毒株有6株以CRF01_AE为母株,嵌人B和/(或)C的片段,还有1株为CRF07_BC和CRF08_BC的二代重组。结论广西地区目前流行的HIV-1毒株以CRFO1_AE为主,并出现以CRFO1_AE为母株嵌人其他毒株基因片段的新型重组毒株,呈现基因组结构复杂化趋势。     

虚拟表型方法在HIV-1耐药检测中的应用

艾滋病病毒Ⅰ型(HIV-1)耐药性检测,已成为抗病毒治疗中进行合理用药的重要依据。基因型和表型耐药检测是最常用的HIV耐药检测方法,这两种方法的局限性在于:基因型方法不能直接提供药物耐受信息,表型方法比较耗时。根据上述两种方法之间的良好相关性提出的虚拟表型耐药检测方法,尽管也存在不足,但是提供了另外一种方便的得到耐药信息的方法,从而更好地指导抗病毒治疗。     

河南某农村艾滋病患者劣势耐药毒株的进化及原发耐药研究

目的 了解河南省部分艾滋病患者抗病毒治疗效果及耐药发生情况,分析劣势耐药毒株在该人群本底存在情况.方法 以河南某农村149名初始接受抗病毒治疗的艾滋病患者为研究埘象,采用自建(In-house)基因型耐药检测方法分析抗病毒治疗失败患者HIV-1耐药发生情况,对抗病毒治疗后产生耐药的病例采用等位基因特异性实时定量PCR(allele-specific real-time PCR,ASPCR)方法检测其抗病毒治疗前样本劣势耐药毒株存在情况.结果 抗病毒治疗后患者的HIV-1病毒载量显著下降(t=275,P＝0.0001),但CD4+T淋巴细胞绝对数无明显变化(t＝1.765 168,P=0.0852).抗病毒治疗失败患者中耐药的发生率为4.88%,ASPCR检测发现,在调查基线时,7例耐药患者伞部存在劣势M184V突变,5例存在劣势K103N突变.结论 河南省部分未治疗的艾滋病患者存在HIV-1原发性耐药毒株,劣势耐药突变可能发展为优势耐药毒株并影响抗病毒治疗的效果.

Abstract：

Objective To evaluate the antiretroviral therapy(ART),analyze the prevalence of resistance in rural areas,Henan,and explore the presence of minor resistant variants in pre-ART.Methods One hundred and forty-nine AIDS patients initiating ART were recruited and investigated at intervals of 6 months. Method of In-house developed by our laboratory for genotypjc resistance test was to analyze the occurrence of resistance among the failure of ART,and the allele-specific real.time PCR(ASPCR)was used to detect the minor resistant variants at the baseline samples once the resistance occurred.Results Vimlload significantly decreased among the patients who received ART(t=275,P=0.0001),but the absolute counts of CD4+T lymphocytes had no significant change(t=1.765 168,P=0.0852).Rate of resistance among the patients of treatment failure was 4.88%.The result of ASPCR in the survey of baseline showed that the minor resistant variants of M184V were detected in 7 patients and mutation K103N presented in 5 patients.Conclusion The primary drug-resistant straias in the untreated patients were found in Henan,and they might develop the dominant resistance strains and bring about the failure of ART.     

S/D法对人凝血因子Ⅷ产品中人免疫缺陷病毒灭活效果的研究

目的研究S/D法对人凝血因子Ⅷ中污染的人免疫缺陷病毒灭活效果。方法采用细胞培养法,对S/D处理人凝血因子Ⅷ灭活HIV的效果进行了检测。结果在常温(25℃)条件下,在污染有HIV的人凝血因子Ⅷ种混入体积分数9%S/D灭活剂,作用60 min,HIV灭活对数值为6.83。重复处理3批人凝血因子Ⅷ制品,对HIV均达到完全灭活,经细胞培养盲传三代,均未出现细胞病变。结论 S/D法能够完全灭活人凝血因子Ⅷ产品中污染的人免疫缺陷病毒,灭活效果可靠。     

HIV-1B′亚型毒株新型耐药相关突变位点的筛选

目的 筛选HIV-1 B′亚型病毒株中可能存在的新型耐药相关突变位点.方法 收集整理前期研究获得的451条HIV-1B′亚型pol区基因序列,序列含蛋白酶全长(1～99个密码子)和反转录酶全长(1～560个密码子),长度约1977 bp.将354条来自接受抗病毒治疗艾滋病患者的(服药组)序列与97条来自未接受治疗患者的(未服药组)序列,分别与B亚型野生型pol基因共享序列进行逐个密码子比对,筛选在服药组序列中出现的频率显著高于未服药组序列的突变位点,将筛选出来的突变位点在斯坦福大学HIV-1耐药数据库中检索,根据数据库收录的情况及解释,初步分析突变与耐药的关系.结果 在服药组序列中反转录酶区有6个位点7个突变的频率显著高于未服药组,分别是D123E、V292I、K366R、T369A、T369V、A371V和1375V,即前2个突变位于反转录酶的聚合酶区、后5个突变位于反转录酶的连接区.检索数据库收录情况,有7个突变均为相应位点的主要变异形式,在服药患者中出现的频率显著高于未服药患者.结论 筛选出的HIV-1 B′亚型病毒株7个突变可能与耐药有关.     

酒精对同种骨植入材料中人类免疫缺陷病毒灭活效果的研究

目的研究75%酒精浸泡法对骨植入材料中污染的人免疫缺陷病毒灭活效果。方法采用细胞培养法,对75%的酒精浸泡处理骨植入材料中污染的H IV-1ⅢB毒株灭活效果进行检测。结果共对3个单位提供的9批骨植入材料样品进行了检测。用体积分数75%酒精浸泡处理30 m in,骨植入材料中H IV-1ⅢB毒株病毒滴度平均降低4.50 TC ID50,对检测标本盲传3代均未出现细胞病变。结论75%酒精浸泡能够完全灭活骨植入材料中污染的人免疫缺陷病毒。