食品中五种致病性弧菌MPCR—DHPLc检测方法的建立

采用试剂盒法提取5种致病忭弧菌(霍乱弧卤、副溶血性弧菌、创伤弧菌、溶藻弧菌和拟态弧菌)的基因组DNA.分别合成5对特异性引物,对PCR反应体系进行优化后,建立了5种致病忭弧菌间的MPCR-DHPLC检测方法.二重PCR-DHPLC检测灵敏度可达到100CFU/ml.建立的MPCR-DHPLC方法在食品中弧菌的检测上具有很好的应用价值.     

气相色谱法测定含糖食品中2-(4-甲氧基苯氧基)-丙酸钠

利用气相色谱(FID)技术对各种含糖食品中的抑甜剂2-(4-甲氧基苯氧基)-丙酸钠进行检测。样品酸化后,经乙醚提取,用带有FID检测器的气相色谱仪进行分离测定。方法的检出限为0.4 g/kg,平均回收率为94.8%~101.7%,平均相对标准偏差(RSD)为3.6%~4.6%。该方法能够满足一般含糖食品中2-(4-甲氧基苯氧基)-丙酸钠检测的需要。     

食品中拟态弧菌变性高效液相色谱检测技术研究

应用PCR 结合变性高效液相色谱(DHPLC)技术对食品中致病菌--拟态弧菌进行检测,探讨其灵敏度特异性,建立快速高通量检测食品中拟态弧菌的新方法。利用DHPLC 在非变性温度下进行双链DNA 分离的原理,应用DHPLC 技术分析拟态弧菌特异性PCR 扩增产物。在优化的分析条件下,对样品洗脱峰排列形成的聚类分析图进行分析,得到拟态弧菌的特征峰型图谱。结果表明该方法有很好的特异性。与传统检测方法进行比较该方法准确度为100%。本实验建立的食品中拟态弧菌PCR-DHPLC 检测技术,特异性灵敏,准确度高,操作快速、简便,在食品安全检测中具有重要应用价值。     

实时荧光PCR法检测鼠伤寒沙门氏菌

目的 建立实时荧光PCR法检测鼠伤寒沙门氏菌的方法。方法 基于鼠伤寒沙门氏菌II型限制酶基因, 设计引物及Taqman探针, 利用实时荧光PCR进行特异性、灵敏性及模拟样品的检测实验。结果 特异性探针可从25种血清型沙门氏菌(共49株)及11株阴性对照菌株中检测出全部的11株鼠伤寒沙门氏菌。以鼠伤寒沙门氏菌梯度稀释菌液DNA为模板进行实时荧光PCR实验, 菌株模板浓度与Ct值呈良好线性关系, 线性系数(R2)为0.998, 扩增效率90%, 最低检测浓度300 cfu/mL。对已接种鼠伤寒沙门氏菌的4种模拟样品同时进行实时荧光PCR检测和传统方法鉴定, 两者结果一致。结论 此方法特异、灵敏、准确, 适于食品中鼠伤寒沙门氏菌的检测。     

转基因玉米质粒分子国家标准样品的构建

本文研制转基因玉米常见的4个品系:BT11、MON810、NK603和T25质粒分子国家标准样品.研究重点包括目标序列和内标准基因序列的选择和扩增、标准样品定值和分析等.均匀性和稳定性结果表明,所研制的转基因玉米4个品系标准样品均匀稳定.采用PicoGreen DNA分子荧光定量方法定值标准样品.多家单位合作定值,确定标准样品的标准值及其不确定度.所研制的转基因玉米质粒分子标准样品获得了国家标准样品证书,适用于转基因产品的定量和定性测定.     

SYBR(R) GreenⅠ实时PCR快速检测沙门菌

为应用SYBR(R) Green Ⅰ实时PCR技术建立沙门菌的快速检测方法,根据沙门菌invA基因序列的特点设计特异性引物,进行SYB(R) Green Ⅰ实时PCR检测.以沙门菌及非同源性参考菌株做特异性检测;沙门菌不同群菌株做重现性检测;将沙门菌菌株稀释成不同梯度,做灵敏度检测.该方法有较好的特异性、重现性,沙门菌属5个群菌株均为阳性,而其它非同源菌株均为阴性.该方法灵敏度较高,检测低限为19 CFU/ml.该方法特异性强,重现性好,敏感性高,可以快速、准确检测食品中沙门菌.应用实时PCR技术,利用SYBR(R) Green Ⅰ染料能选择性结合双链DNA的特点,可检测到沙门菌中inv A基因特异性靶序列扩增所产生的荧光信号,且通过熔解曲线可知其熔点值约为80.4℃,而对其它非沙门菌则检测不到荧光信号.SYBR(R) Green Ⅰ实时PCR能通过熔解曲线有效地区分特异性产物、非特异性产物以及引物二聚体,是基因鉴定检测的新方法.     

食品病原微生物快速检测技术研究进展

随着现在食品工业的快速发展,食品安全越来越受到各国的重视。影响食品安全的因素很多,其中食品中的病原微生物是影响食品安全的主要因素之一。为了对食品安全进行有效、快速的监测,控制食品加工中的病原微生物,研究和建立食品病原快速检测方法对于食品质量控制和监管及人们健康也就越来越重要。食源性致病菌的传统检测方法繁琐复杂、周期较长,因而快速、简便、特异的检测方法成为研究的热点。快速检测方法的应用范围非常广泛,并且比传统的检测方法更加敏感。本文主要从分子生物学技术、免疫技术、代谢技术、生物传感器技术等方面介绍了目前国内外用于食品微生物检测的先进技术,并对这些在当前较为先进的主流的快速检测技术进行总结分析,为今后进一步研究和开发新检测技术提供一些参考。     

QuEChERS法联合高效液相色谱法快速检测扇贝中的软骨藻酸

目的利用QuEChERS样品制备结合高效液相色谱法建立测定扇贝中记忆缺失性贝类毒素—软骨藻酸(domoic acid,DA)残留的检测方法。方法 QuEChERS样品制备法进行样品前处理,即样品经甲醇:乙腈:水=6:3:1(v:v:v)提取,C18粉末净化,反相高效液相色谱分离,242 nm波长下检测,基质匹配校准曲线外标法定量。结果方法的检测低限(limit of quantitation,LOQ)为1.8μg/g,DA在0.72~30.00μg/m L浓度范围内线性良好(相关系数r=0.9998),在1.8~6.0μg/g添加浓度范围内,平均回收率为90%左右,相对标准偏差(relative standard deviation,RSD)小于5%。结论本实验建方法检测低限完全满足DA 20μg/g的限量要求,且步骤简单、可操作性强、节省时间、试剂用量少、准确度高、精密度好,具有快速高效的特点。     

食品安全网络资源数据库现状及展望

网络资源数据库为食品安全问题的解决提供了强大的信息支持,是相关研究人员、管理者乃至决策者获取食品安全信息的有力工具。本文从综合型网络资源数据库和专业型网络资源数据库两个层面分别对国内外相关网站进行了简要介绍,其中综合型网络资源数据库主要介绍了国内的食品数据库、食品安全网和台湾食品数据库,以及国外的国家食品安全数据库(National Food Safety Database)、食品安全研究项目数据库(Food Safety Research Projects Database)、欧盟委员会健康与消费者保护总署食品网和全球食品安全数据库(The Collab4safety Stakeholder Database);专业型网络资源数据库则是按照食品添加剂、农药、兽药、微生物、化学药物的分类方式进行分别介绍的。针对国内外网络资源数据库的特点,本文对我国网络资源数据库的发展提出了展望。