周期性压力培养对兔骨髓间充质干细胞增殖的影响

背景：各种外界应力对细胞增殖有重要作用,但涉及骨髓间充质干细胞最佳压力及加载时间的力学研究尚少。目的：探讨周期性压力培养对兔骨髓间充质干细胞增殖活性及细胞周期的影响。设计、时间及地点：细胞学体外对照实验,于2008-01/08在南昌大学重点分子生物实验中心完成。材料：健康6周龄雄性新西兰大白兔4只,由南昌大学实验动物中心提供。自行改制的细胞压力加载装置专利号ZL2006-2-0097266.3。方法：使用密度梯度离心法体外分离培养兔骨髓间充质干细胞,取生长良好的第3代细胞,按4×104个/孔接种于6孔板,设立5组：5.32,10.64,21.28,29.26kPa压力组分别给予对应的压力,每日加压6h×3d;正常培养组细胞只接受正常大气压力学刺激,不予额外加压。主要观察指标：力学干预后,观察细胞形态及生长状况,MTT法检测细胞增殖,流式细胞仪测量细胞周期变化。收集细胞培养上清液,检测基质金属蛋白酶2的质量浓度。结果：6h/d压力干预骨髓间充质干细胞,3d后细胞形态无异常变化,呈集落样生长。随着周期性压力的增加,细胞吸光度值逐渐升高,以21.28kPa压力组为佳,但升高至29.26kPa压力时吸光度值明显降低（F=3.731,P=0.008）。与正常培养组比较,5.32,10.64,21.28kPa压力组细胞周期发生改变,增殖指数均明显升高（P〈0.05或0.01）,但29.26kPa压力组增殖指数则明显下降。细胞培养上清液基质金属蛋白酶2质量浓度21.28kPa压力组最低,29.26kPa压力组最高,组间比较差异有显著性意义（t=213.214,P〈0.001）。结论：5.32～21.28kPa周期性压力可以提高骨髓间充质干细胞的增殖能力,特别是21.28kPa压力刺激促增殖作用尤为明显,但压力过强则抑制细胞增殖。     

心肌造影超声心动图对糖尿病大鼠心肌微循环的评价

目的 研究心肌造影超声心动图(MCE)技术结合潘生丁负荷试验是否能够早期检测糖尿病(DM)大鼠左室心肌微循环的功能障碍.方法 雄性SD大鼠18只,腹腔注射链脲菌素复制DM模型,另12只体质量匹配的雄性SD大鼠腹腔注射生理盐水作为对照.分别在静息状态和潘生丁负荷后,对两组大鼠(12周)乳头肌水平左室短轴行MCE检查,测定各室壁感兴趣区域峰值声学强度(PI)、造影剂灌注速率(β)及声学强度达峰时间(TTP)等指标,计算心肌血流量(MBF)和心肌血流储备(MFR).MCE检查完毕后,对心肌组织分别行~(99m)Tc-MIBI核素摄取量及毛细血管密度测定.结果 无论静息状态还是负荷后,同组大鼠后壁的MBF较前壁、侧壁和室间隔的MBF显著减低(P<0.05);取前壁心肌进行组间比较,静息状态和负荷后,DM组的PI、MBF和MFR均较对照组显著减低(P<0.05).潘生丁负荷后,DM组β也较对照组显著减低,TTP显著延长(P<0.05).DM组各室壁的核素摄取量和毛细血管密度均显著减低(P<0.05).结论 MCE检测的PI、β、TTP、MBF及MFR等指标可以敏感地检测出DM早期的心肌微循环功能障碍.     

糖原合成酶激酶-3β介导心肌营养素-1对心肌细胞急性缺氧复氧损伤的作用

目的 研究心肌营养素-1(CT-1)对心肌细胞急性缺氧复氧损伤的作用及信号通路.方法 本研究在江西省分子医学重点实验室完成.用改良的方法培养出生1～3 d的Sprague-Dawley(SD)乳鼠心肌细胞,根据实验要求分为5组:(1)对照组;(2)缺氧复氧组;(3)缺氧复氧组+CT-1组;(4)缺氧复氧组+CT-1+LY294002组(PIK3/Akt阻断剂);(5)缺氧复氧组+CT-1+助溶剂DMSO组.CT-1的质量浓度为10ng/mL,缺氧3 h,复氧3 h.MTS法测定心肌细胞的存活率,四氯四乙基苯丙咪唑基羰化青碘化物(JC1)检测心肌细胞线粒体膜电位(△ψm),二氯荧光黄双乙酸盐(DCFH CA)检测细胞活性氧(ROS),流式细胞仪检测心肌细胞凋亡率.心肌细胞磷酸化糖原合成酶激酶-3β(GSK-3β)和PI3K蛋白检测用western blotting.以方差分析及q检验进行统计学分析.结果 缺氧复氧培养后心肌细胞凋亡率及细胞内ROS较对照组明显增加,而心肌细胞存活率显著降低,线粒体膜电位(△ψm)下降[(40.55±4.25)vs.(86.28±7.15),P<0.01];磷酸化的GSK-3β和PI3K蛋白稍有增加.而CT-1处理的心肌细胞,较缺氧复氧组心肌细胞存活率明显上升(87%),心肌细胞凋亡率及细胞内ROS显著减少,△ψm水平增加,磷酸化GSK-3β及PI3K蛋白水平明显增加.CT-1的作用能被PIK3/Akt阻断剂LY294002抑制,而助溶剂组则未观察到类似作用.结论 CT-1能保护缺氧复氧损伤的心肌细胞,且其作用依赖PI3K/GSK-3β信号通路的激活.     

速度向量成像结合潘生丁负荷在糖尿病大鼠心肌收缩功能评价中的应用价值

目的 探讨速度向量成像(VVI)技术结合潘生丁负荷试验是否可以早期检测糖尿病(DM)大鼠左室壁潜在的心肌功能障碍.方法 雄性SD大鼠18只,腹腔注射链脲菌素复制DM模型,另12只体质量匹配的雄性SD大鼠腹腔注射等量柠檬酸缓冲液作为对照.分别在静息状态和潘生丁负荷后,对两组大鼠(12周)乳头肌水平左室短轴观行VVI及M型超声心动图检查,分别测量潘生丁负荷前后乳头肌水平左室短轴观各个节段心肌最大收缩速度(Vs)、切向应变(εc)、径向应变(εr)、收缩期最大切向应变率(SRc)、径向应变率(SRr)及室壁增厚率的平均值.处死动物,摘除心脏,行HE染色及透射电镜检查.结果 静息状态下,DM组SRc较对照组显著减低(P＜0.05),其余指标与对照组的差异无统计学意义.潘生丁负荷后,DM组各指标均较对照组显著减低(P＜0.05).而M型检测的两组间室壁增厚率的差异并无统计学意义(P＞0.05).结论 VVI与负荷超声心动图相结合,可以更敏感地检测出DM大鼠潜在的室壁运动异常.SRc可能是更为敏感的指标,其在静息状态下便可以检测出这种室壁运动的异常.     

培哚普利对一氧化氮缺乏大鼠主动脉内膜增生和P选择素表达的影响

为观察培哚普利对一氧化氮缺乏大鼠主动脉病理变化及P选择素表达的影响。随机选择 2 0周龄雄性Wistar大鼠分为正常对照组 ;L NAME处理组 ;L NAME及 4mg/(kg .d)和 0 .4mg/(kg .d)两种剂量培哚普利治疗组。各组于干预后 2周及 8周取材 ;另两组L NAME处理大鼠于处理后 1日及 3日时取材。检测血压、主动脉内层与中层面积比和动脉内层P选择素阳性细胞数。结果发现 ,①对照组大鼠主动脉内膜未见P选择素阳性细胞。L NAME处理 1天鼠主动脉内膜可见P选择素阳性细胞 ,L NAME处理 3天鼠P选择素阳性细胞数明显增多。②L NAME处理 2周及L NAME处理 8周组随着内层与中层面积比增加 ,P选择素阳性细胞数进一步增加。③培哚普利处理 2周和 8周组主动脉内层与中层面积比明显小于各自的L NAME处理对照组 ,同时P选择素阳性细胞数也明显减少。研究证明培哚普利可以明显减少L NAME所致的P选择素的过度表达及减轻动脉内膜增厚的程度。     

纾肠方治疗肝郁脾虚证腹泻型肠易激综合征多中心随机双盲安慰剂对照研究

目的 观察纾肠方治疗肝郁脾虚证腹泻型肠易激综合征（IBS-D）的临床疗效和安全性。方法采用多中心、随机、双盲、安慰剂平行对照、优效性检验临床试验设计，收集12家上海市脾胃病专科联盟加盟单位就诊的IBS-D患者179例，最终入组受试者120例，采用中心分层区组化随机方法分为试验组（42例，给予纾肠方）、对照组（43例，给予疏肝饮）和安慰剂组（35例，给予十分之一剂量药物）。3组同时给予低可发酵的低聚糖、二糖、单糖和多元醇（FODMAP）饮食指导。治疗周期为8周。采用符合方案集（PPS）为主要数据集进行疗效评价，依据意向性分析原则进行安全性分析。主要疗效评价指标为肠道严重程度评分（IBS-SSS）及中医证候评分；次要疗效指标为腹痛/腹部不适视觉模拟（VAS）评分、腹泻评分、临床症状痊愈率和肠易激综合征生活质量量表（IBS-QOL）。结果 PPS集纳入110例，其中试验组39例，对照组39例，安慰剂组32例。与本组治疗前比较，试验组与对照组治疗14～56天时IBS-SSS评分均降低（P<0.05）,56天时多梦易醒、急躁易怒、善思多虑症状评分及脾虚次症均降低（P<0.05），治疗...