提高《生物工程设备》课程教学质量的探索与实践

《生物工程设备》是生物工程专业本科生的学科专业课程。针对《生物工程设备》课程的教学现状,本着调整课程教学体系、优化教学内容、革新教学方法和手段、重视实践教学基地建设和师资队伍建设、注重培养学生创新能力等形式和原则, 对课程进行了教学改革和实践。     

曼陀罗植物内生真菌产生物碱菌株的筛选研究

本文从植物曼陀（Datura arborea）中分离得到77株内生真菌。对它们分别进行菌株发酵,发酵产物经乙醇浸提,采用TLC和生物碱显色方法,观察到菌株Ym311977、Ym312023呈生物碱阳性反应。结合HPLC分析结果,表明该生物碱并非曼陀罗植物中的主要生物碱成份。经鉴定,Ym311977属镰孢菌属（Fusarium sp．）,Ym312023属毛壳菌属（Chaetomium sp．）。     

脂肪酶活力测定研究进展

脂肪酶催化作用发生在油-水界面上,是一种典型的界面酶,因此其活力测定有别于其他的水相酶。如何准确测定酶活力的大小,对于研究该酶的特性及应用具有重要的意义。本文对脂肪酶检测的常用方法进行了综述与评价。     

CRISPR/Cas9高效敲除突触结合蛋白Ⅰ的电生理学研究

研究一种蛋白质在神经元中的功能,最有效的方法之一是在该基因敲除动物的神经元中确认其表型.传统的用胚胎干细胞建立基因敲除动物模型的方法虽然稳定,但是复杂、耗时.近几年来,一种新型基因组编辑技术——CRISPR/Cas9,能够在不分裂的神经元中高效特异地敲除目的基因.本文研究了用CRISPR/Cas9系统敲除突触结合蛋白Ⅰ(synaptotagminⅠ,Syt1)基因后的小鼠海马培养神经元的电生理学特性.我们设计并构建了Syt1单导向RNA(Syt1 sgRNA)的慢病毒载体质粒,并用编码Cas9和Syt1 sgRNA的慢病毒感染培养的小鼠海马神经元,急性敲除神经元中Syt1基因(Syt1 sgRNA组),并用不靶向任何基因的Scramble sgRNA感染神经元作为阴性对照(Scramble组).通过全细胞膜片钳的方法检测单动作电位诱发的兴奋性突触后电流(single AP-eEPSC)、微小兴奋性突触后电流(mEPSCs)、高糖反应测量的即刻可释放囊泡池(RRP)以及10 Hz串刺激测量的囊泡释放概率(P_r).结果显示,Syt1 sgRNA组神经元丧失了Syt1的功能,并且与Syt1敲除(Syt1 KO)小鼠神经元的突触传递表型相似,而Scramble组神经元的各参数和野生型(WT)小鼠神经元相比没有显著性差异.本文为CRISPR/Cas9技术应用于神经元中基因的急性修饰提供了依据.     

苏云金芽孢杆菌蛋白酶发酵动力学模型的构建

对苏云金芽孢杆菌FS140蛋白酶分枇发酵的代谢特性进行了研究.首先描述了FS140分枇发酵过程中细胞生长、产物积累、糖消耗的变化规律.基于Logistic方程和Luedeking-Piret方程,建立了苏云金芽孢杆菌蛋白酶发酵过程细胞生长、产物合成及基质消耗随时间变化的数学模型.动力学模型计算值结果与实验值拟合良好,较好反映了苏云金芽孢杆菌分批发酵过程的动力学特征.     

施氮水平对蚕豆枯萎病和根际微生物代谢功能多样性的影响

研究不同氮肥用量对蚕豆根际微生物功能多样性的影响及其与蚕豆枯萎病发生的关系.通过田间小区试验,采用Biolog微平板分析法研究了4个施氮水平N₀(0 kg·hm-2)、N₁(56.25 kg·hm^-2)、N₂(112.5 kg·hm^-2)和N₃(168.75 kg·hm^-2)对蚕豆枯萎病危害和根际微生物代谢功能多样性的影响.结果表明： 施氮(N₁、N₂、N₃)处理显著降低了蚕豆枯萎病的病情指数和根际镰刀菌的数量,显著增加了蚕豆根际的细菌、放线菌数量、细菌/真菌和放线菌/真菌.其中N₂处理蚕豆枯萎病病情指数和镰刀菌数量最低,而细菌、放线菌数量、细菌/真菌和放线菌/真菌最高.与N₀处理相比,N₁、N₂、N₃处理均提高了根际微生物群落碳源利用率(AWCD),但对6类碳源的利用存在一定的差异.不同施氮水平下根际微生物群落对糖类、羧酸类和氨基酸类碳源利用程度较高.主成分分析表明,施氮明显改变了蚕豆根际微生物群落结构,糖类、羧酸类和氨基酸类碳源是区分施氮导致土壤微生物群落变化的敏感碳源.施氮抑制了根际微生物对部分糖类和羧酸类碳源的利用,而提高了对氨基酸和酚酸类碳源的利用,这可能是施氮减轻蚕豆枯萎病危害的重要原因之一.适量施氮能增加根际细菌、放线菌数量,改变微生物代谢功能,降低病原菌数量,是抑制蚕豆枯萎病发生的有效措施.     

西洋参根中人参黄酮苷的分离鉴定

利用大孔吸附树脂柱及葡聚糖凝胶C 2 5柱层析 ,首次从西洋参根中分离并鉴定出黄酮类成分———人参黄酮苷 ,并对其进行了结构鉴定。为人参与西洋参的鉴别提供了又一成分区别点     

不同色斑型异色瓢虫COⅠ和COⅡ基因序列系统进化分析

利用线粒体COⅠ和COⅡ基因序列分析法,研究13种色斑型异色瓢虫Harmonia axyridis Pallas的系统分化,计算核苷酸的使用频率,并构建分子系统树,以便更好地探索异色瓢虫色斑变异的规律。结果表明,在用于分析的COⅠ基因和COⅡ基因的序列中,共有31个变异位点,29个简约信息位点,A+T平均约占71.2%,大部分碱基改变为颠换。13种不同色斑型异色瓢虫的遗传距离为0.0021～0.0328,平均相似系数为0.0193。分别采用邻接法(NJ)、最大简约法(MP)、最小进化法(ME)构建系统发育树。分子系统树显示:各类群间遗传分化很小,鞘翅颜色相同的瓢虫均已较高的置信值聚在一起;双月斑变型和显明变种亲缘关系最近,重名变种为原始类群,分化较早,与其它12种不同色斑异色瓢虫亲缘关系较远。     

miR-25抑制结肠癌细胞凋亡

为了通过结肠癌细胞实验,探究miR-25对结肠癌细胞凋亡的影响,本研究通过qRT-PCR检测结肠癌细胞中miR-25的表达情况;通过CCK-8法检测miR-25抑制剂转染组细胞活力状态;将miR-25抑制剂转染至结肠癌细胞,通过蛋白免疫印迹法检测结肠癌细胞中Bax和Bcl-2蛋白的表达情况;通过Caspase-3活性检测试剂盒检测结肠癌细胞中Caspase-3表达情况;通过流式细胞仪检测结肠癌细胞中ROS水平;通过Elisa试剂盒检测4-HNE、GSH和MDA含量。结果表明:结肠癌细胞中miR-25表达明显高于正常结肠粘膜组;miR-25抑制剂转染结肠癌细胞后,结肠癌细胞活力明显低于空载体对照组;miR-25抑制剂转染后,结肠癌细胞中Bax蛋白显著高于空载体对照组(p0.05),且Bcl-2蛋白低于空载体对照组(p0.05),Caspase-3活性高于空载体对照组(p0.05);miR-25抑制剂转染后,结肠癌细胞中ROS水平明显高于空载体对照(p0.05);miR-25抑制剂转染后,结肠癌细胞中ROS水平明显高于对照组(p0.05);miR-25抑制剂转染后结肠癌细胞中4-HNE (p0.05)和MDA (p0.05)含量明显增加,GSH (p0.05)含量显著降低。miR-25抑制剂可促进结肠癌细胞凋亡,其机制可能与增加结肠癌细胞中ROS水平导致氧化应激水平增强有关。     

枳椇属植物化学成分及生物活性研究进展

本文较全面地综述了枳属植物的成分及药理学研究现状。结果表明枳属植物具有极大的开发潜力。