RP-HPLC法测定甲磺酸帕珠沙星原料含量及其有关物质

目的:反相高效液相色谱法测定甲磺酸帕珠沙星原料含量及其有关物质。方法:采用HypersilC18(5μm,4.6mm×250mm)色谱柱,以0.1%磷酸(加0.0805g磷酸氢二钾):乙腈(85:15)为流动相,流速1.0mL.min,柱温30℃,于243nm波长处测定甲磺酸帕珠沙星含量及有关物质。40±2℃放置6个月、25±2℃放置12个月考察质量稳定性。结果:1.0-500μg/mL内峰面积与浓度线性关系良好。样品溶液室温放置24小时稳定,RSD<1.0%。甲磺酸帕珠沙星保留时间为7.012分钟,与有关物质分离度>1.5。3批原料含量平均值为99.8%,有关物质含量<1.0%。加速试验及长期放置质量稳定。结论乏RP-HPLC法测定甲磺酸帕珠沙星原料含量及其有关物质简便,结果可靠,可用于甲磺酸帕珠沙星原料及其制剂的质量控制。     

应用转染BMP7基因组织工程软骨修复兔膝关节软骨缺损观察

目的 构建转染骨形态发生蛋白-7(BMP7)基因组织工程软骨,观察对家兔膝关节软骨缺损的修复作用.方法 将转染BMP7基因的软骨细胞(5×109个/L)接种于胶原-纤维蛋白凝胶的支架中,培养14 d后移植于家兔膝关节软骨表面,直径为5.0 mm,深达软骨下骨板的全层软骨缺损部位.移植后4、8、12周处死家兔,通过创面形态观察、组织形态的光镜观察、BMP7基因在移植部位的表达,评价转染BMP7基因组织工程软骨对兔膝关节软骨缺损的修复作用.结果 转染BMP7和未转染BMP7基因组织工程软骨培养物的体积分别为9 mm × 9 mm×2 mm和8 mm×8 mm×2 mm.转染BMP7基因组移植于家兔膝关节软骨后4、8、12周,均有软骨缺损修复作用,且移植部位有红褐色BMP7 mRNA和棕红色BMP7蛋白表达.移植后12周修复效果佳.优于未转染BMP7基因组.结论 转染BMP7和未转染BMP7基因组织工程软骨对兔膝关节软骨缺损均有修复作用,但转染BMP7基因组织工程软骨修复作用更强.     

2007年我院96例药品不良反应分析

目的：总结我院药物不良反应（ADR）发生特点,促进临床合理用药。方法：对我院2007年收集的96例ADR报告分别从患者年龄、性别、药物种类、原患疾病、抗感染药物类别、临床具体表现等方面进行统计分析。结果：96例ADR报告涉及7大类药物,其中抗感染药物所占比例最大,占68.75%。ADR的种类以皮肤损害为主,占55.21%,其次为神经系统反应。结论：开展ADR监测是医疗机构的重要任务,加强ADR监测是安全、合理用药的保障。     

BMP7基因克隆及其在兔关节软骨细胞中的表达

目的：克隆骨形态发生蛋白BMP7基因并检测其在体外培养的兔关节软骨细胞中的表达。方法：从体外培养的幼兔膝关节软骨细胞中提取总RNA;按GenBank BMP7基因序列化学合成2条引物,采用RT-PCR方法得到BMP7基因;将BMP7基因片段插入到真核表达载体pcDNA 3.1中,构建pcDNA3.1-BMP7真核表达载体质粒;利用双酶切、PCR及核苷酸序列分析鉴定BMP7目的基因;将重组pcDNA3.1-BMP7真核表达载体质粒转染家兔关节软骨细胞,分别采用原位杂交、PCR、Western blotting法测定BMP-7表达。结果：克隆得到的BMP7基因核苷酸序列长约1 300 bp,构建的重组pcDNA 3.1-BMP7真核表达载体质粒目的基因BMP-7序列与GenBank报道的BMP-7基因（No. BC008584)一致,转染了BMP7基因的体外培养的成年家兔膝关节软骨细胞表达了BMP7蛋白。结论：成功构建表达BMP7蛋白的转基因关节软骨细胞,其可用于细胞移植治疗或作为种子细胞构建组织工程软骨修复关节软骨缺损。     

重组BMP7真核表达载体的构建及其对关节软骨细胞的转染

目的：构建pcDNA3.1-BMP7真核表达载体,并探讨转染关节软骨细胞的脂质体和DNA的最佳比例及BMP7基因表达。方法：构建pcDNA3.1-BMP7真核表达载体。用脂质体将pcDNA3.1-BMP7包裹形成DNA脂质体复合物,转染家兔关节软骨细胞,G₄₁₈筛选。转染过程中确定脂质体浓度、脂质体与pcDNA3.1-BMP7质粒的比例。原位杂交、PCR、Western blotting测定BMP7表达。结果：构建了pcDNA3.1-BMP7真核表达载体,脂质体与 pcDNA3.1-BMP7质粒最佳转染浓度为3 mL培养液中加10 μL脂质体和4 μg pcDNA3.1-BMP7质粒(2.5∶1);以400 mg·L^-1 G₄₁₈的正常培养液筛选28 d,BMP7为阳性表达。结论：在脂质体介导下,pcDNA3.1-BMP7转染家兔关节软骨细胞获得成功,且BMP7在该细胞中稳定表达。     

手术病人丙泊酚的血药浓度测定及靶控输注系统评价

目的:测定全身麻醉手术病人血浆中丙泊酚浓度,分析实测的病人血浆中丙泊酚浓度与靶控输注(target controlled infusion,TCI)系统预测的丙泊酚浓度的相关性,对TCI系统进行评价.方法:选择20例美国麻醉医师协会(ASA)评级为ASA1～ ASA2级的全身麻醉手术病人,TCI系统丙泊酚的诱导浓度为6μg/ml;麻醉维持浓度分别为2.8、3.2、3.5、3.8 μg/ml.HPLC法测定给药后不同时间病人血浆中的丙泊酚浓度.结果:麻醉诱导和维持阶段病人血浆中丙泊酚实测浓度高于靶控输注浓度,停止输注后实测浓度低于靶控输注浓度.TCI系统的偏离度(MDPE)和精密度(MDAPE)分别为6.0％和6.2％.病人脑电双频指数、反应熵和状态熵受麻醉影响明显.结论:TCI系统在麻醉指标监测下,可为临床用药提供参考.     

家兔关节软骨骨形成蛋白-7成熟肽基因克隆及序列测定

目的 证实家兔膝关节软骨中骨形成蛋白-7(BMP-7)的表达，获得BMP-7成熟肽基因。方法 提取家兔膝关节细胞总RNA，反转录合成cDNA，以特异性引物扩增BMP-7成熟肽基因并克隆入T载体，筛选阳性克隆质粒进行核酸序列分析。结果 PCR扩增得到一特异性的约630bp片段，克隆后筛选出阳性克隆质粒，序列测定结果表明与发表的BMP-7成熟肽基因序列一致。结论 家兔膝关节软骨细胞中有BMP-7成熟肽基因的表达，克隆得到了BMP-7成熟肽基因，为BMP-7在软骨发育中的作用及其功能研究奠定了基础。     

骨形态发生蛋白7诱导骨髓间充质细胞向软骨细胞分化的作用

目的 观察转染骨形态发生蛋白7(BMP7)基因的骨髓间充质细胞(BMSCs)所表达的BMP7蛋白在体外诱导该细胞向软骨细胞方向分化的作用.方法 分别取诱导液诱导的BMSCs(诱导组)、转染BMP7基因的BMSCs(转染组)以及未处理的BMSCs(对照组),在6孔板中细胞爬片,经HE、阿尔新蓝染色后,在倒置显微镜下观察形态.3组BMSCs培养7、14、21 d后,以半乳糖醛酸为对照品绘制标准曲线法测定培养液中糖胺多糖(GAG),ELISA法测定胶原蛋白Ⅱ.结果 HE、阿尔新蓝染色后,转染组和诱导组BMSCs分别呈红色和蓝色,具有软骨细胞特性.BMP7诱导后的细胞团表达了GAG和胶原蛋白Ⅱ.第21天,转染组GAG为(39.5±5.4)mg/L,胶原蛋白Ⅱ为(152.8±14.5)μg/L;诱导组GAG为(40.8±6.1)mg/L,胶原蛋白Ⅱ为(155.5±19.3)μg/L;对照组GAG为(17.1±3.4)mg/L,胶原蛋白Ⅱ为(89.7±14.3)μg/L;与对照组比较,转染组与诱导组GAG、胶原蛋白Ⅱ水平明显增高(P均<0.05),转染组与诱导组比较,则未见明显改变(P>0.05).结论 转染BMP7基因的BMSCs表达的活性BMP7能够诱导BMSCs向软骨细胞方向分化,且其诱导水平达到了诱导液的诱导水平.     

重组骨形态发生蛋白7基因转染骨髓间充质干细胞及其在该细胞中的表达

目的将重组骨形态发生蛋白7质粒（pcDNA3．1-BMP7）转染至体外培养的兔骨髓间充质干细胞中．测定骨形态发生蛋白7基因在该细胞中的表达。方法骨形态发生蛋白7基因序列测定、拼接后与报道的骨形态发生蛋白7基因序列对照：脂质体介导pcDNA3．1-BMP7转染骨髓间充质干细胞，G418筛选14d，Western blot、PCR、原位杂交检测骨形态发生蛋白7基因的表达。结果序列测定证实与GenBank报道的骨形态发生蛋白7全长基因序列一致：转染pcDNA3．1-BMP7质粒的骨髓间充质干细胞有大量骨形态发生蛋白7蛋白及骨态发生蛋白7 mRNA表达。结论脂质体介导下，重组真核表达载体pcDNA3．1-BMP7能被转入骨髓间充质干细胞．且表达了骨形态发生蛋白7及骨形态发生蛋白7 mRNA。