氧化性低密度脂蛋白诱导浓度和时间对肝癌HepG2细胞胆固醇积累的影响

目的 探讨氧化性低密度脂蛋白(oxidized low density lipoprotein,ox-LDL)促进肝癌HepG2细胞中胆固醇蓄积的最适浓度和最适作用时间。方法 将肝癌HepG2细胞接种于含10%的胎牛血清和1%双抗(青霉素、链霉素)的高糖DMEM培养基中,置于5%浓度的CO₂培养箱中培养,每3天进行一次细胞传代,取对数增长期的细胞用于实验研究。实验分为5组,空白对照组和ox-LDL组(75 mg/L、50 mg/L、25 mg/L、12.5 mg/L)。每组9个样,分3个小组,每个小组3个样,3个小组分别培养24 h、48 h和72 h后测定细胞内胆固醇的积累并用油红O染色法定性观察。应用统计学软件SPSS Statistics 17.0进行t检验分析,数据以均数±标准差表示,对胆固醇定量检测结果进行统计分析,当P<0.05时认为差异具有统计学意义。结果 与空白对照组比较,经过ox-LDL不同浓度和不同时间诱导后,总胆固醇含量(total cholesterol,TC)、游离胆固醇含量(free cholesterol,FC)及胆固醇酯与总胆固醇比值(the ratio of cholesterol ester and total cholesterol,CE/TC)均有一定程度的升高。尤以50 mg/L ox-LDL诱导48 h时[空白对照组：TC (98.21±2.85) mmol/L、FC (56.25±0.55)mmol/L、CE/TC 42.64±1.50; ox-LDL组：TC (146.7±3.59)mmol/L、FC (79.9±0.55) mmol/L、CE/TC 49.9±3.49]变化最明显。与空白对照组比较,ox-LDL组胞浆内有不同程度红色脂滴存在,且发现ox-LDL 50 mg/L作用48 h时,因含有过多脂滴而形成了红色聚集的脂团,而未加ox-LDL的空白对照组细胞内无明显脂滴颗粒。结论 ox-LDL不同诱导浓度和不同诱导时间对肝癌HepG2细胞内胆固醇(TC 、FC 、CE/TC)积累都有促进作用,而ox-LDL对肝癌HepG2细胞内胆固醇积累的影响最适浓度和时间为50 mg/L诱导48 h。     

虎杖大黄素对RA大鼠炎症和新生血管形成的影响

目的:通过足跖部注射牛Ⅱ型胶原和不完全氟氏佐剂乳化剂,建立类风湿性关节炎(rheumatoid arthritis,RA)的胶原诱导型关节炎(collagen induced arthritis,CIA)模型,用相应指标观察虎杖大黄素干预炎症和新生血管形成情况。方法:Wistar大鼠40只随机分为2组,正常组,模型组,模型组采用等量的牛Ⅱ型胶原和不完全氟氏佐剂乳化后在雄性Wistar大鼠足跖部皮内注射0.4 m L(含胶原400μg),14 d后同样方法于足跖部皮内注射0.1 m L加强,致炎20 d成模后,再将模型组分为模型、虎杖大黄素与醋酸地塞米松组,每组10只,此时虎杖大黄素组0.4 g·L-1虎杖大黄素0.8 mg·kg-1ig,醋酸地塞米松组用0.75 g·L-1醋酸地塞米松7.5 mg·kg-1ig,两药各自连用20 d,并用足跖厚度,足爪X射线,足爪大体图片,膝关节滑膜HE染色,ELISA检测大鼠血清中肿瘤坏死因子-α(TNF-α)含量,免疫组化检测膝关节滑膜TNF-α及CD34表达,观察成模大鼠的2个靶点变化。结果:与正常组比较,模型组类风湿性关节炎大鼠足跖厚度明显增加(P0.01),大鼠血清TNF-α含量明显升高(P0.01);给药后,与模型组比较,虎杖大黄素与醋酸地塞米松组明显降低大鼠足跖厚度,血清TNF-α含量(P0.05,P0.01);X射线结果显示,模型组大鼠足跖部出现不连续的低密度影,即为溶骨现象,且有明显的软组织肿胀阴影,而正常组、虎杖大黄素组、醋酸地塞米松组未见有不连续的低密度影,即未见溶骨现象,亦未见软组织肿胀阴影;HE染色显示,模型组大鼠膝关节滑膜可见有大量的炎症细胞浸润和大量的血管翳,而正常组未见炎症细胞浸润和血管翳,虎杖大黄素组和醋酸地塞米松组只见少量炎症细胞浸润和少量的血管翳;免疫组化结果显示,模型组膝关节滑膜中的CD34及TNF-α的表达明显增高,虎杖大黄素组和醋酸地塞米松组膝关节滑膜中的CD34及TNF-α的表达明显降低。结论:虎杖大黄素可通过影响炎症和新生血管形成两个靶点干预RA。     

基于肠道菌群探讨慢性阻塞性肺疾病肺肠同治的科学内涵

慢性阻塞性肺疾病(COPD)患者肺失宣降，肠腑气机郁滞，多伴有肠道功能障碍等症。中医学认为“肺与大肠相表里”,中医临床运用肺肠同治法治疗COPD取得显著疗效。大肠为“传导之官”,是脏腑气机升降出入的重要环节；肠道菌群参与人体营养、代谢功能、免疫调节等过程。肠道菌群结构及丰度影响COPD发生发展的病理过程，并通过胆汁酸、短链脂肪酸等代谢产物作用于远端器官，这与肺肠同病等中医理论相吻合。本文从肠道菌群理论的角度揭示了COPD之肺肠同病的病变本质，凸显中医学脏腑相关的理论内涵，使得中医肺肠同治法具有更为前沿的科学内涵，也为COPD等肺系疾病的临床辨治提供新的思路与方法。     

新疆红花挥发油GC-MS分析及药理作用的分子机制

目的:分析新疆红花挥发油化学成分及药理作用的分子机制。方法:采用水蒸气蒸馏(hydrodistillation,HD)法提取新疆红花中的挥发油,通过气相色谱-质谱(gas chromatography-mass spectrometer,GC-MS)联用仪鉴定其化学成分,采用峰面积归一化法测定其化学成分的相对含量。基于中药系统药理学数据库和分析平台(TCMSP)在线下载挥发油活性成分(相对含量1)的MOL2结构,建立小分子配体库,通过Swiss Target Prediction进行靶标预测,构建主要化学成分-靶标网络模型,筛选关键蛋白,基于admet SAR和Swiss ADME对CYP450亚酶活性进行预测。通过比较毒理基因组学数据库(comparative toxicogenomics database,CTD)筛选关键基因参与的疾病,构建关键基因-疾病网络模型。关键蛋白验证基于系统对接(Systems Dock)在线软件,将新疆红花挥发油部分化学成分与羧酸酯酶1(CES1),碳酸脱水酶1(CA1),碳酸脱水酶2(CA2)进行能量匹配。结果:通过质谱库及文献检索确定48个化合物,主要化学成分(7,9-二十二烷酮、石竹烯氧化物、二十七烷、二十六烷、六氢法呢基丙酮、二十九碳烷、二十五烷、二十四烷、二十三烷)占挥发油总量的32.787%,9个化学成分预测出135个靶标蛋白,CES1,羧酸酯酶3(CES3),CA1,CA2为关键靶标,主要在肿瘤、肝病、肺病等疾病中发挥作用。基于Systems Dock验证关键靶标蛋白,发现关键成分与重要靶点的结合活性较好。结论:该研究结果初步预测出新疆红花挥发油发挥药理作用的靶标蛋白,为其产品的开发和应用提供理论依据。