人肿瘤细胞TH2类细胞因子的逆转与NK抗性变化的研究

目的研究促使人肿瘤细胞中ＴＨ２类细胞因子表达向ＴＨ０型的逆转及逆转后的肿瘤细胞对ＮＫ抗性的变化。方法首先用ＭＴＴ方法对悬浮培养的肿瘤细胞株ＤＢ大淋巴细胞瘤、Ｋａｒｐａｓ淋巴瘤、Ｍｉｃｈａｅｌ淋巴瘤、Ｒａｊｉ、ＨＬ６０和Ｋ５６２进行了ＮＫ杀伤敏感性的筛选。选择ＮＫ不敏感的Ｋａｒｐａｓ淋巴瘤和ＨＬ６０，用ｒｈＩＦＮγ、ｒｈＩＬ－１２和抗ＩＬ－１０ＭｃＡｂ经不同组合对其进行由ＴＨ２类细胞因子表达向ＴＨ１类细胞因子表达的促逆转研究，并观察促逆转后的肿瘤细胞对ＮＫ抗性的变化。结果ＲＴ－ＰＣＲ结果表明，经上述不同细胞因子组合诱导后，Ｋａｒｐａｓ淋巴瘤细胞均从表达ＴＨ２类细胞因子为主向ＴＨ０型逆转，并且各组逆转后的肿瘤细胞对ＮＫ的抗性均有不同程度的减弱。结论ＴＨ１类细胞因子（如ＩＦＮγ）、ＴＨ２类细胞因子拮抗剂（如ＩＬ－１０单抗）和ＩＬ－１２不同程度地促进肿瘤细胞表达的细胞因子由ＴＨ２型向ＴＨ０／ＴＨ１型逆转。促逆转后可以改善肿瘤细胞对机体杀伤作用的敏感性，提高抗肿瘤免疫能力     

一种低成本、低本底的免疫细胞化学反应方法

为了探讨一种适合培养细胞的低本底、低成本免疫细胞化学方法 ,本研究将低浓度的 Triton X-10 0加入抗体稀释液和洗液中 ,观察了其对 ABC反应时的抗体和 ABC的使用浓度和反应效果的影响。结果证明 ,在抗体稀释液和洗液中加入 0 .1%Triton X-10 0可以增强细胞对抗体的通透性 ,在不减弱阳性信号的状况下使 -抗的使用浓度明显降低 ,使生物素化二抗和 ABC的使用浓度达到 1/ 10 0 0～ 1/ 40 0 0 ,并大大减弱染色本底。本研究结果提示 ,在这一稀释度明显低于目前试剂盒建议的使用浓度。在充分显示阳性信号的前提下 ,使抗体的使用浓度和量大幅度减少 ,从而实现了降低本底和实验成本的目的     

肿瘤坏死因子与肾小球系膜细胞的关系

目的研究肾小球系膜细胞的肿瘤坏死因子的自分泌功能,肿瘤坏死因子对肾小球系膜细胞作用的机制。方法利用体外培养的人和大鼠的肾小球系膜细胞,通过逆转录－多聚酶链反应、原位杂交和免疫组化方法,探讨它们之间的关系。结果肾小球系膜细胞既可产生肿瘤坏死因子,又有肿瘤坏死因子受体。结论肾小球系膜细胞是肿瘤坏死因子作用的靶细胞,肿瘤坏死因子通过旁分泌和自分泌两种途径作用于肾小球系膜细胞。     

缺氧对兔胸主动脉平滑肌细胞增殖的影响

目的: 观察缺氧对培养的兔胸主动脉平滑肌细胞增殖的影响及其可能的机制。方法: 采用析因实验设计, 测定在正常或缺氧环境下, 不同浓度的胎牛血清对培养的血管平滑肌细胞数量、[³H]-TdR掺入量、MTT比色以及细胞cGMP水平的影响; 透射电镜观察细胞超微结构。结果: 缺氧组平滑肌细胞的数量、[³H]-TdR掺入量以及MTT比色显著多于常氧组(P<0.01); 电镜下可见缺氧组较正常组细胞器发达, 可见大量分泌胞, 少量髓样变线粒体; 缺氧组平滑肌细胞内的cGMP浓度明显高于常氧组。结论: 缺氧可促进血管平滑肌细胞DNA合成, 促进细胞增殖, 可能与提高细胞内的cGMP水平有关。     

Novel OCTN2 mutations: No genotype–phenotype correlations: Early carnitine therapy prevents cardiomyopathy

Primary systemic carnitine deficiency or carnitine uptake defect (OMIM 212140) is a potentially lethal, autosomal recessive disorder characterized by progressive infantile‐onset cardiomyopathy, weakness, and recurrent hypoglycemic hypoketotic encephalopathy, which is highly responsive to L ‐carnitine therapy. Molecular analysis of the SLC22A5 (OCTN2) gene, encoding the high‐affinity carnitine transporter, was done in 11 affected individuals by direct nucleotide sequencing of polymerase chain reaction products from all 10 exons. Carnitine uptake (at Km of 5 μM) in cultured skin fibroblasts ranged from 1% to 20% of normal controls. Eleven mutations (delF23, N32S, and one 11‐bp duplication in exon 1; R169W in exon 3; a donor splice mutation [IVS3+1 G > A] in intron 3; frameshift mutations in exons 5 and 6; Y401X in exon 7; T440M, T468R and S470F in exon 8) are described. There was no correlation between residual uptake and severity of clinical presentation, suggesting that the wide phenotypic variability is likely related to exogenous stressors exacerbating carnitine deficiency. Most importantly, strict compliance with carnitine from birth appears to prevent the phenotype. © 2002 Wiley‐Liss, Inc.     

CD44+/CD24-细胞在乳腺癌组织及细胞系中的数量与分布

Objective To study the distribution and quantity of CD44VCD24- cells in breast cancer tissue and the cell lines,and as well as its correlation with the expression of various breast cancer markers and molecular subtyping of breast carcinoma.Methods The expression of CD44 / CD24,estrogen receptor,progesterone receptor,HER2,human estrogen-induced protein PS2,bcl-2 and nm23 in 60 cases of invasive ductal carcinoma of breast were studied by either single or double immunohistochemical staining.The co-expression of CD44 and CD24 in 3 breast cancer cell lines (MCF-7,MDA-MB-468,and MDA-MB- 231) was also examined.Results The quantity and distribution of CD44 + /CD24- cells varied greatly and no specific patterns were identified.The percentage of CD44 + /CD24- in breast cancer was 65%.The amount of CD44+/CD24- cells did not correlate with the age of patients,lymph node metastasis,tumor　 size,molecular subtypes and expression of various breast cancer markers in breast carcinoma.The proportion of CD44+/CD24- cells in MCF-7,MDA-MB-468,and MDA-MB-231 cell lines was < 1%,5% and > 80% ,respectively.Conclusions CD44+ /CD24- cells are demonstrated in certain breast cancer tissues and cell lines.However,there is no relationship obtained between the quantity or the distribution of these cells and the molecular subtyping or the clinicopathologic parameters in breast cancer.     

靶向血管内皮生长因子C短发夹式RNA对人乳腺癌MCF-7细胞生物学特性的影响

目的 研究重组质粒表达载体介导的短发夹式RNA(shRNA)对乳腺癌MCF-7细胞株中血管内皮生长因子C(VEGF-C)的表达及乳腺癌细胞增殖、侵袭能力的影响.方法 脂质体介导重组质粒pSIREN-VEGF-C转染乳腺癌MCF-7细胞株,嘌呤酶素筛选阳性克隆;荧光定量PCR及Western blot检测转染前后乳腺癌MCF-7细胞中VEGF-C基因的表达;MTT法及Transwell体外侵袭实验检测转染前后乳腺癌MCF-7细胞的增殖及侵袭能力.结果 转染重组质粒后乳腺癌MCF-7细胞中VEGF-C mRNA及蛋白表达均明显下调,抑制率分别为95%及100%(P<0.05);MTT法和 Transwell体外侵袭实验显示,与阴性质粒组和空白对照组比较,转染重组质粒后各时间段乳腺癌MCF-7细胞增殖均明显受抑制(P<0.05),同时穿膜的肿瘤细胞数也明显减少[(29.0±1.9)个与(59.0±2.1)个和(61.0±2.2)个相比,P<0.05].结论 表达VEGF-C shRNA的重组质粒载体pSIREN-VEGF-C在乳腺癌MCF-7细胞中能高效、特异地发挥靶基因沉默作用,并对乳腺癌细胞的增殖及侵袭能力有显著抑制作用.     

细胞周期蛋白E对乳腺癌细胞MCF-7生长及周期相关基因的影响

观察细胞周期蛋白（ｃｙｃｌｉｎ）Ｅ的表达对乳腺癌细胞ＭＣＦ－７生长及其他周期相关基因的影响。方法构建正义和反义ｃｙｃｌｉｎ Ｅ ｃＤＮＡ真核表达载体,并采用ｌｉｐｏｆｅｃｔ ＡＭＩＮＥ转染,将其导入ＭＣＦ－７细胞,获得稳定表达正义及反义ｃｙｃｌｉｎＥ的细胞系,经Ｓｏｕｔｈｅｒｎ和Ｗｅｓｔｅｒｎ ｂｌｏｔ检测有外源性片片段的插入及表达,并作细胞生长曲线、四甲偶氮唑盐（ＭＴＴ）法和流式细胞计数分析;用     

β-淀粉样蛋白对培养神经细胞的毒性作用及神经节苷脂的保护作用

向培养液中加入15mmol／L的β-AP1-40，48h后，发现原代培养的海马细胞内Ca2+的浓度明显增高，对照组为23．9±3．6（n=51）而β-AP组为36．5±15．8（n=30），两组比较P＜0．001，有非常显著性的差别。对照组的乳酸脱氢酶没有明显变化，而β－AP组在加β－AP1－4048h后乳酸脱氢酶明显增加，从52iu／L增加到105iu／L，实增加了101％。实验结果表明，β－AP1-40对培养的神经细胞有明显的毒性作用，但没有发现形态学的变化和对细胞的特异性。如在培养液中加β－AP1-40的同时再加25mg／ml的神经节苷脂（GAs）可明显减弱β-AP1-40引发的胞内Ca2+浓度和培养液中LDH浓度的升高。β-AP＋GAs组胞内Ca2+浓度为27.7±5.58，与β-AP组比较，有显著性差异（P＜0．01）。β-AP组海马细胞培养液中乳酸脱氢酶的浓度增高为101％，而β-AP-GAs组培养液中乳酸脱氢酶的浓度增高仅为67％。在NG108－15细胞上也获得了相同的结果。单唾液酸神经节苷脂虽有与GAs类似的作用，但较弱。这些实验结果指出，神经节苷脂和单唾液酸神经节苷脂均能拮抗β-AP1-40的毒性作用，从而对细胞可起到保护作用。     

动脉粥样斑块中内皮素和一氧化氮合成酶的表达及拮抗作用

目的为探讨动脉硬化斑块的发生机制,对内皮素（ＥＴ）和一氧化氮合成酶（ＮＯＳ）的参与和拮抗作用进行研究。方法用兔主动脉硬化模型和培养的正常兔主动脉平滑肌细胞（ＳＭＣ）进行ＥＴ和ＮＯＳ的原位杂交、反转录ＰＣＲ和ＮＯＳ细胞化学检测。结果粥样斑块中ＥＴｍＲＮＡ转录增多,ＮＯＳｍＲＮＡ转录减少;与正常主动脉相比,斑块中ＥＴ基因表达增加１．２倍,而ＮＯＳ基因表达降低２２．２％;细胞化学图像分析表明,ＥＴ多肽异常增多可抑制ＳＭＣ内ＮＯＳ蛋白合成;ＥＴ－Ａ型受体拮抗剂抑制ＥＴ的作用;从而防止细胞内ＮＯＳ蛋白减少。结论ＥＴ与ＮＯＳ的平衡失调即ＥＴ异常增加和／或ＮＯＳ明显减少,与动脉粥样硬化斑块的形成有一定的关系。