细胞外基质对血管平滑肌细胞桩蛋白和纽蛋白表达的影响

【目的】探讨细胞外基质（extracellular matrix,ECM）对体外培养的血管平滑肌细胞（smooth muscle cells,SMCs）黏着斑（focal adhesions,FAs）分子桩蛋白（paxillin）和纽蛋白（vinculin）表达的影响。【方法】将第4～6代大鼠主动脉SMCs分别种植在涂有纤维连接蛋白（fibronectin,FN）或层黏连蛋白（laminin,LN）的盖玻片上或种植在基质胶内进行培养。采用共聚焦免疫荧光技术检测paxillin和vinculin的表达,并通过FAs分子paxillin／F-aetin和vineulin／F-actin的双重荧光染色显示。【结果】种植在FN上的vinculin表达最低,LN次之,而在Matrigel胶中表达最高;在FN上vinculin在胞质分布较多,在FA＇s较少;而生长在LN基质上和基质胶中vincu1in较多定位在FAs,在胞质分布较少。Vinculin的荧光强度在FN、LN及基质胶中分别为（64．72±7．18）AU／μm2,（89．82±5．11）AU／μm2,（117．19土16．99）AU／μm2,依次增高,且组间比较有统计学意义（P〈0．05）。种植在FN上的paxillin最高,LN上次之,而Matrigel胶中表达最低;基质胶中paxillin主要分布于FAs,而FN上的除分布于FAs外,在胞浆的表达水平也较高。Paxillin的荧光强度在FN、LN及基质胶中分别为（129．87±10．22）AU／μm2、（86．59±9．90）AU／μm2、（56．32±7.54）AU／μm2,依次降低,且组间比较有统计学意义（P〈0．05）。【结论】不同的ECM成分对FAs分子的表达有影响：FN上调paxillin的表达,下调vinculin的表达;而LN和基质胶上调vinculin的表达,下调paxillin的表达。     

醛固酮诱导大鼠主动脉平滑肌细胞凋亡

目的 观察醛固酮在体内能否诱导主动脉平滑肌细胞凋亡.方法 将24只SD大鼠随机分为3组,每组8只:(1)空白溶剂设为对照组;(2)醛固酮组;(3)醛固酮+血管扩张剂组.渗透泵内分别注入醛固酮(1 μg/h)或空白溶剂,然后埋于大鼠背部皮下.肼苯哒嗪[25 mg/(kg·d)]溶于引用水,每日灌胃1次.8周后脱氧核苷酸末端转移介导的缺口末端标记法(TUNEL)检测凋亡的主动脉平滑肌细胞.结果 醛固酮组和醛固酮+血管扩张剂组大鼠主动脉TUNEL阳性的平滑肌细胞分别占(18.0±1.5)％和(16.5±2.0)％,与对照组(4.7±1.0)％比较,差异有统计学意义(P＜0,05);后两组之间差异无统计学意义(P＞0.05).结论 醛固酮在体内可以直接诱导主动脉平滑肌细胞凋亡.     

反油酸对人脐静脉平滑肌细胞活力的影响

<正>平滑肌细胞是血管壁中膜的主要细胞成分,是动脉粥样硬化(atherosclerosis,As)和血管成形术后再狭窄(restenosis after angioplasty,RAA)等病理过程形成和发展的重要部位,对血管壁的完整性和紧张性的调节也起重要作用,其异常增殖及形态学转变将导致动脉粥样硬化过程     

单核细胞趋化因子1和Fractalkine对平滑肌细胞增殖、趋化和组织因子表达的影响

目的观察趋化因子单核细胞趋化因子1和Fractalkine对血管平滑肌细胞组织因子表达及血管平滑肌细胞增殖和趋化的影响。方法在细胞水平,采用酶联免疫吸附法检测单核细胞趋化因子1、Fractalkine和单核细胞趋化因子1 Fractalkine对组织因子抗原表达的影响,噻唑蓝法比较单核细胞趋化因子1、Fractalkine和单核细胞趋化因子1 Fractalkine对血管平滑肌细胞增殖的作用,细胞趋化实验比较单核细胞趋化因子1、Fractalkine和单核细胞趋化因子1 Fractalkine对血管平滑肌细胞趋化的影响。结果单核细胞趋化因子1和Fractalkine可增加血管平滑肌细胞组织因子抗原的表达,单核细胞趋化因子1与Fractalkine共同作用后,组织因子抗原表达量较二者单独作用时明显降低。Fractalkine对血管平滑肌细胞有明显的促增殖作用,但单核细胞趋化因子1 Fractalkine和单核细胞趋化因子1均无明显促增殖作用。Fractalkine和单核细胞趋化因子1 Fractalkine对血管平滑肌细胞有明显的趋化作用,而单核细胞趋化因子1的趋化作用不够明显。结论单核细胞趋化因子1和Fractalkine在动脉粥样硬化过程中分别对血管平滑肌细胞组织因子的表达、增殖和趋化发挥了不同程度的作用。     

氧化型脂蛋白(a)对兔主动脉平滑肌细胞增殖的影响

为探讨脂蛋白（a）高度致动脉粥样硬化作用的可能机制，本文通过体外CU2 氧化法进行了低密度脂蛋白和脂蛋白（a）的氧化，并利用细胞计数及氚标胸腺密啶脱氧核苷掺入法，比较观察了天然和氧化的脂蛋白（a）及低密度脂蛋白对培养的兔主动脉平滑肌细胞增殖的影响。结果发现，在相同氧化时间内脂蛋白（a）对Cu2 的氧化敏感性较低密度脂蛋白低；氧化后的脂蛋白（a）和低密度脂蛋白均可明显促进平滑肌细胞增殖使DNA合成增加（P＜0．01），且其作用较相应的天然脂蛋白大（P＜0．05．P＜0．01）、此结果提示：脂蛋白（a）经氧化后促进平滑肌细胞增殖可能是其致动脉粥样硬化的机制之一。     

腺病毒载体介导的胞嘧啶脱氨酶/单纯疱疹病毒-1-胸苷激酶双自杀基因对血管平滑肌细胞增殖的影响

目的：观察构建的含胞嘧啶脱氨酶／单纯疱疹病毒－1－胸苷激酶（CD／TK）双自杀基因的重组腺病毒对血管平滑肌细胞（VSMCs）增殖的影响。方法：将含CD／TK单、双自杀基因的重组腺病毒感染培养至3－5代的大鼠VSMCs。荧光显微镜观察报告基因绿色荧光蛋白的数量确定感染效率。用MTT法检测前体药物对各转基因组细胞增殖的抑制作用。结果：单、双自杀基因组腺病毒均可100％感染VSMCs。当感染复数（M．0．I）为10时，双自杀基因组靶细胞的存活率仅10％，明显低于腺病毒（Ad）－TK（43％）和Ad-CD(64%)单基因组（P＜0．05）。当M．O．I≤20时双自杀基因能够对细胞产生最大（90％）杀伤而CD、TK单基因组和单基因共转染组则不能，而且双基因组所需前体药物的浓度（无环鸟苷0．1μg/ml,5－氟胞嘧啶10μg/ml)低于单基因组（无环鸟苷0．5μg/ml，5-氟胞嘧啶50μg/ml）。双基因组的TK或CD基因单独作用时对细胞的抑制作用接近或低于相应的单基因组。结论：双自杀基因共表达腺病毒载体对VSMCs的抑制作用、安全性及可调控性均优于单基因。     

氧化型低密度脂蛋白对血管平滑肌细胞小凹蛋白1表达的抑制作用及其与信号调节激酶的关系

目的 观察氧化型低密度脂蛋白对血管平滑肌细胞小凹蛋白1表达的抑制作用及其与细胞外信号调节激酶活性的关系.方法 50 mg/L 氧化型低密度脂蛋白处理血管平滑肌细胞不同时间,或同时加入25 μmol/L细胞外信号调节激酶信号通路的特异性阻断剂,Western 印迹检测血管平滑肌细胞小凹蛋白1和细胞外信号调节激酶的变化.结果 50 mg/L氧化型低密度脂蛋白作用细胞24 h后小凹蛋白1的表达明显下降,细胞外信号调节激酶磷酸化活性显著增高,阻断氧化型低密度脂蛋白对细胞外信号调节激酶的激活可显著促进小凹蛋白1的表达.结论 血管平滑肌细胞源性泡沫细胞小凹蛋白1的表达下调与氧化型低密度脂蛋白激活细胞外信号调节激酶及其介导的信号传导密切相关.     

C-sis反义寡脱氧核苷酸抑制兔主动脉平滑肌细胞增殖的时效关系

为观察局部处理C-sis反义寡脱氧核苷酸对平滑肌细胞增殖及新生内膜肥厚的抑制作用、球囊导管损伤60只新西兰白兔胸主动脉后。经导管局部处理每只兔1mg（2mL）C-sis反义或正义寡脱氧核苷酸或2mL生理盐水,于损伤后第3、7、14天和第28天，用免疫组织化学方法结合图象分析，评价损伤动脉内膜平滑肌细胞增殖及新生内膜改变。结果发现．C-sis反义寡脱氧核苷酸明显抑制内膜平滑肌细胞增殖，最高抑制作用出现于损伤后第3天；抑制百分率达69．8％，第7、14天和第28天的抑制率依次降低，分别为59％、51.9％和47.8％；而新生内膜面积的抑制百分率分别是48．9％、77．8％、72．6％和70．8％，与生理盐水处理组相比，平滑肌细胞数及新生内膜面积均有明显降低。研究结果表明，局部处理C-sis反义寡脱氧核苷酸，通过反义途径，可明显抑制球囊损伤主动脉内膜平滑肌细胞增殖，其抑制作用随时间而降低，同时，对新生内膜面积肥厚的最大抑制出现于第7天，随后降低，提示局部处理C-sis反义寡脱氧核苷醚，有可能降低再狭窄的发生。     

Phenotype-specific inhibition of the vascular smooth muscle cell cycle by high glucose treatment

Aims/hypothesis Diabetes accelerates the development of atherosclerosis, which critically involves the proliferation of vascular smooth muscle cells (SMCs). However, how high glucose treatment regulates SMC proliferation is controversial. Considering the established SMC heterogeneity, we hypothesised that glucose treatment may have distinct effects on proliferation of the various phenotypic SMCs. Materials and methods We tested this possibility using cloned spindle-shaped and epithelioid SMCs and laser scanning cytometry. Results Our results showed that glucose treatment significantly inhibited the serum-independent proliferation of epithelioid SMCs, but had no effect on the proliferation of spindle-shaped cells either with or without serum stimulation. Furthermore, glucose treatment inhibited DNA synthesis, as detected by bromodeoxyuridine (BrdU) incorporation, and increased the production of reactive oxygen species in epithelioid SMCs. The inhibition of BrdU incorporation by glucose treatment was mimicked by glucosamine and phorbol 2,13-dibutyrate, a protein kinase C (PKC) activator, and reversed by azaserine, an inhibitor of the hexosamine pathway. In addition, the inhibitory effects of glucose treatment were blocked by GF 109203X (a PKC inhibitor) and PD98058 (a MAPK/ERK kinase, MEK inhibitor), and by knockdown of MEK1 by small interfering RNA (siRNA). The addition of either GF 109203X or PD98058 also reduced the phosphorylation of MAP kinase induced by glucose treatment. Conclusions/interpretation Glucose treatment inhibits the proliferation of epithelioid, but not spindle-shaped, vascular SMCs through the activation of PKC and the MAP kinase pathway, suggesting that the effects of hyperglycaemia on vascular disease depend on the phenotype of SMCs involved.     

Quality of bronchial biopsies for morphology study and cell sampling: A comparison of asthmatic and healthy subjects

BACKGROUND:

Bronchial biopsies are widely used for histopathological, primary cell culture and genetic studies, but very few reports have evaluated their quality.

OBJECTIVES AND METHODS:

The present project evaluated the quality (using a scoring system) and the general morphology of a pool of six bronchial biopsy specimens taken from three different sampling sites (the lobar, segmental and subsegmental carinae) in 27 subjects (13 asthmatic subjects and 14 healthy controls). The present study also assessed quantitative measurements of structural changes related to asthma.

RESULTS:

In total, 94.4% of the biopsy attempts had enough tissue to be processed. From these, 61.7% were scored with a good to excellent quality, while 76.5% presented smooth muscle bundles and 40.5% had an intact epithelium wall. The data also confirmed the structural changes observed in asthma, such as increased apparent thickening of the basement membrane, reduced amounts of smooth muscle for healthy controls and decreased percentage of intact epithelium for asthmatic subjects.

CONCLUSION:

A pool of six bronchial biopsy specimens can provide tissue of excellent quality in both asthmatic and healthy subjects and, consequently, a valuable sample for morphological analysis of mucosal structures.