G蛋白偶联受体寡聚化检测技术——共振能量转移技术和蛋白质片段互补技术

蛋白质-蛋白质相互作用(protein-protein interactions,PPIs)在细胞内信号途径的分子机制中具有重要作用,文章叙述了活细胞中以非侵入性荧光和生物发光为基础检测特异性PPIs的方法如FRET、BRET、BiFC和BiLC,上述技术广泛应用于G蛋白偶联受体(G protein-coupled receptors,GPCRs)寡聚化的研究,单独或联合应用这些新技术是研究两个蛋白或多个蛋白PPIs的最佳方法,文章描述了上述生物技术的最新进展及其优缺点,着重阐述在PPIs方面的应用。     

pRluc-hKOR-pcDNA3.1 真核重组质粒的构建及在HEK293细胞中的表达

目的： 构建与海肾荧光素酶(renilla luciferase,Rluc)融合的人κ型阿片受体（kappa opioid receptor, KOR）的真核表达载体,用于生物发光共振能量转移法检测人KOR与其它受体间的相互作用。方法: 以质粒pcDNA3.1-hKOR为模板,PCR方法扩增人KOR。扩增的人KOR用NotⅠ和XhoⅠ双酶切,同时用这2种酶双酶切质粒pRluc-pcDNA3.1。然后将这2种酶切产物按常规方法连接、转化大肠杆菌Top10。挑取菌落培养,提取质粒,然后进行酶切鉴定,最后进行测序。将测序正确的重组载体用脂质体法转染人胚胎肾（human embryonic kidney 293,HEK293) 细胞,免疫荧光染色,共聚焦显微镜观察。结果: 扩增出了1条约1.2 kb的片段,与预期的人KOR大小相符,质粒酶切结果显示重组质粒 pRluc-hKOR-pcDNA3.1被切成2条片段,其中1条为pRluc-pcDNA3.1载体大小,另1条为目的片段大小。经测序鉴定,序列与GenBank (NM_000912)中的序列高度同源。共聚焦显微镜观察显示,阿片受体主要表达在细胞膜上。结论: 构建成功了pRluc-hKOR-pcDNA3.1重组真核表达载体,此表达载体可用于检测人KOR与其它受体之间的相互作用。     

综合医院医务人员职业暴露的监测分析

职业暴露是指医护人员在从事诊疗、护理工作时，被病原微生物污染皮肤或黏膜，或被污染的针头、玻璃片等锐器刺破皮肤而导致感染的可能性。调查医护人员职业暴露的危险因素和环节，对建立健全职业暴露规范化管理提供预防措施的依据和降低医务人员职业暴露风险有重要意义。     

包被酶和偶联抗体脂质体的制备

用磷脂酰胆碱、神经节苷酯、胆固醇以４５∶１０∶４５的克分比浓度制备出大的单层脂质体，在其水相溶液中分别包被０．５，１，２，４ｍｇ的碱性磷酸酶（ＡＫＰ），经或不经ＴｒｉｔｏｎＸ－１００处理后，与ＡＫＰ的底物作用，于４００ｎｍ处测ＯＤ值。结果显示，当ＡＫＰ为１ｍｇ／ｍｌ时，效果最理想（０．７８４±０．０５６和０．１７５±０．０２７）。该脂质体充入氮气后，于４℃中可保存３个月。用过碘酸钠法分别偶联５，１０，１５ｍｇ／ｍｌ的抗ＡＦＰ于脂质体上，发现随着抗ＡＦＰ浓度的增加，偶联的抗ＡＦＰ的比例升高，而结合抗ＡＦＰ的百分比却有下降趋势。     

726名住院病人医院感染横断面调查

我院医院感染监测工作 ,一直采用连续发病率调查 ,而横断面调查不同于发病率调查 ,它是利用普查或抽样调查的方法收集特定时间内医院感染状态的病例资料[1 ] 。因此 ,现患率是准确的 ,而且反映了医院感染及其与影响因素的关系。该调查花费时间短 ,节省人力物力。现患率一般高于发生率 ,监测结果可能较连续性调查可靠[2 ] 。1　材料与方法1 .1　调查方法与对象　采用横断面调查方法。按每 40张床位配备 1名调查人员 ,调查人员由医院感染科专职人员和各病区院感小组医师组成。经过三天的统一培训 ,分为 5组 ,每组调查 4～ 5个病区。调查人员对…     

耐万古霉素肠球菌的目标性监测与分析

目的 了解临床耐万古霉素肠球菌的分离和耐药性,探索耐万古霉素肠球菌感染病例的监控措施.方法 对2010年医院临床分离的病原菌进行目标性监测,统计耐万古霉素肠球菌的株数以及耐药性,并对临床耐万古霉素肠球菌感染病例实施监控.结果 共分离出肠球菌属582株,其中耐万古霉素肠球菌占2.20％,对抗菌药物耐药率较高;全院未发生耐万古霉素肠球菌的暴发和流行.结论 耐万古霉素肠球菌分离株数较多,耐药率较高,应该加强临床合理使用抗菌药物的管理,对耐万古霉素肠球菌感染病例实施监控,预防和减少多药耐药菌的产生,控制医院感染.     

皖南地区1009例不良孕产史患者的细胞遗传学分析

目的 探讨染色体异常与不良孕产史之间的关系.方法 对1009例有不良孕产史的夫妇进行外周血淋巴细胞培养、染色体G显带技术进行核型分析.结果 共检出染色体异常核型109例,异常率10.80％.其中性染色体数目异常1例,占异常率0.92％;常染色体结构异常26例,占异常率23.85％;染色体多态性变异82例,占异常率75.23％.结论 染色体畸变是导致不良孕产史的重要原因之一,而染色体多态性与不良孕产史之间也存在着相关性,因此对不良孕产史患者进行染色体检查是必要的.     

参附总多糖对慢性心力衰竭模型大鼠抗氧化作用的实验研究

目的探讨参附总多糖对慢性心力衰竭模型大鼠的抗氧化作用。方法腹主动脉结扎法复制慢性心力衰竭大鼠模型,随机分成参附总多糖高、中、低剂量组,并设模型组和假手术组作为对照,共5组,每组10只。按试剂盒说明书方法检测慢性心力衰竭模型大鼠以参附总多糖治疗后血浆和心肌组织中的超氧化歧化酶（SOD）和丙二醛（MDA）的含量。结果与对照组比较,模型组大鼠高剂量组的SOD值明显降低,MDA值明显升高,均具有极显著的意义（P〈0．01）。与模型组比较,参附总多糖能明显升高SOD值,降低MDA值,差异有统计学意义,而且呈现一定的量效关系。结论参附总多糖对慢性心力衰竭大鼠具有较好的抗氧化,清除氧自由基的作用。     

表面活性剂协同微波提取胡柚皮总黄酮的工艺研究

目的优选表面活性剂增效微波提取胡柚皮中总黄酮的最佳工艺。方法对7种表面活性剂强化提取胡柚总黄酮的效果进行了比较,筛选出对该提取过程具有明显增溶效果的表面活性剂。以总黄酮含量为指标,采用正交试验确定最佳提取工艺。结果胡柚皮中的总黄酮的最优提取条件以质量百分数2%的月桂醇磺基琥珀酸单酯二钠盐(AK-201)为提取剂,微波频率为160 W,提取2次,每次1 min,提取2次,料液比为1∶40,提取率为4.35%。该工艺比仅用微波法提取胡柚皮中黄酮的提取率增加了6.36%。结论该提取工艺简单,方法快速、简便,能降低成本,同时提高提取率,可用于胡柚皮中总黄酮的提取。