川芎嗪抑制内毒素致血管内皮细胞纤溶酶原激活物抑制剂的表达

纤溶酶原激活物抑制剂1（PAI-1）是一种重要促凝血因子。内毒素脂多糖（LPS）通过刺激血管内皮细胞（EC）分泌PAI-1且而导致血栓形成。采用ELISA的Northern印迹方法观察中药川芎嗪对EC及LPS致EC表达PAI-1的影响。结果表明川芎嗪不仅抑制LPS致EC PAI-1的分泌和mRNA表达,而且抑制 EC PAI-1基础水平mRNA表达。川芎嗪对LPS致 EC PAI-1分泌的抑制呈剂量效应关系。为川芎嗪抗感染性休克和治疗心血管疾病提供了重要的理论和实验依据。     

干细胞/组细胞与动脉粥样硬化研究进展

动脉粥样硬化及其相关并发症是人类死亡的主要原因。与其他危险因素相比,越来越多学者认为衰老是动脉粥样硬化的主要危险因素。60岁以上,年龄将支配风险预测中所有其他风险因素。然而老龄化风险的具体机制尚不清楚。近年来,干细胞/祖细胞与疾病的相关性研究突飞猛进,血管祖细胞与血管性疾病的关系日益受到人们的关注。1997年Asahara首次报道了在循环血液中有争议的内皮祖细胞的分离。这些细胞能够在体外分化为成熟的内皮细胞,并结合于血管生成的活性位点。这一发现开创了血管生物学的新时代,也使研究者们对动脉粥样硬化及血栓栓塞等并发症开始重新认识。提出了动脉粥样硬化风险的一个新的概念:在动脉粥样硬化的发展过程中,存在修复损伤内皮的内皮祖细胞耗竭,即内皮祖细胞依赖性的动脉修复缺乏。平滑肌祖细胞则是斑块内平滑肌源性泡沫细胞的重要来源之一,参与了斑块的形成。本文重点阐述动脉粥样硬化发生发展中干细胞/组细胞的作用。尤其是内皮祖细胞、平滑肌祖细胞与动脉粥样硬化的关系及血管祖细胞的分化等问题。     

壳聚糖和透明质酸纳米聚电解质复合物吸附动脉粥样硬化特异抗体CD47的合成及体内外靶向实验

目的研究壳聚糖和透明质酸聚电解质复合物(PEC)纳米颗粒在生理盐水中的稳定浓度和物理化学参数对靶向抗体CD47有效吸附的影响以及合成的纳米载体对于血管内皮细胞的体外靶向性。方法壳聚糖(CS)作为聚阳离子与透明质酸(HA)(作为聚阴离子)发生电荷中和,合成壳聚糖和透明质酸聚电解质复合物纳米粒子。一模型抗体——动脉粥样硬化靶向抗体CD47在水或PBS溶液中,与纳米颗粒作用4 h后,定量吸附在CS-HA纳米颗粒表面。将合成的纳米载体体内外与血管内皮细胞及动脉粥样斑块相互作用,研究其靶向吸附作用。结果络合过程和胶体的物理化学性质受到外部因素的影响,如电荷混合比和聚合物浓度等参数。通过上述原理合成了非化学计量的CS-HA纳米胶体,在水或PBS(pH 7.4)溶液中保持稳定1个多月。扫描电镜检测其形貌特征。CS-HA/CD47抗体纳米颗粒平均粒径在375～620 nm之间,Zeta电位为正。CD47抗体靶向的纳米载体可在体外有效吸附到血管内皮细胞及动脉粥样斑块的表面。结论成功合成了CS-HA/CD47抗体纳米颗粒,该靶向纳米载体在体外可有效吸附到血管内皮细胞株及动脉粥样斑块的表面,是对动脉粥样硬化靶向给药具有应用前景的有效纳米载体。     

TGF-β1-induced LPP expression dependant on Rho kinase during differentiation and migration of bone marrow-derived smooth muscle progenitor cells

Lipoma preferred partner(LPP) has been identified as a protein which is highly selective for smooth muscle progenitor cells(SMPCs) and regulates differentiation and migration of SMPCs,but mechanisms of LPP expression are not elucidated clearly.The aim of the present study was to discuss the mechanisms by which LPP expression is regulated in the differentiation and migration of SMPCs induced by TGF-β1.It was found that TGF-β1 could significantly increase the expression of LPP,smooth muscle α-actin,smooth muscle myosin heavy chain(SM-MHC),and smoothelin in SMPCs.Moreover,inactivation of Rho kinase(ROK) with ROK inhibitors significantly inhibited LPP mRNA expression in TGF-β1-treated SMPCs and mouse aortic smooth muscle cells(MAoSMCs).At the same time,LPP silencing with short interfering RNA significantly decreased SMPCs migration.In conclusion,LPP appears to be a ROK-dependant SMPCs differentiation marker that plays a role in regulating SMPCs migration.     

利用Psm22α-EGFP-1质粒重组体从小鼠间充质干细胞中分选平滑肌祖细胞

目的 为了从骨髓间充质干细胞中分离纯化出平滑肌祖细胞,探讨骨髓来源的平滑肌祖细胞(SMPC)向平滑肌方向分化的机制和特点.方法 构建了含有sm22α启动子序列和增强型绿色荧光蛋白(EGFP)编码序列的质粒重组体后用脂质体转染的方法,将Psm22α-EGFP-1重组体转入体外原代培养一周的小鼠间充质干细胞中.在转染后的3、5、7、10 d分别观察平滑肌特异性蛋白sm22α启动子控制下绿色荧光蛋白表达量的变化和转入重组体后间充质细胞形态的变化,用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)法观测转染后的骨髓间充质干细胞中myocardin mRNA表达水平的变化,并以免疫荧光法检测转染后第5天骨髓间充质干细胞CD34的表达.结果 转入Psm22α-EGFP-1重组体后的第3天,在荧光显微镜下观察到有绿色荧光蛋白表达的细胞.此后随着时间的推移,表达绿色荧光蛋白的细胞数目持续增加,在第7天时达到高峰,以后逐渐减弱.在不同时间点的绿色荧光蛋白阳性细胞百分率分别为:3 d:7%±0.13%,5 d:10%±0.32%,7 d:20%±0.26%,10 d:12%±0.18%,t=3.45,P＜0.05.在相应的时间点的转染后的骨髓间充质干细胞,myocardin mRNA表达变化的趋势与绿色荧光表达的变化趋势大致相符.阳性对照组的脂质体的转染效率每个组均控制在70%±1.5%(P＞0.05).在激光共聚焦显微镜下观察可见,发绿色荧光的细胞形态呈多态性,动态观察发现绿色荧光蛋白的分布趋势是从胞核逐步分布至胞质.免疫荧光显示在转染后第5天的细胞中CD34的阳性率为5.2%±0.21%(P＞0.05).结论 在小鼠的骨髓间充质干细胞中存在着具有向平滑肌细胞方向分化潜能的祖细胞,即所谓的平滑肌祖细胞.利用Psm22α-EGFP-1质粒重组体可以从小鼠间充质干细胞中分选出平滑肌祖细胞.     

The Mechanism of Resistance of Pseudomonas Aeruginosa to β—lactam Antibiotics and Clinical Significance

Summary: To study the resistant mechanism and clinical significance of pseudomonas aeruginosato β-lactam antibiotics, the outer membrane permeability rate of 30 P. aeruginosa strains to 5 β-lactam antibiotics was measured and their production of β-lactamase and the β-lactamase genes theycarried detected. Furthermore, the relationship between the permeability, β-lactamase and theclinical effects of β-lactam antibiotics was observed. By using 14C-penicillin and liquid-scintillantisotope assay, the affinity of penicillin binding proteins (PBPs) was measured and their roles inthe resistant mechanism studied. It was revealed that the permeability rate was higher in sensitivestrains than in resistant ones (P＜0. 05). All strains harbored 1-4 β-lactamase genes and producedβ-lactamase. Higher permeability rate and higher degree of stability to β-lactamase indicated betterclinical therapeutic effects. The affinity of PBPs changed little without regard to the permeabilityand β-lactamase. These results suggested that the permeability of outer membrane and β-lacta-mase, but not PBPs, played important roles in the resistant mechanism of P. aeruginosa to β-lac-tam antibiotics and affected the clinical therapeutic effectiveness of some patients.     

天然和氧化极低密度脂蛋白对人脐静脉内皮细胞VCAM-1表达的影响

目的 探讨天然和氧化极低密度脂蛋白(n-VLDL，ox-VLDL)对培养的人脐静脉内皮细胞(HUVEC)表达血管细胞粘附分子1(VCAM-1)的影响。方法 将n-VLDL和ox-VLDL作用于培养的HUVEC，用细胞酶联免疫吸附试验(cell ELISA)和单核细胞粘附试验检测VCAM-1蛋白在HUVEC的表达，用原位分子杂交检测VCAM-1 mRNA的表达。结果 正常培养的HUVEC表达VCAM-1，n-VLDL和ox-VLDL促进HUVEC表达VCAM-1，尤以ox-VLDL作用更强。单核细胞粘附试验显示，n-VLDL和ox-VLDL促进单核细胞向HUVEC粘附。结论 天然和氧化极低密度脂蛋白可能通过增强血管内皮细胞表达VCAM-1而促进血液单核细胞粘附于血管壁，从而在动脉粥样硬化的早期病变中起重要作用。     

川芎嗪 抑制内毒素致血管内皮细胞纤溶酶原激活性抑制剂？…

纤溶酶原激活性抑制剂１是一种重要促凝血因子。内毒 脂多糖通过激血管内皮细胞分泌ＰＡＩ－１而导致力图血栓形成。采用ＥＬＩＳＡ的Ｎｏｒｔｈｅｒｎ印迹观察中药川芎嗪对ＥＣ及ＬＰＳ致ＥＣ表达ＰＡＩ－１的影响。     

体外培养中川芎嗪对大鼠血管平滑肌细胞血管细胞粘附分子-1表达的影响

目的　观察川芎嗪对血管平滑肌细胞 (VSMC)表达血管细胞粘附分子 1(VCAM 1)的影响。方法　在建立血管紧张素Ⅱ (AngⅡ )诱导的VSMC表达粘附分子模型的基础上 ,将培养的细胞分为 3组 :正常对照组、AngⅡ刺激组、川芎嗪治疗组。分别在 6、 12、 2 4h 3个时段 ,利用免疫细胞化学技术和原位杂交技术检测各组细胞中VCAM 1的蛋白表达及mRNA转录水平。结果　①各时段正常对照组即有VCAM 1的基础表达 ;②与正常对照组比较 ,AngⅡ能够明显诱导VCAM 1的表达 ,而且其诱导作用在 6h即已出现 (P <0 0 5 ) ,12h表达增强 (P <0 0 1) ,2 4h有所回降 (P <0 0 5 ) ;③川芎嗪在各个时段均能抑制VCAM 1蛋白和mRNA的转录水平 (P <0 0 5 )。结论　AngⅡ能够明显诱导VSMC中VCAM 1的表达 ,而川芎嗪能够通过抑制VSMC中VCAM 1的表达从而延缓早期动脉粥样硬化的病变进展     

myocardin基因沉默在PDGF-BB诱导小鼠骨髓间充质干细胞向平滑肌样细胞分化中的作用

目的 构建myocardin特异性siRNA真核表达载体,体外观察其对myocardin基因的沉默效应及对小鼠骨髓间充质干细胞(MSC)向平滑肌样细胞分化过程中的影响.方法 培养小鼠骨髓问充质干细胞并利用血小板源生长因子(PDGF-BB,50 mg/L)联合高浓度胎牛血清(20%FBS)诱导其向平滑肌样细胞分化;构建含U6启动子和myocardin特异短发卡RNA(shRNA)编码序列的质粒载体pGen-myo-shRNA,以含非特异性shRNA编码序列的质粒载体pGenesil-Con(pCon)为阴性对照,分别转染诱导培养后第6天的小鼠MSC,48 h后用RT-PCR技术检测细胞内myocardin在mRNA水平的表达;同时用免疫组织化学方法 检测平滑肌肌球蛋白重链(sM myosin heavy chain,SM-MHC)的表达来鉴定平滑肌样细胞的分化.结果 成功构建myocardin特异性siRNA真核表达载体,利用其沉默myocardin基因后,干扰组相比空白对照组myocardin mRNA表达下调42.86%,差异有统计学意义(P相似文献