S100B、AQP4和CX43表达紊乱对糖尿病并发抑郁症大鼠海马血脑屏障功能的影响

目的探讨S100B、AQP4和CX43表达紊乱对糖尿病并发抑郁症大鼠海马血脑屏障功能的影响。方法将大鼠分为糖尿病组[高脂乳灌胃2周+尾静脉注射链脲佐菌素(STZ,38 mg/kg)]、抑郁症组(慢性不可预知性应激28 d)、糖尿病并发抑郁症组(联合以上两种方法建立)、对照组。造模结束后,旷场实验和Morris水迷宫实验观察大鼠行为学,ELISA检测血清S100B含量,免疫组化法检测海马血脑屏障AQP4和CX43的表达。结果与对照组比较,糖尿病组和抑郁症组大鼠自主活动次数和空间探索时间显著减少,逃避潜伏期延长(P0.05,P0.01);血清S100B含量明显增多(P0.01);海马血脑屏障功能性蛋白AQP4、CX43积分吸光度明显减少(P0.01)。与糖尿病组比较,糖尿病并发抑郁症组大鼠自主活动次数和空间探索时间减少,逃避潜伏期延长(P0.05,P0.01);血清S100B含量明显增多(P0.05);海马血脑屏障功能性蛋白AQP4、CX43积分吸光度明显减少(P0.05,P0.01)。结论 S100B、AQP4和CX43表达紊乱所致海马血脑屏障功能障碍可能是糖尿病并发抑郁症发生机制之一。     

双丹明目胶囊对糖尿病视网膜病变大鼠视网膜Ras-Raf-1-MEK-ERK通路的调控作用

目的观察双丹明目胶囊对糖尿病视网膜病变(diabetic retinopathy,DR)大鼠视网膜组织Ras-Raf-1-MEK-ERK通路的调控作用,探讨其可能的作用机制。方法取60只SD大鼠首先随机分为2组,即正常组(A组,10只)和糖尿病组(50只),将50只糖尿病组大鼠经一次性尾静脉注射STZ(50 mg/kg)诱导糖尿病模型,通过眼底荧光血管造影确诊DR模型后,选取其中45只大鼠再随机分为模型组(B组)、阳性药物组(C组)、双丹明目胶囊高剂量组(D组)、双丹明目胶囊中剂量组(E组)、双丹明目胶囊低剂量组(F组),每组9只。所有大鼠均干预30 d,末次给药后,检测所有大鼠空腹血糖值,Western-blot法和RT-PCR法分别检测大鼠视网膜Ras、Raf-1、MEK、ERK蛋白和基因的表达。结果与A组比较,B组大鼠血糖显著升高,视网膜Ras、Raf-1、MEK、ERK蛋白和基因表达均显著上升(P0.01);双丹明目胶囊干预后,与B组比较,D组大鼠血糖值下降,视网膜Ras、Raf-1、MEK、ERK蛋白和基因表达均降低(P0.05或P0.01);同时,E组也能使视网膜Ras、Raf-1、ERK蛋白表达降低、Raf-1、ERK基因表达降低(P0.05)。结论双丹明目胶囊能通过调控Ras-Raf-1-MEK-ERK通路而发挥治疗DR的作用。     

左归降糖解郁方对糖尿病并发抑郁症海马NVU神经元的调控作用及其机制

目的探讨糖尿病并发抑郁症(DD)状态下谷氨酸(Glu)失衡对海马神经血管单元(neurovascular unit,NVU)中神经元GluR2、Beclin-1蛋白表达的影响,及左归降糖解郁方对其干预作用。方法原代分离、纯化和培养SD大鼠海马神经元、星形胶质细胞及脑微血管内皮细胞,构建海马NVU体外共培养体系,采用免疫细胞化学染色法进行细胞鉴定;采用高糖(150 mmol/L)联合皮质酮(200μmol/L)干预构建海马NVU细胞模型;将培养的细胞随机分组,未造模细胞分为正常组、空白血清对照组,造模细胞分为模型组、左归降糖解郁方(32. 82 g/kg)含药血清组和阳性药(氟西汀0. 18 g/kg+二甲双胍1. 8 mg/kg)含药血清组,除正常组与模型组给予等量培养液,其余组给予相应体积分数10%的含药血清或空白血清;采用酶联免疫吸附法检测各组海马NVU神经元培养液上清中Glu含量;采用免疫荧光染色与高内涵细胞成像分析技术(HCA)检测各组海马神经元内GluR2、Beclin-1蛋白表达情况;采用Tunel染色检测各组海马神经元凋亡情况。结果与正常组及空白血清对照组比较,模型组海马NVU培养液上清中Glu含量显著升高(P 0. 01),GluR2表达明显减少(P 0. 01),Beclin-1表达明显增加(P 0. 01),细胞凋亡明显增多;与模型组比较,阳性药含药血清组与左归降糖解郁方含药血清组Glu含量显著降低(P 0. 01),GluR2表达上调(P 0. 01),Beclin-1表达下调(P 0. 01或P 0. 05),细胞凋亡显著减少。结论左归降糖解郁方对海马NVU细胞模型中神经元GluR2、Beclin-1蛋白表达具有明显的调控作用,该作用可能与改善谷氨酸失衡有关,这可能是其抑制细胞自噬继而抗DD海马神经元凋亡的重要机制。     

基于网络药理学及实验验证探究妇科断红饮胶囊治疗功能失调性子宫出血的作用机制＊

目的 基于网络药理学及实验验证探讨妇科断红饮胶囊治疗功能失调性子宫出血（DUB）的作用机制。方法 借助TCMSP数据库、相关文献检索收集妇科断红饮胶囊潜在活性成分及其药物靶点，通过Gene Cards和VENNY 2.1.0筛选疾病靶点。借助STRING数据库构建基于药物与疾病共同靶点的蛋白质-蛋白相互作用（Protein-protein interaction，PPI）网络，利用DAVID数据库对共同靶标进行基因本体论（Gene ontology，GO）功能和基因组百科全书（Kyoto encyclopedia of genes and genomes，KEGG）通路富集分析，采用Cytoscape 3.6.1构建“活性成分-核心靶点-重要通路”网络。体内复制大鼠DUB模型，妇科断红饮胶囊干预后，检测各组大鼠子宫出血量，RT-qPCR检测血管内皮生长因子（VEGFA）、磷脂酰肌醇3-激酶（PI3K）、白细胞介素（IL6）的水平，Western blot检测蛋白激酶B（AKT）、PI3K、缺氧诱导因子1（HIF-1）的水平，以初步验证网络药理学预测结果。结果 网络药理学分析显示，妇科断红饮胶囊可能通过槲皮素、花生四烯酸、木犀草素等活性成分作用于AKT1、VEGFA、IL6等关键靶点。通过HIF-1、PI3K/Akt、核因子κB（NF-κB）等信号通路，达到止血作用。体内实验验证，妇科断红饮胶囊可改善出血症状，上调PI3K、IL6 mRNA表达和AKT、PI3K、HIF-1蛋白表达，下调VEGFA mRNA表达。结论 妇科断红饮胶囊治疗DUB具有“多成分-多靶点-多通路”的作用特点，为后续的实验研究提供了重要数据信息。     

从肥胖的病因病机探讨肥胖病从虚论治的机理

肥胖是由多种原因引起的体内脂肪堆积过多,体重异常增加,并伴有头晕乏力,神疲懒言,气短少动,肢体困倦等一类综合性病症,临床分为单纯性肥胖和继发性肥胖。笔者于2003年1月至2008年底对海阳市区600例单纯性肥胖患者进行跟踪调查和病因病机分析,结果发现脾气虚弱,运化失职,痰湿停聚,为本病的根本病理机制,采用健脾益气,除湿化痰为主,佐以温肾、利水、行气、化瘀等,效果满意。现总结如下：     

复方柴金解郁片对慢性应激抑郁大鼠HPA轴及海马单胺神经递质的影响

目的 研究复方柴金解郁片对慢性应激抑郁模型大鼠HPA轴及海马单胺神经递质的影响,探讨其可能的抗抑郁机制.方法 将SD大鼠随机分为6组:对照组、模型组、氟西汀组(5.4 mg/kg)、复方柴金解郁片高、中、低剂量组(2.74、1.37、0.68 g/kg),采用慢性不可预见性温和应激建立抑郁模型,于造模同时给药,连续28 d.采用蔗糖偏好实验和旷场测试检测大鼠的抑郁样行为,Morris水迷宫检测大鼠的学习记忆能力,HE染色观察大鼠海马病理结果变化,ELISA法检测大鼠血浆促肾上腺皮质激素释放激素(CRH)、促肾上腺皮质激素(ACTH)、皮质酮(CORT),以及海马5-羟色胺(5-HT)、5-羟吲哚乙酸(5-HIAA)、去甲肾上腺素(NA)、多巴胺(DA)的含量.结果 与抑郁模型组比较,复方柴金解郁片组大鼠蔗糖偏嗜度及活动次数均显著提高,学习记忆能力提升,海马病理损伤情况得到缓解,血浆CRH、ACTH、CORT含量下降,海马组织内5-HT、NA、DA含量上升,5-HIAA含量下降(P<0.05).结论 复方柴金解郁片能显著改善模型大鼠情绪和学习记忆功能、缓解海马组织损伤,其作用可能与抑制HPA轴亢进、增加脑内单胺递质含量有关.     

甘麦大枣汤对慢性应激抑郁大鼠HPA轴及海马显微结构的影响

目的 研究甘麦大枣汤对慢性应激抑郁模型大鼠HPA轴及海马显微结构的影响,探讨其可能的抗抑郁机制.方法 将SD大鼠随机分为6组:空白组、模型组、氟西汀组(5.4 mg/kg)、甘麦大枣汤高、中、低剂量组(3.84、1.92、0.96 g/kg),采用慢性不可预见性温和应激建立抑郁模型,于造模同时给药,连续21 d.采用糖水消耗实验和旷场测试检测大鼠的抑郁样行为,ELISA法检测大鼠血浆促肾上腺皮质激素释放激素(CRH)、促肾上腺皮质激素(ACTH)、皮质酮(CORT)的变化,HE染色观察大鼠海马CA1区、CA3区及齿状回(DG)区的病理结构变化.结果 与空白组比较,抑郁模型组大鼠蔗糖偏食度及自主活动次数显著下降(P<0.01),血浆CRH、ACTH、CORT含量显著上升(P<0.01),海马CA1区、CA3区以及DG区神经元均萎缩、缺失,损伤明显;与模型组比较,甘麦大枣汤高剂量组大鼠蔗糖偏食度及活动次数均显著提高(P<0.01),血浆ACTH、CORT含量下降(P<0.05),同时海马各区神经元损伤情况得到缓解.结论 甘麦大枣汤能显著改善模型大鼠的抑郁样行为,其作用可能与调节HPA轴高亢,保护海马的损伤有关.     

双丹明目胶囊抑制人脐静脉内皮细胞增殖有效成分筛选研究

目的从双丹明目胶囊24个入血成分中筛选出抑制人脐静脉内皮细胞(HUVEC)增殖的有效成分。方法将双丹明目胶囊24个入血成分标准品均稀释成终浓度为1、10、100μg/mL的溶液,分别干预体外培养的HUVEC,采用MTT法检测细胞存活率,对各成分进行初筛,再对有效成分进行浓度细化,确定有效成分的最佳作用浓度。在此基础上,采用Hoechst33258荧光染色和流式细胞术检测各有效成分对HUVEC凋亡的影响。结果 MTT检测结果显示,双丹明目胶囊24个入血成分中4个成分能有效抑制HUVEC增殖(P0.05),分别为3-乙酸齐墩果酸、丹参酮ⅡA、芹菜素和大波斯菊苷,其最佳作用浓度分别为75、75、50、75μg/mL;进一步研究发现,上述4个成分均能使HUVEC细胞核固缩、碎裂,数量减少,细胞凋亡率显著增加(P0.05),其中以丹参酮ⅡA和芹菜素效果尤为明显。结论 3-乙酸齐墩果酸、丹参酮ⅡA、芹菜素和大波斯菊苷是双丹明目胶囊抑制HUVEC增殖、发挥治疗糖尿病视网膜病变疗效的有效成分。     

基于免疫激活研究左归降糖解郁方对糖尿病并发抑郁症大鼠海马谷氨酸重摄取的干预作用

目的 研究糖尿病并发抑郁症模型大鼠海马内免疫状态对星形胶质细胞谷氨酸重摄取功能的影响及左归降糖解郁方的干预作用。方法 建立糖尿病并发抑郁症大鼠模型并随机分为模型组、二甲双胍与氟西汀联用组(0.18g/kg+1.8mg/kg)、左归降糖解郁方高、中、低剂量组(20.53g/kg、10.26g/kg、5.13g/kg),以正常大鼠为空白组,灌胃给药4周。分别采用ELISA法检测各组大鼠血清和海马中IL-1、IL-6、TNF-α、IFN-γ及海马中谷氨酸含量,采用电镜观察各组大鼠海马血脑屏障结构,采用双重免疫组化技术检测各组大鼠海马星形胶质细胞GFAP及谷氨酸转运体(EAAT2)表达。结果 与正常组比较,模型组大鼠血清及海马匀浆液中各细胞因子表达均显著升高(P<0.05),电镜结果显示血脑屏障存在一定损伤;海马中GFAP表达显著增加,而EAAT2表达减少(P<0.05),海马匀浆液中谷氨酸含量异常增多(P<0.05)。左归降糖解郁方可显著减少模型大鼠细胞因子和谷氨酸的含量(P<0.05),降低GFAP并增加EAAT2的表达(P<0.05),此外,其对大鼠海马血脑屏障也具有一定的保护作用。结论 左归降糖解郁方可通过增加糖尿病并发抑郁症大鼠海马星形胶质细胞表面EAAT2表达,减少谷氨酸造成的兴奋性毒性,该作用可能与其抑制模型大鼠脑内免疫激活有关。