苦苣提取物的心血管保护作用研究

目的：观察苦苣提取物的心血管保护作用。方法：采用常压耐缺氧、饥饿小鼠生存时间、急性心肌缺血模型、电刺激诱发血栓形成模型等实验方法，观察苦苣提取物的心血管药理活性。结果：苦苣提取物灌胃给药12．5g/kg和6．3g／kg均能明显增加小鼠常压下耐缺氧存活时间，能够延长饥饿小鼠的生存时间。3、2g/kg可明显降低大鼠血液黏度，延长大鼠体内血栓形成时间。苦苣提取物3．2g/kg和1．6g／kg对由垂体后叶素所致冠状动脉痉挛引起的大鼠急性心肌缺血具有明显的拮抗作用。结论：苦苣提取物具有活血化淤、抗心肌缺血的心血管保护作用。     

甲异靛对1型糖尿病大鼠心肌损伤的修复作用

目的观察甲异靛对糖尿病大鼠Wnt/β-catenin信号通路中相关蛋白在1型糖尿病大鼠心肌中表达的影响,明确其在糖尿病心肌病发生、发展中的作用。方法 SD♂大鼠腹腔一次性注射链脲佐菌素建立1型糖尿病大鼠模型,取模型成功大鼠分为糖尿病4、8周模型组以及甲异靛4、8周给药组。尾静脉采血检测空腹血糖值;HE染色法观察心肌病理结构变化;Western blot和免疫组织化学法检测心肌GSK-3β、p-GSK-3β、Wnt2、β-catenin、NF-κB-p65、p-NF-κB-p65蛋白表达变化。结果与正常对照组比较,1型糖尿病大鼠血糖值明显升高,体质量明显下降(P<0.01),8周甲异靛给药组大鼠血糖与糖尿病组比较明显下降(P<0.01);显微镜下能观察到糖尿病模型组大鼠心肌不同程度局灶性心肌细胞肥大、溶解性坏死、纤维组织增生等,甲异靛给药组大鼠心肌病变较糖尿病模型组有不同程度的缓解。糖尿病模型大鼠相对于正常对照组,心肌p-GSK-3β、Wnt2、β-catenin、p-NF-κB-p65表达升高,尤其是8周时,差异有显著性(P<0.01),给药组的蛋白表达与DM模型组比较明显降低(P<0.01)。结论甲异靛可能是通过降低Wnt2、β-catenin、GSK-3β等蛋白的表达,从而抑制Wnt/β-catenin信号通路在糖尿病大鼠体内的激活,参与修复糖尿病大鼠的心肌损伤及炎症过程,进一步研究该药在糖尿病大鼠心肌损伤修复中的作用机制,将为糖尿病心肌病找到新的治疗靶点提供理论依据。     

FBXW7在糖尿病心肌病中的表达

目的:检测含F框/WD重复域蛋白7(FBXW7)在1型糖尿病大鼠心肌中的表达,探究其在糖尿病心肌病发生发展中的作用。方法:实验将大鼠分为非糖尿病组(ND组)及糖尿病4、8和12周模型组(DM组),采用链脲佐菌素(60 mg/kg)一次性腹腔注射建立1型糖尿病大鼠模型。HE染色法观察心肌病理结构变化,Western blot和免疫组化法检测心肌中FBXW7蛋白的表达变化。结果:显微镜下可见糖尿病组大鼠心肌局灶性心肌细胞变性、坏死。Western blot和免疫组化结果均显示,4周、8周及12周DM组大鼠心肌中的FBXW7表达相对于ND组显著增加(P 0. 01),但是相比于4周和8周DM组,12周DM组大鼠心肌中的FBXW7表达相对下降(P 0. 05)。结论:随着糖尿病病程的延长,FBXW7在糖尿病心肌病大鼠心肌组织中的表达呈现先升高后降低的趋势,提示其在糖尿病心肌病发生发展中发挥了一定的作用。     

高效液相色谱-串联质谱法测定香连丸中主要成分的含量

目的:建立同时测定香连丸中小檗碱、药根碱、黄连碱、巴马汀、木香烃内酯、去氢木香内酯含量的高效液相色谱-质谱联用(HPLC-MS/MS)的检测方法。方法:采用Hypersil GOLD C_(18)色谱柱(50 mm×2.1 mm,3μm,Thermo),流动相为乙腈-0.1%甲酸水,梯度洗脱,流速为0.5 mL·min~(-1),进样量2μL,柱温25℃,采用ESI离子源在正离子模式下选择离子扫描模式进行定量分析。结果:小檗碱、药根碱、黄连碱、巴马汀、木香烃内酯、去氢木香内酯分别在83.871～934.163、39.939～480.298、42.371～461.046、42.982～473.626、42.193～510.321、41.785～512.478 ng·mL~(-1)与峰面积呈现良好的线性关系,r均大于0.99,平均加样回收率分别为99.08%、98.80%、98.86%、99.11%、99.06%、99.40%,RSD分别为0.73%、0.78%、0.86%、0.76%、0.98%、1.03%。结论:所建立的方法简便、准确,可用于香连丸中主要成分的含量测定。     

靶向THRβ的新化合物YWS01125对NASH小鼠的治疗作用

目的 研究特异性靶向甲状腺激素β受体(THRβ)的哒嗪酮类化合物YWS01125对非酒精性脂肪肝(NASH)小鼠的治疗作用.方法 采用多肽募集实验验证YWS01125甲状腺激素β受体选择性及细胞存活率,高脂饮食结合四氯化碳法建立慢性肝损伤小鼠模型,造模成功后随机将小鼠分为模型组、阳性药(MGL-3196)对照组以及YW...     

超敏C反应蛋白、IL-6、TNF-α水平与2型糖尿病酮症酸中毒继发感染的相关性

目的探讨超敏C反应蛋白(hs-CRP)、细胞因子[白细胞介素(IL)-6、肿瘤坏死因子(TNF)-α]水平与2型糖尿病酮症酸中毒(DKA)继发感染的相关性。方法选取该院2016年1月至2018年12月收治的60例DKA继发感染患者纳入DKA感染组,另选取同期在该院接受治疗的60例DKA非感染患者纳入DKA非感染组,分别对两组患者的hs-CRP、IL-6、TNF-α进行检测,分析hs-CRP、IL-6、TNF-α水平与DKA患者继发感染的相关性。结果与DKA非感染组比较,DKA感染组患者hs-CRP、IL-6、TNF-α水平明显升高,差异均有统计学意义(P0.05)。hs-CRP、IL-6、TNF-α水平与DKA患者继发感染均呈相关性(r=0.412、0.387、0.359,P0.05)。结论 hs-CRP、IL-6、TNF-α与DKA患者继发感染具有明显相关性。加强对hs-CRP、IL-6、TNF-α的动态监测可为临床DKA的防治提供更多参考依据,有利于提高医生对DKA继发感染患者的临床诊治水平。     

栗酮对动脉粥样硬化大鼠的治疗作用

目的：观察栗酮对动脉粥样硬化大鼠的治疗作用。方法：采用高脂饲料喂养的方法诱发大鼠动脉粥样硬化模型。造模8周后,选取造模成功大鼠50只随机分为栗酮300、150、75mg/kg剂量组、阳性组（非诺贝特）、模型对照组,每组10只,连续灌胃给药60d,模型对照组给予等体积的蒸馏水,给药同时仍采取高脂饲料喂养。另取10只大鼠为正常对照组,灌胃给予蒸馏水,正常饲料喂养。60d后分别采血检测血清总胆固醇（CHOL）、TG、高密度脂蛋白胆固醇（HDL-C）、低密度脂蛋白胆固醇（LDL-C）、氧化型低密度脂蛋白（Ox-LDL）及取胸主动脉内皮细胞观察细胞凋亡情况,同时取主动脉作病理形态学观察。结果：大鼠连续给栗酮（300mg/kg、150mg/kg）60d血清CHOL、TG、LDL-C、Ox-LDL、细胞凋亡比率较模型对照组明显减低（P〈0.05）,300mg/kg、150mg/kg剂量组大鼠主动脉壁泡沫细胞数目及弹性纤维损伤等病变明显较高脂模型组减轻。结论：栗酮具有明显的降脂及抗动脉壁损伤的作用。     

组织块贴壁法培养大鼠主动脉血管平滑肌细胞的特征

目的:采用组织块贴壁法培养大鼠主动脉血管平滑肌细胞,并应用光镜、电镜和免疫组织化学方法观察细胞各生长时期的形态变化。方法:实验于2004-02/08在中国医科大学基础医学院药理实验室完成。选择健康清洁级Wistar大鼠30只,体质量150～180g,无菌条件下取全段主动脉中膜组织修剪成1mm×1mm大小的组织块直接贴壁于一次性塑料培养皿中,组织块间距0.5cm,保证细胞从组织块游出后有足够的生长空间并保持局部细胞密度的均匀,发现漂起的组织块及时清理,于37℃孵箱内放置1.5h左右使组织块与壁贴附后,缓慢加入改良Eagle培养液培养3～5d,待有细胞从组织块周围游出后换液。当细胞长满培养皿时即可传代。采用倒置相差显微镜和透射电镜及抗α-平滑肌肌动蛋白免疫组织化学方法观察主动脉平滑肌细胞的形态。绘制主动脉平滑肌细胞生长曲线,观察各生长时期的变化,并评估其培养方法的优点。结果:30只大鼠全部进入结果分析。①技术方法优点:贴块方便,直接一次性贴壁使污染机会少,随组织块生长随时清理漂起的组织块,可减少对其他组织块的毒性作用,并增加已游离出的细胞生长空间。②原代培养血管平滑肌细胞:光镜观察形态多样,大小略有差异,胞体较小,胞质折光性强。③传代血管平滑肌细胞:光镜下观察呈现特征性“峰”、“谷”状生长。电镜下观察:细胞形态不规则,胞浆内有肌丝,纵向平行排列,有密区,具备平滑肌细胞特征。免疫组织化学染色后可见细胞浆中大量平行条状棕黄染色、胞核不着色,所有细胞均染色,呈阳性。④主动脉平滑肌细胞生长曲线:血管平滑肌细胞生长曲线近似“S”形,传代后第1天细胞数有所减少,经过2d潜伏适应期后进入对数生长期,持续两三天进入平台期。结论:组织块贴壁法培养技术具有操作简便,污染机会少,有足够细胞生长空间的优点,经光镜和电镜观察培养出新的主动脉血管平滑肌细胞具有平滑肌细胞特征,免疫组织化学染色也显示所有细胞均呈阳性。传代培养后第2天进入对数生长期,持续两三天进入平台期,可产生纯度高及数量多的平滑肌细胞。     

组织块贴壁法培养大鼠主动脉血管平滑肌细胞的特征

目的：采用组织块贴壁法培养大鼠主动脉血管平滑肌细胞，并应用光镜、电镜和免疫组织化学方法观察细胞各生长时期的形态变化。方法：实验于2004—02／08在中国医科大学基础医学院药理实验室完成。选择健康清洁级Wistar大鼠30只，体质量150—180g，无菌条件下取全段主动脉中膜组织修剪成1mm&;#215;1mm大小的组织块直接贴壁于一次性塑料培养皿中，组织块间距0．5cm，保证细胞从组织块游出后有足够的生长空间并保持局部细胞密度的均匀，发现漂起的组织块及时清理，于37℃孵箱内放置1．5h左右使组织块与壁贴附后，缓慢加入改良Eagle培养液培养3～5d，待有细胞从组织块周围游出后换液。当细胞长满培养皿时即可传代。采用倒置相差显微镜和透射电镜及抗α-平滑肌肌动蛋白免疫组织化学方法观察主动脉平滑肌细胞的形态。绘制主动脉平滑肌细胞生长曲线，观察各生长时期的变化，并评估其培养方法的优点。结果：30只大鼠全部进入结果分析。①技术方法优点：贴块方便，直接一次性贴壁使污染机会少，随组织块生长随时清理漂起的组织块，可减少对其他组织块的毒性作用，并增加已游离出的细胞生长空间。②原代培养血管平滑肌细胞：光镜观察形态多样，大小略有差异，胞体较小，胞质折光性强。③传代血管平滑肌细胞：光镜下观察呈现特征性“峰”、“谷”状生长。电镜下观察：细胞形态不规则，胞浆内有肌丝，纵向平行排列，有密区，具备平滑肌细胞特征。免疫组织化学染色后可见细胞浆中大量平行条状棕黄染色、胞核不着色，所有细胞均染色，呈阳性。④主动脉平滑肌细胞生长曲线：血管平滑肌细胞生长曲线近似“S”形，传代后第1天细胞数有所减少，经过2d潜伏适应期后进入对数生长期，持续两三天进入平台期。结论：组织块贴壁法培养技术具有操作简便，污染机会少，有足够细胞生长空间的优点，经光镜和电镜观察培养出新的主动脉血管平滑肌细胞具有平滑肌细胞特征，免疫组织化学染色也显示所有细胞均呈阳性。传代培养后第2天进入对数生长期，持续两三天进入平台期，可产生纯度高及数量多的平滑肌细胞。     

2型糖尿病大鼠早期血清cTnI水平与心功能的变化

目的:研究2型糖尿病大鼠早期血清心肌肌钙蛋白I(cTnI)的水平及心功能变化,探讨早期2型糖尿病大鼠血清cTnI水平与糖尿病心肌损伤发生发展之间的关系,明确cTnI在糖尿病心肌病发生发展中的作用。方法:通过高脂饮食联合链脲佐菌素建立2型糖尿病大鼠模型,实验将大鼠分为正常对照组、糖尿病2周模型组及4周模型组,超声心动图检测心功能相关指标,血清检测空腹血糖(FBG)、总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)、高密度脂蛋白(HDL-C)、低密度脂蛋白(LDL-C)、空腹胰岛素(FINS)及cTnI水平,HE染色法观察心肌病理结构变化,Western blot法检测心肌cTnI蛋白表达变化,通过上述指标变化分析2型糖尿病大鼠早期血清cTnI与大鼠心功能改变之间的关系。结果:与正常组比较,2型糖尿病大鼠TC、TG、LDL-C水平显著升高,HDL-C水平显著降低;糖尿病大鼠4周模型组与2周模型组相比较,TC、TG、LDL-C水平升高更明显,HDL-C水平降低更显著(P0.01);显微镜下糖尿病组大鼠心肌可见局灶性心肌细胞变性、坏死;糖尿病组大鼠相对于正常对照组血清及心肌cTnI表达显著增加(P0.01),且4周模型组比2周模型组增加更明显。结论:糖尿病大鼠早期即出现cTnI水平升高和心功能改变,有望为糖尿病心肌病的早期诊断和治疗提供理论依据。