食管癌组织中基质金属蛋白酶-2,-9的定位表达

目的：探讨食管癌组织中基质金属蛋白酶-2,-9(MMP-2,-9)的蛋白和mRNA定位表达。方法：用免疫组化,原位杂交,RT-PCR法分别检测41例食管癌组织标本中MMP-2,-9的mRNA及蛋白定位表达。结果：用RT-PCR、原位杂交2种不同方法检测食管癌组织及癌细胞MMP-9mRNA的阳性表达率分别为80．49％和53．66％,MMP-2mR-NA的阳性表达率分别为58．54％和9．76％,食管癌细胞与组织成分中MMP-9阳性表达相-致,但MMP-2明显不符。结论：本研究结果提示MMP-9由食管癌组织中的肿瘤细胞分泌,而MMP-2则非肿瘤细胞所分泌。     

食管鳞癌及不典型增生组织中端粒酶活性的定性及定量检测

目的 :探讨食管鳞癌及不典型增生组织中端粒酶活性检测的意义及其与临床病理因素的关系。方法 :采用TRAP -ELISA定量及TRAP -银染定性的方法 ,对 38例食管鳞癌组织、15例不典型增生组织及 12例正常食管粘膜组织进行端粒酶活性检测。结果 :食管鳞癌、不典型增生组织及正常食管粘膜的端粒酶阳性表达率分别 84 .2 1%(32 / 38)、6 0 .0 0 % (9/ 15 )及 8.33% (1/ 12 )。端粒酶活性的平均A值分别为食管鳞癌组织 1.4 4 0± 0 .85 7、不典型增生组织 0 .4 86± 0 .30 2、正常食管粘膜组织 0 .0 75± 0 .0 4 9。 3组间两两比较端粒酶阳性表达率及端粒酶活性的平均A值均存在显著性统计学差异。结论 :端粒酶参与了食管癌的发生与发展 ,端粒酶的激活是食管癌的早期事件 ,其活性的检测有望成为预测食管癌发生及其诊断的良好指标。     

应用完整原位杂交技术检测人食管癌EC9706细胞中胰岛素样生长因子1受体mRNA的表达

目的:探讨人食管癌EC9706细胞中胰岛素样生长因子1受体的表达,及其对反义寡核苷酸胰岛素样生长因子1受体mRNA表达的影响和食管癌发生、转移的意义。方法:实验于2004-09/12在河南省肿瘤病理重点实验室完成。体外分5组培养人食管癌EC9706细胞,其中4组分别用设计合成的3条封闭胰岛素样生长因子1受体不同基因位点的反义寡核苷酸1～3及1条无关寡核苷酸转染,另一组不转染。采用完整细胞原位杂交技术观察各组EC9706细胞中胰岛素样生长因子1受体mRNA表达情况。结果:①胰岛素样生长因子1受体mRNA在食管癌EC9706细胞中呈阳性表达。②3条胰岛素样生长因子1受体反义寡核苷酸转染组EC9706细胞中胰岛素样生长因子1受体mRNA的表达无差异(2.66±0.21,2.63±0.23,2.65±0.22,P>0.05),但均显著低于无关寡核苷酸组及无转染组(5.67±2.86,5.02±2.75,P<0.05)。结论:胰岛素样生长因子1受体反义寡核苷酸转染人食管癌EC9706细胞后,可体外抑制EC9706细胞中胰岛素样生长因子1受体mRNA的表达,从而抑制食管癌的发生和转移。为临床预防食管癌的发生、发展和转移提供了理论依据。     

基质金属蛋白酶-9 mRNA在食管癌中的表达

肿瘤由原位癌到侵袭转移癌的演进是一个复杂的过程 ,首先必须具备降解细胞外基质 (ＥＣＭ)的能力 ,这一过程主要依靠蛋白水解酶。而基质金属蛋白酶 (ＭＭＰ)则是其中较为重要的一类 ,ＭＭＰ 9为ＭＭＰ家族成员之一。由于其可降解ＥＣＭ中明胶、多种胶原及弹性纤维 ,而在癌肿浸润和转移中发挥重要作用[1] 。我们采用ＲＴ ＰＣＲ法对食管癌、癌旁及正常组织ＭＭＰ 9ｍＲＮＡ表达进行研究 ,并探讨其与肿瘤浸润、转移及分型的关系。一、材料与方法1.组织标本 :41例食管癌手术标本由本院和河南省肿瘤医院提供。均经病理确诊。所有标本手术后立即…     

Smo和Gli1蛋白在食管鳞状细胞癌组织中的表达及临床意义

目的:探讨Sonic hedgehogq信号通路中Smo和Glil蛋白在食管鳞状细胞癌(ESCC)组织中的表达及临床意义.方法:采用免疫组织化学二步法分别检测60例ESCC、45例癌旁异型增生及60例食管正常黏膜组织中Smo和Glil蛋白的表达,并分析两者的表达水平与临床病理因素的关系.结果:Smo和Glil蛋白在ES...     

hIFN-β基因重组腺病毒载体的构建

目的构建hIFN—β基因的腺病毒载体，为探索hIFN—β在肿瘤基因治疗中的作用作准备。方法从健康人外周血中提取出基因组DNA，pyrobest Taq酶PCR法扩增出hIFN—β基因片段。将目的基因克隆入中间载体pMD-18T载体，经蓝白筛选和PCR筛选后测序证实序列无误。酶切目的基因并将之克隆入穿梭载体pAdTrack—CMV中，将新形成的pAdTrack—CMV—hIFN—β用限制性内切酶Pme Ⅰ线性化，与腺病毒骨架质粒pAdEasy-1共转染大肠杆菌株BJ5183细胞中。卡那霉素及酶切筛选出重组子pAd—hIFN-β，内切酶pacⅠ再次将重组子线性化，脂质体转染细胞株HEK293。借助GFP的表达可以在转染的2—3天观察到包装病毒Ad—hIFN—β产生，7—10天出现病毒斑。结果经PCR法及酶切证实各中间过程载体，且最终的包装病毒中携带有目的基因hIFN—β。结论大肠杆菌内同源重组法能有效和较为方便的构建出含有目的基因的腺病毒载体Ad—hIFN—β，重组子能够在HEK293细胞中扩增，病毒包装的成功为进一步研究hIFN—β基因治疗肿瘤提供了一个良好的转导载体。     

食管癌组织中基质金属蛋白酶-2 mRNA的表达

目的探讨食管癌组织中基质金属蛋白酶-2(MMP-2)mRNA的表达.方法用反转录PCR(RT-PCR)法检测41例食管癌患者的癌组织、癌旁组织MMP-2mRNA的表达.结果食管癌患者的癌组织MMP-2mRNA的表达率(25/41)与癌旁组织的表达率(15/41)比较差异有显著性(P<0.05).有淋巴结转移的食管癌患者癌组织MMP-2mRNA的表达率(15/19)与无淋巴结转移者的表达率(10/22)比较差异有显著性(P<0.05).侵及浆膜层者的表达率(13/18)高于未侵及浆膜层者(12/23),但差异无显著性.结论MMP-2在食管癌的侵袭和转移中起到十分重要的作用.