抗日本血吸虫未成熟虫卵部分纯化抗原免疫血清的制备及定位观察

抗日本血吸虫未成熟虫卵部分纯化抗原免疫血清的制备及定位观察汪世平周汨波曾庆仁赵慰先日本血吸虫卵不同发育时期抗原性存在明显差异。来源于不同发育阶段的虫卵可溶性抗原所诱导的宿主免疫应答明显不同。因此，制备针对未成熟虫卵可溶性抗原（ＳＩＥＡ）的免疫血清，对...     

日本血吸虫SIEA26-28kDa的抗雌虫生殖免疫作用--HGPRT是否是主要的靶抗原

目的观察日本血吸虫SIEA26—28kDa抗原的抗雌虫生殖作用。方法用AcA柱层析纯化日本血吸虫早期胚卵中的SIEA和SIEA26—28kDa成分。并以此纯化产物免疫BALB／c小鼠。将小鼠分为三组，分别用SIEA、SIEA26—28kDa和免疫佐剂免疫动物，然后进行尾蚴攻击感染。46天后剖杀动物，冲虫，然后作虫荷测定及虫卵分类计数。结果SIEA26—28kDa免疫组雌虫子宫内减卵率为54．8％。与对照组比较有极显著性差异；该实验组动物肝脏和小肠组织内的虫卵数比对照组分别降低了48.07％和77.41％，且以成熟虫卵数的下降较为显著，分别降低了83．6％和93．3％；粪卵数的下降幅度最为显著，达87．26％。结论SIEA26—28kDa可作为一种抗卵胚发育及抗雌虫生殖的候选抗原分子。     

人体血吸虫病免疫调节与感染度的关系 Ⅱ.自然杀伤细胞活性和体外淋巴细胞的增殖

作者观察了41例感染曼氏血吸虫和埃及血吸虫儿童的自然杀伤(NK)细胞抗K-562靶细胞的活性,以及淋巴细胞对刀豆球蛋白A(Con A)、白细胞间介素Ⅱ(IL_2)、Con A+IL_2的增殖反应。     

日本血吸虫DNA疫苗pcDNA3/SjSDISP的安全性评价

目的评价日本血吸虫DNA疫苗pcDNA3/SjSDISP的安全性。方法同体左右侧自身对比法对3只家兔进行局部肌肉刺激实验,22只豚鼠随机分为4组:A组为无菌生理盐水阴性对照组,B组为牛血清白蛋白阳性对照组,C组为pcDNA3/SjSDISP低剂量组,D组为pcDNA3/SjSDISP高剂量组,进行全身过敏实验。结果日本血吸虫DNA疫苗pcDNA3/SjSDISP对家兔局部肌肉刺激反应轻微,对豚鼠无全身过敏反应。结论日本血吸虫DNA疫苗pcDNA3/SjSDISP在该实验条件下安全。     

感染曼氏血吸虫小鼠的循环抗原和免疫复合物

作者将曼氏血吸虫尾蚴感染小鼠后每隔5天测定其血清中的下列物质,一直测至感染后第100天。以碘~(125) 标记的抗虫抗体或抗抗原“4”抗体用放射免疫聚乙二醇法(RIPEGA)分别测定总的血吸虫循环抗原(CSA)和抗原“4”。结果表明 CSA 出现于感染后第45天,以后呈有规律地增加,但在第75天时出现了一个低峰。抗原“4”亦可在第45天检出,渐增至第95天,但在第80天和第100天时出现了两个低峰。     

医学昆虫蜚蠊化学组分及药用价值研究现状

医学昆虫蜚蠊（blatta）,俗名蟑螂（cockroach）,古称费蠊、蠊、石姜、负盘、滑虫、茶婆虫、香娘子等,属节肢动物门、昆虫纲、蜚蠊目。在距今3.5亿年前的石炭世纪前期化石中就有蜚蠊出现,说明它是古老的昆虫类群之一,演化史上称之为＂蜚蠊时代＂。早在1960年,Princis就曾报道蜚蠊在世界范围内约有5000种,中国约有250种左右,分为8科20属。     

血吸虫生殖产卵相关基因pcDNA3／Sj SDISPDNA在小鼠体内的组织分布及整合的观察

目的探讨日本血吸虫生殖产卵相关基因DNA在小鼠体内组织分布以及整合到宿主基因组上的可能性。方法将生殖产卵相关基因重组喷柱pcDNA3／SjSDISP经肌注免疫小鼠后,在注射后12b、1w、3w和6w取小鼠各组织,抽提其基因组DNA进行PCR扩增,然后纯化基因组DNA进行PCR扩增,结果经琼脂糖凝胶电泳分析。结果注射后12h,在血液、心、肝、脾、肺、肾及注射鄂位肌肉中可检测到pcDNA3／Sj SDISP,至第1w,仍可在部分小鼠中检测到,至第3w不再检出。未发现生殖产卵相关基因pcDNA3／Sj SDISP整合入小鼠基因组中。结论肌注pcDNA3／Sj SDISP后,可在组织中广泛分布,但并未持续存在体内。未发现与宿主细胞基因组整合的直接证据     

IL-18对pVAX1/SjRPS4·CB质粒疫苗免疫小鼠抗日本血吸虫感染的免疫调节作用

目的探讨pVAX1/IL-18联合pVAX1/Sj RPS4·CB质粒疫苗对小鼠抗日本血吸虫感染的免疫调节作用。方法 70只BALB/c雌鼠按随机数字表法均分为生理盐水组(NS组)、pVAX1空质粒组、pVAX1/IL-18组、pVAX1/Sj RPS4·CB组和pVAX1/Sj RPS4·CB+pVAX1/IL-18组等5组(每组14只),每组小鼠在左后腿股四头肌注射相应质粒100μg或等量生理盐水,每隔2周加强免疫1次,共免疫3次。小鼠感染前(免疫后3周)尾尖部取血,ELISA检测小鼠血清特异性抗体Ig G以及抗体亚类Ig G1、Ig G2a水平。同时,各组小鼠经腹部贴片感染日本血吸虫尾蚴,(20±1)条/鼠。感染后8周,门静脉灌注法收集日本血吸虫成虫,计算减虫率;取肝组织,显微镜下计数虫卵数,计算减卵率。无菌取脾脏,称重,计算小鼠脾脏指数,噻唑蓝(MTT)法测脾淋巴细胞体外增殖水平。分别于小鼠感染前(免疫后3周)以及感染后2、4、6、8周尾尖部取血,ELISA检测小鼠血清中γ干扰素(IFN-γ)、白细胞介素4(IL-4)水平。结果5组小鼠免疫后3周,ELISA检测结果显示,pVAX1/Sj RPS4·CB+pVAX1/IL-18组Ig G、Ig G1、Ig G2的吸光度(A450值)分别为1.03±0.17、0.32±0.08、0.78±0.12,Ig G2a/Ig G1比值为2.44,均高于其他4组。pVAX1/Sj RPS4·CB+pVAX1/IL-18组的减虫率、减卵率分别为52.0%、63.2%,均高于其他3组(P0.05)。脾脏指数结果显示,pVAX1/Sj RPS4·CB+pVAX1/IL-18组小鼠脾脏指数为3.32±0.37,高于其他4组(P0.05)。MTT法检测结果显示,pVAX1/Sj RPS4·CB+pVAX1/IL-18组淋巴细胞体外增殖水平A570值为4.45±0.34,高于其他4组(P0.05)。小鼠感染前以及感染后2、4、6、8周,pVAX1/Sj RPS4·CB+pVAX1/IL-18组IFN-γ含量分别为(569.07±21.15)、(560.66±30.84)、(577.46±36.45)、(605.03±36.91)、(636.33±37.35)pg/ml,均高于其他4组(P0.05);各组IL-4含量在感染前后差异无统计学意义(P0.05)。结论IL-18可增强pVAX1/Sj RPS4·CB疫苗抗日本血吸虫感染的免疫保护效果,且诱导小鼠产生较高的以Th1为主的免疫应答。     

Sj-UV-致弱尾蚴单链抗体库的构建及筛选

目的构建和鉴定日本血吸虫（Schistosoma japonicum,Sj）紫外线（UV）-照射致弱尾蚴单链抗体（single chain Fv,ScFv）表达文库,并以此作为高通量的库源筛选出针对有潜在保护力的Sj尾蚴66-68 kDa抗原（Schistosoma japonicum cercariae antigen 66-68kDa,SCA66-68kDa）的单链抗体。方法选择最佳紫外灯照射条件,构建UV-致弱尾蚴小鼠模型,通过其血清被动转移实验证实其是否具有抗血吸虫攻击感染的保护效果;随后提取该小鼠脾脏mRNA,利用噬菌体展示技术构建UV-照射致弱尾蚴单链抗体库,并从库容量、多样性等方面进行鉴定;运用直接菌落挖集法以SjSCA66-68kDa筛选该抗体库,获得阳性克隆进行蛋白表达,再与SCA进行反应,验证其与SjSCA66-68kDa反应的特异性。结果构建UV-致弱尾蚴动物模型中的血清转移至小鼠体内得到42.5%的减虫率,显著高于日本血吸虫感染血清转移组的减虫率（28.0%）;日本血吸虫UV-致弱尾蚴单链抗体库的库容量测定为1.9×108,重组率为100%;运用抗原直接菌落挖集法筛选共获得6个SCA66-68kDa阳性克隆,经SDS-PAGE、Western-blot分析结果显示可溶性ScFv获得了正确表达,且与相应抗原SjSCA66-68kDa特异性结合,证实成功获得了特异性抗SjSCA66-68kDa单链抗体。结论成功构建了高效日本血吸虫UV-致弱尾蚴单链抗体库,从该库筛选共获得6个阳性克隆,均能诱导表达SjSCA66-68kDa特异性可溶性单链抗体。