宫颈组织病变与Ki-67 Survivin表达的关系研究

<正>本实验拟采用免疫组织化学法和反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)法检测正常宫颈、宫颈上皮内瘤变(CIN)和宫颈浸润癌组织中Survivin及Ki-67蛋白表达情况,并分析宫颈组织病变与Ki-67,Survivin蛋白表达、宫颈上皮内瘤变之间的相关性,从而探讨它们对宫颈病变普查的临床价值。     

人脂肪细胞总RNA的抽提及对脂联素mRNA的扩增

目的建立一种提取脂肪组织总RNA并能够有效地进行反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)的方法。方法利用Trizol试剂提取人皮下脂肪组织总RNA,用紫外分光光度法鉴定其产率及纯度,用琼脂糖凝胶电泳和RT-PCR鉴定所提取的总RNA的完整性。结果采用选择性mRNART-PCR试剂盒特异性地扩增出脂联素(adiponectin)和β肌动蛋白(β-actin)的mRNA。结论在脂肪组织总RNA抽提中容易混入基因组DNA,而采用选择性mRNART-PCR只针对mRNA进行特异的扩增。     

海洋生物提取物抗紫外线作用研究

目的从海洋生物组织中提取制备对紫外线具有较强吸收作用的成分,为建立紫外线损伤的防护提供新方法。方法高压液相纯化海洋生物组织的提取物,观察其紫外吸收特征并绘制曲线,优选出有较强紫外吸收作用的样品,采用细胞培养法观察其对菌落及细胞的保护作用。结果优选出提取物的紫外吸收波长范围在220～300nm,且保持了较高的紫外吸收能力;经菌落抗紫外线和细胞抗紫外线实验证实,该提取物对菌落和细胞具有明显的紫外防护作用,菌落和细胞计数与对照组比较差异均有显著性(P<0.05)。结论本研究制备的海洋生物提取物具有明显的紫外防护作用。     

构建靶向性载脂蛋白E修饰脂质体介导的HSVtk/丙氧鸟苷系统

背景：自杀基因系统无选择性，不仅能杀伤癌细胞，对正常细胞也有同样作用，所以构建靶向性基因治疗载体成为迫切需要解决的问题。
　　目的：评价载脂蛋白E修饰脂质体(apoE-lipoplexes)介导TK/丙氧鸟苷自杀基因质粒转染对Li-7肝癌细胞的杀伤效果。
　　方法：apoE-lipoplexes包裹pAFP-TK-IRES2-EGFP真核表达质粒转染Li-7细胞，筛选HSVtk稳定表达细胞克隆(Li-7-tk)，荧光显微镜观察增强型绿色荧光蛋白表达，Western blotting检测HSVtk基因表达，MTT法评价HSVtk/丙氧鸟苷系统对Li-7肝癌细胞的杀伤作用。
　　结果与结论：自杀基因质粒转染Li-7细胞经筛选得到稳定克隆(Li-7-tk)，HSVtk/丙氧鸟苷系统作用于 Li-7细胞后，细胞凋亡明显增加(P<0.01)。在甲胎蛋白阳性的Li-7肝癌细胞中，自杀基因载体稳定表达并有效杀灭癌细胞。     

赤子爱胜蚓DNase活性测定方法

目的　研究赤子爱胜蚓 -地龙组织提取物DNase活性测定方法。方法　应用单相酶扩散法和紫外吸收法分别对其酶解底物DNA测定。结果和结论　两种方法同时应用可扩大其测定酶活力范围 ,且两方法的数据结果间存在稳定的函数关系 ,为赤子爱胜蚓DNase以及其他DNase的活力测定提供了可行的实验方法。     

肝特异性非病毒基因治疗载体介导增强型绿色荧光蛋白基因在小鼠肝细胞及肝脏中的表达

目的观察肝细胞特异性基因治疗载体蛋白介导增强型绿色荧光蛋白(EGFP)在体外培养小鼠肝细胞和小鼠肝脏中表达。方法将基因工程制备的肝细胞特异载体蛋白与真核表达质粒以所带电荷比为1：1的比例混合，两者结合形成蛋白-DNA复合物，将该复合物加入体外培养的小鼠肝细胞培养基中或经门静脉注射小鼠体内，用激光共聚焦显微镜观察EGFP在体外培养小鼠肝细胞及活体小鼠肝脏组织中的表达。结果在体外培养的小鼠肝细胞和小鼠肝脏切片中均可以观察到明显的绿色荧光，而对照组未能观察到绿色荧光蛋白。结论构建的肝细胞特异性载体蛋白可以有效的将真核表达质粒载体pcDNA3-EGFP带入肝细胞和活体肝脏组织。可能为肝细胞基因治疗提供有效载体。     

协和牌汉龙降糖胶囊对糖尿病小鼠降糖作用的实验研究

目的　观察协和牌汉龙降糖胶囊对小鼠的降糖效果。方法　实验设计 2组 ,正常组和四氧嘧啶模型组 ,测定协和牌汉龙降糖胶囊对正常小鼠及四氧嘧啶所致高血糖小鼠的体重、空腹血糖、餐后血糖及糖耐量等指标影响。结果　协和牌汉龙降糖胶囊对正常小鼠的体重、空腹血糖、餐后血糖及糖耐量无显著影响 ;对高血糖小鼠的空腹和餐后血糖的影响实验中 ,中、高剂量组动物各时间点的血糖值均明显低于模型对照组 ,提示协和牌汉龙降糖胶囊明显降低高血糖小鼠空腹和餐后血糖 ;协和牌汉龙降糖胶囊对高血糖小鼠糖耐量实验表明 ,中、高剂量组给葡萄糖 0 5h后血糖升高的幅度明显低于模型对照组 ,说明该样品对四氧嘧啶所致高血糖小鼠的糖耐量有一定调节作用。结论　协和牌降糖胶囊是具有降血糖功效的新制剂     

赤子爱胜蚓脱氧核糖核酸酶酶动力学研究

目的对赤子爱胜蚓中一组新型脱氧核糖核酸酶(EWDs)进行酶动力学研究。方法运用单相酶扩散法(SRED)、紫外分光光度法和林-贝氏(Lineweaver-Burk)作图法。结果EWDs的最适温度均为37℃。EWD1的最适pH为5.2,Km为1.58mg/ml,Vmax为5.36mg·ml-1·min-1;EWD2的最适pH为4.4,Km值是3.95mg/ml,Vmax值为2.87mg·ml-1·min-1;EWD3的最适pH为4.8,Km值是1.52mg/ml,Vmax值为4.89mg·ml-1·min-1。Mn2+和Ca2+是EWDs的抑制剂,Mg2+仅抑制EWD3的活性。结论蚯蚓组织中发现的此组脱氧核糖核酸酶具有特殊的酶学性质,区别于已知的脱氧核糖核酸酶类。     

抗双胸蚓核酸酶EWD-2多克隆抗体的制备及鉴定

目的将从双胸蚓组织中纯化的核酸酶EWD2免疫新西兰大白兔制备兔抗EWD2多克隆抗体。方法将纯化的双胸蚓核酸酶EWD2免疫新西兰兔，制备兔抗EWD2血清，以Western Blotting和ELISA方法分析其特异性和效价。结果EWD2蛋白免疫新西兰兔成功获得多克隆抗体。Western Blotting结果显示制备的抗体具有较高的特异性，ELISA显示效价为1：6000。结论获得了双胸蚓核酸酶EWD2多抗血清，为今后对双胸蚓核酸酶活性和结构的研究建立了基础。     

lncRNA RP11-297P16.4促进肺腺癌细胞侵袭及迁移的机制探讨

目的:探究长链非编码RNA（long non-coding RNA,lncRNA）RP11-297P16.4对人肺腺癌细胞H1299和A549侵袭及迁移的影响。方法:利用qRT-PCR检测在肺腺癌细胞H1299、A549及人正常支气管上皮细胞HBEC 中RP11-297P16.4的相对表达水平;设计合成针对RP11-297P16.4的特异性shRNA,慢病毒感染建立稳定敲低lncRNA RP11-297P16.4的H1299、A549细胞;将其分为对照/H1299组、实验/H1299组、对照/A549组、实验/A549组,对照组感染shRNA-NC,实验组感染shRNA-RP11-297P16.4;qRT-PCR检测shRNA敲低效率;采用细胞划痕实验和Transwell实验检测RP11-297P16.4对肺腺癌细胞侵袭、迁移能力的影响;采用qRT-PCR和蛋白质印迹法检测基质金属蛋白酶（matrix metalloproteinase,MMP）-2和-9的mRNA和蛋白质表达水平。结果:与对照组相比,RP11-297P16.4在肺腺癌细胞中高表达,差异有统计学意义（P＜0.001,P＜0.01）;qRT-PCR分析确定,shRNA敲低后RP11-297P16.4的mRNA表达水平显著降低(P＜0.001,P＜0.001);划痕实验表明24 h、48 h实验组细胞伤口愈合率均低于对照组,差异有统计学意义(P＜0.05,P＜0.01; P＜0.001,P＜0.001);Transwell小室检测结果显示,实验组细胞侵袭数量显著少于对照组,差异有统计学意义（P＜0.001,P＜0.001）;qRT-PCR和蛋白印迹法结果显示,实验组细胞中MMP-2和MMP-9 mRNA和蛋白质表达量均低于对照组,差异具有统计学意义（均P＜0.05）。结论:lncRNA RP11-297P16.4 通过促进MMP-2和MMP-9 mRNA和蛋白表达来增强H1299、A549细胞的侵袭和迁移能力。