内皮抑素抑制卵巢癌细胞生长的初步研究

目的：内皮抑素是一种特异性血管内皮生长抑制因子,本研究目的在于探讨人内皮抑素对卵巢癌SKOV3细胞生长的抑制作用及其机制。方法：MTT法观测内皮抑素对SKOV3细胞的生长抑制作用;透射电镜观察内皮抑素处理SKOV3细胞后细胞的凋亡情况,流式细胞仪检测细胞凋亡率及细胞周期;RT-PCR法检测内皮抑素处理SKOV3细胞后凋亡调控基因bcl-2和baxmRNA的表达。结果：内皮抑素具有体外抑制SK-OV3细胞增殖的作用,15μg/ml内皮抑素组的A490值（0.454）明显低于PBS对照组（0.686）（P〈0.01）;内皮抑素能诱导SKOV3细胞凋亡;内皮抑素对SKOV3细胞中bcl-2和bax的表达无明显改变;结论：人内皮抑素具有抑制SKOV3细胞生长的作用,其机制可能与诱发细胞凋亡相关。     

YH-16对宫颈癌Hela细胞及其裸鼠皮下移植瘤作用研究

目的：初步探讨YH-16（重组内皮抑素）对宫颈癌Hela细胞及其荷瘤生长抑制作用及作用机制。方法：用MTY法检测YH-16对Hela细胞生长抑制作用；用透射电镜观察YH-16处理Hela细胞后的凋亡情况、流式细胞仪检测细胞凋亡率及细胞周期；将Hela细胞移植至裸鼠皮下成瘤，观察不同浓度YH-16（0mg／kg、0．4mg／kg、0．75mg／kg和1．5mg／kg）对荷瘤鼠皮下移植瘤生长的影响；TUNEL法观察肿瘤细胞的凋亡；免疫组化方法检测裸鼠移植瘤组织中肿瘤微血管密度（MVD）。结果：YH-16具有体外抑制Hela细胞增殖的作用（P〈0．01）；能诱导Hela细胞凋亡；YH-16能有效抑制裸鼠皮下移植瘤的生长（P〈0.05）；YH-1615mg／kg组的肿瘤MVD计数较对照组和其它治疗组明显降低（P〈0．05）。结论：YH-16具有抑制宫颈癌Hela细胞及其皮下移植瘤生长的作用。     

原核表达系统中 HPV16 L1蛋白的表达与纯化

为了建立HPV16L1蛋白原核表达系统系统的纯化方法，纯化目的蛋白，我们构建了pGEX4T-HPV16L1表达质粒。在大肠杆菌BL21表达系统中表达，经过包涵体提取，8M尿素溶解，分级透析除去尿素，亲和层析进行提纯。结果,HPV16L1蛋白在原核表达系统以不溶性包涵体形式存在，通过本病方法可以获得纯化的HPV16L1蛋白，为HPV16L1的应用研究打下了基础。     

超声成像在甲状腺多发结节性病变诊断中的应用

甲状腺多发结节性病变在临床上并不少见，发病原因不同，治疗方法也不同，我们应用二维超声和彩色多普勒血流成像仪(CDFI)对42例甲状腺多发结节患者进行检查，并结合声像图及血流信号的分析进行鉴别诊断，以期提高诊断率，进一步指导临床治疗。     

钩端螺旋体外膜蛋白LipL32的重组表达及在ELISA检测中的初步应用

目的 构建L32—pQE32重组质粒，诱导表达重组钩端螺旋体外膜脂蛋白LipL32，建立以重组外膜蛋白为基础的抗体间接ELISA检测方法。方法 采用PCR法从钩端螺旋体DNA中获取编码LipL32的基因片段。构建重组克隆载体pGEM—T／L32和表达载体L32—pQE32。转化受体菌E．coliDH5α和E．coliM15，IPTG诱导表达重组LipL32蛋白。Ni—NTA亲和层析纯化重组LipL32蛋白。以纯化的重组LipL32蛋白为抗原。特异的钩体抗血清进行ELISA实验。结果 扩增出约750bp的LipL32成熟蛋白基因。LipL32基因插入pQE32表达载体。表达产物6个组氨酸与LipL32蛋白的融合蛋白相对分子量约为31kDa。与预期27．6kDa大小一致。SDS-PAGE电泳显示：LipL32蛋白主要以包涵体形式表达。ELISA显示LipL32蛋白能与钩体抗血清特异结合。方阵滴定试验确定以100ng／孔包被酶标板，酶标抗体稀释度1：20000作为工作浓度。结论 LipL32蛋白能在大肠杆菌中表达，Ni—NTA亲和层析可有效纯化重组LipL32蛋白。重组LipL32蛋白具有结合活性。初步建立了以重组LipL32蛋白为抗原的钩端螺旋体抗体间接ELISA检测方法。     

凋亡抑制基因Survivin在宫颈癌中的表达及其生物学特性

目的:研究表明抗凋亡基因Survivin在恶性肿瘤中表达增高,故探讨Survivin基因在宫颈癌中的表达与生物学特性的关系,为预测宫颈癌的预后提供实验依据。方法:研究于2001-03/2003-07在哈尔滨医科大学分校附属医院妇产科和第三附属医院妇科完成。应用RT-PCR的方法检测51例宫颈癌组织及10例正常宫颈组织Survivin的表达。结果:Survivin蛋白表达阳性率随宫颈癌的病理分级及临床分期的增高而表达增强。淋巴结转移组阳性率为86.2%,高于无淋巴结转移组的阳性率(45.4%),二者差异有显著性意义(P<005)。结论:Survivin基因在宫颈癌中高表达,与癌组织分化程度、临床分期、淋巴结转移呈正相关,与病理类型无关。可作为判断宫颈癌发生、发展、转移等生物学行为的一个指标。     

丝裂原活化蛋白激酶通路在妇科肿瘤中的研究进展

丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)信号通路是真核细胞介导细胞外信号到细胞内反应的重要信号转导系统,调节着机体细胞的生长、分化、分裂、死亡以及细胞间的功能同步化等多种过程.综述近年来MAPK信号通路的研究进展,并重点论述MAPK信号通路与妇科肿瘤细胞癌变和转移的关系及其分子机制,以及MAPK抑制剂在妇科肿瘤防治方面的临床应用前景.     

子宫颈鳞状细胞癌细胞外间质胶原重构的研究

目的：通过对不同分化程度的子宫颈鳞状细胞癌细胞外间质（ＥＣＭ）胶原蛋白的表达进行检测,探讨胶原重构与癌细胞生长及浸润的关系。方法：应用双重免疫荧光染色技术,对正常人及不同分化程度的子宫颈鳞状细胞癌病人子宫颈石蜡包埋组织的Ⅰ、Ⅲ和Ⅳ型胶原表达进行检测,并应用共聚焦显微镜观察结果。结果：正常子宫颈组织中,细胞外间质内可见结构致密的Ⅰ、Ⅲ型胶原的表达,Ⅳ型胶原蛋白呈线状环绕血管、上皮下及一些间质细胞外。