c-myc反义寡核苷酸对HL-60细胞增殖及c-myc基因表达的影响

目的：观察c-myc基因反义寡核苷酸(ASODN)对HL-60细胞增殖及c-myc基因表达的抑制作用．探讨ASODN作为药物进行白血病基因治疗的可行性、方法：应用c-myc反义寡核苷酸封闭HL-60细胞c-myc基因、RTPCR方法检测该基因表达抑制情况．流式细胞仪进行细胞周期分析,倒置显微镜观察细胞形态变化．绘制细胞生长曲线,MTT法检测细胞增殖状态。结果：c-myc基因反义寡核苷酸转染HL-60细胞后,c-myc基因表达明显受抑;S期细胞比值由55.6％降至16．7％;细胞生长受抑,增殖能力减弱,其抑制作用具有序列特异性及剂量依赖性。结论c-myc基因反义寡核苷酸对HKL-60细胞增殖及c-myc基因的表达具有明显的抑制作用,有望成为抑制白血病细胞增殖的核酸药物。     

雷公藤多甙对局灶性脑缺血再灌注大鼠脑组织单胺类递质含量的影响

目的：观察雷公藤多甙（TWP）对大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤脑组织单胺类神经递质含量的影响.方法：Wistar大鼠60只,随机均分为6组.假手术组、缺血再灌注组每d灌胃生理盐水,尼莫地平（Nim）组、雷公藤多甙高、中、低剂量组,分别给予Nim 10 mg/kg,TWP 45 mg/kg、30 mg/kg、15 mg/kg,灌胃给药,1次/d,连用5 d.末次给药后1 h,采用线栓法制作大鼠大脑中动脉局灶性缺血再灌注模型,用荧光分光光度计测定缺血2 h再灌注1 h时各组大鼠大脑皮层及纹状体去甲肾上腺素（NE）、多巴胺（DA）、5-羟色胺（5-HT）含量.结果：缺血再灌注组大鼠大脑皮层及纹状体NE、DA、5-HT含量均较假手术组降低;与缺血再灌注组比较,雷公藤多甙各组及尼莫地平组大鼠大脑皮层及纹状体NE、DA、5-HT含量均升高（P＜0.05）.结论：雷公藤多甙可减少缺血再灌注期间单胺类神经递质的释放.     

小鼠乳腺组织中组织型纤溶酶原激活剂乳腺特异性表达载体的瞬时表达

目的：验证所构建的组织型纤溶酶原激活剂(tPA)乳腺特异性表达载体pWTA能否在小鼠乳腺组织中瞬时表达。方法：采用直接注射法将pWTA DNA、pWTA DNA／脂质转染胺试剂Lipofectamine^TM2000复合物及PBS分别注射入妊娠末期小鼠乳腺组织。应用原位杂交技术,以地高辛标记的tPA cDNA为探针,观察pWTA在小鼠乳腺组织中的瞬时表达。结果：tPA表达阳性细胞散在分布于pWTA DNA及pWTA DNA／Lipofectamine^TM2000复合物注射小鼠部分乳腺腺泡,PBS注射组无阳性细胞。结论：载体pWTA能够在小鼠乳腺组织中特异性表达tPA。     

卵巢癌组织中Survivin和PCNA的表达

目的 :研究卵巢癌组织中Survivin的表达及其临床意义。方法 :用免疫组化法检测 38例卵巢癌和 1 2例卵巢良性肿瘤组织中Survivin和细胞增殖核抗原 (PCNA)蛋白的表达 ,用原位杂交 (ISH)法检测SurvivinmRNA。结果 :卵巢癌组织中SurvivinmRNA及其蛋白的阳性表达率分别为 6 8.4 2 % (2 6 / 38)、81 .5 8% (31 / 38) ,高于卵巢良性肿瘤组织中的 2 5 .0 0 % (3/ 1 2 )、33.33% (4 / 1 2 ) (P <0 .0 5或P <0 .0 1 )。其中 ,Survivin蛋白表达阳性的卵巢癌组织中PCNA标记指数明显高于Survivin蛋白表达阴性者 ,且Survivin表达与卵巢癌的临床分期、分化程度、淋巴结转移和腹水密切相关 ,但与组织学类型无关。结论 :卵巢癌组织中Survivin表达增强 ,且与细胞增殖密切相关 ;Survivin有可能成为卵巢癌的一项重要预后预测因素和治疗靶点     

Survivin与卵巢癌关系研究进展

肿瘤的发生发展与细胞凋亡、增殖调节失控密切相关。Survivin是新近发现的一种凋亡抑制基因,于1997年由Ambrosini等。利用效应细胞蛋白酶受体-1(effector cell protease receptor-1,EPR-1)的cD-NA在人类基因组库中筛选克隆,并绘制出完整的基因图谱。Survivin蛋白是凋亡抑制蛋白(inhibitor     

多重PCR检测河南汉族人群CSF1PO、TPOX、TH01基因座的多态性

目的 了解河南汉族人群中CSF1PO、TPOX、TH01基因座的遗传多态性,获得群体遗传数据。方法 对230份无血缘关系个体的抗凝血样提取DNA,应用多位点复合聚合酶链反应(PCR)扩增技术结合聚丙烯酰胺凝胶电泳分型方法调查CSF1PO、TPOX、TH01基因座在河南地区汉族群体中的基因型分布。结果 CSFlPO基因座在河南汉族人群中存在8个等位基因,25种基因型;TPOX基因座存在8个等位基因,18种基因型;TH01存在7个等位基因,15种基因型。基因型频率分布符合Hardy—Weinberg平衡,三个基因座的个体识别率分别为0．88、0．824、0．824,PIC分别为0．71、0．59、0．60,累积个体识别率为0．9963。结论 CSF1PO、TPOX、TH01基因座是进行人类群体遗传学和法医遗传学研究十分有用的遗传标记。     

胃癌微卫星DNA不稳定性和hMSH2 mRNA的表达

目的探讨胃癌微卫星DNA不稳定性与错配修复基因hMSH2mRNA表达之间的关系。方法采用PCR-变性聚丙烯酰胺凝胶电泳-银染技术,对20例胃癌及其癌旁组织D9s171、D9s1604微卫星位点杂合性缺失(LOH)进行分析,原位杂交检测27例胃癌、10例癌旁组织和19例正常胃黏膜中hMSH2mRNA的表达。结果胃癌D9s171、D9s1604微卫星位点LOH发生率(13/20)较其癌旁组织(6/20)明显增高(P<0.05);两位点与LOH发生之间存在相关性(P<0.05)。hMSH2mRNA阳性表达细胞在胃癌及其癌旁组织中为(42.1±25.9)和(99.7±16.8),较正常标本的(175.8±26.4)明显减少;不同分化程度胃癌组织间hMSH2mRNA表达阳性率不同,胃癌组织LOH(+)标本hMSH2mRNA阳性表达(25.5±10.7)较LOH(-)者(61.2±25.9)显著降低(P<0.05)。结论D9s171、D9s1604微卫星位点的LOH与胃癌的发生发展有关,胃癌中微卫星DNA不稳定性的产生可能是DNA错配修复基因hMSH2mRNA低表达所致。     

siRNA对SOM基因表达的抑制研究

目的 研究siRNA对生长抑素SOM基因表达的抑制作用.方法 根据SOM全长cDNA序列设计和合成RNA干扰的靶序列,应用RiboMAXT7体外转录合成SiKNA,并转染胃癌细胞系SGC-7901,经RT-PCR,Western blot检测SOM mRNA及蛋白质的表达水平.结果 siRNA可以特异性抑制SOM基因的表达.结论 通过体外合成sigNA可以特异性抑制SOM基因的表达,为筛选抑制SOM基因表达的有效序列研究奠定了基础.     

急性白血病ATM基因和BRCA2基因的杂合性缺失

目的：探讨急性淋巴细胞白血病（ALL）与急性非淋巴细胞白血病（ANLL）ATM基因和BRCA2基因杂合性缺失及其相互关系。方法：应用PCR－变性聚丙烯酰胺凝胶电泳－银染技术检测ATM基因D11S2179位点和BRCA2基因D13S260位点的杂合性缺失（LOH）。结果：64例ALL患者中两位点LOH发生率为18.7%；D11S2179和D11S260两位点LOH的发生频率分别为12.5%和14.0%；两位点同时发生LOH的频率为7.8%。38例ANLL患者中两位点LOH的发生率为7.9%，D11S2179和D13S260两位点的LOH发生频率分别为2.6%和5.2%。两组总发生率比较差异有显著性意义（P＜0.05）。结论：ATM基因和BRCA2基因的LOH可能参与ALL的病理发生，而与ANLL无明显相关性。     

hTERT反义寡核苷酸对HL-60细胞增殖及端粒酶活性的抑制作用

为了研究hTERT基因反义寡核苷酸(ASODN)对HL-60细胞增殖及端粒酶活性的抑制作用,并探讨HL-60细胞端粒酶活性与hTERT基因表达的关系,应用反义寡核苷酸封闭HL-60细胞hTERT基因的表达,RT-PCR方法检测该基因表达抑制情况,倒置显微镜观察细胞形态变化,MTT法检测细胞增殖状态,应用TRAP-ELISA、TRAP-PAGE方法检测HL-60细胞端粒酶活性。结果发现反义硫代寡核苷酸作用于HL-60细胞72小时后,hTERT基因表达明显受抑,细胞生长受抑,增殖能力减弱,其抑制作用具有序列特异性及浓度、时间依赖性。端粒酶活性检测显示反义寡核苷酸10、20和30μmol/L作用组OD450-690值分别为1.504±0.47、1.223±0.39,0.944±0.16,与未作用组(2.648±0.42)比较,差异有显著性(P<0.05);正义寡核苷酸20μmol/L作用组(OD450-690值为2.376±0·65)与未作用组比较,差异无显著性(P>0.05)。TRAP-PAGE检测表明hTERTASODN作用组较SODN作用组端粒酶条带明显减少,以30μmol/L作用组条带最少。结论hTERT基因反义寡核苷酸能够通过封闭hTERT基因的表达而抑制HL-60细胞增殖,下调端粒酶活性。